堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)小鼠順鉑腎損傷的保護(hù)作用

黃巨恩，謝 偉，李校堃

(1.廣西醫(yī)科大學(xué)護(hù)理學(xué)院，廣西南寧 530021;2.溫州醫(yī)學(xué)院生物與天然藥物研究院，浙江溫州 325027)

順鉑(cDDP)能進(jìn)入癌細(xì)胞的細(xì)胞核，干擾DNA的復(fù)制，是一種廣譜、有效的抗癌藥物，其療效與用藥劑量成正比，但cDDP的嚴(yán)重腎毒性是限制臨床應(yīng)用的主要因素，其腎毒性機(jī)制仍不十分清楚。本研究是在堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)對(duì)順鉑所致的腎小管上皮細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用的基礎(chǔ)上［1］，進(jìn)一步開展在體研究。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型及分組處理 將32只♂昆明小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、順鉑組、bFGF 1組、bFGF 2組，每組8只。各組分別處理如下:① 順鉑組:按10 mg·kg-1順鉑腹腔注射1次;② bFGF 1組、bFGF 2組:腹腔注射順鉑1次，每天分別以12 μg·kg-1和24 μg·kg-1bFGF 腹腔注射 1 次，連續(xù) 5 d;③空白對(duì)照組:腹腔注射等量NS。

1.2 病理學(xué)觀察 左側(cè)腎臟前部相同部位取2 mm3的腎組織，制作石蠟切片，HE染色，光鏡觀察。

1.3 血清學(xué)檢查 所有的動(dòng)物在經(jīng)過處理后的5 d采血，檢測(cè)血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)濃度。

1.4 生化和酶學(xué)檢測(cè) 取一側(cè)腎臟做組織勻漿，檢測(cè)MDA、NO 含量，GSH-Px、SOD 活性。

2 結(jié)果

2.1 光鏡觀察 順鉑組與空白對(duì)照組比較，腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)局灶性水腫、變性壞死，有些腎小管中可見管型，腎小球形態(tài)無明顯改變;而bFGF組的腎小管上皮細(xì)胞僅出現(xiàn)輕微腫脹，變性壞死較少，腎小管形態(tài)良好。

2.2 血清學(xué)檢查 順鉑腎損傷時(shí)，血中BUN、Scr含量明顯升高;bFGF可使之下降，但與空白對(duì)照組比較，兩項(xiàng)指標(biāo)差異仍有顯著性，說明腎功能有所恢復(fù)，但未達(dá)到正常對(duì)照組水平。bFGF 1組與bFGF 2組比較，差異無顯著性(Tab 1)。

Tab 1 BUN，Scr concentrations of serum in all groups ± s，n=8)

Tab 1 BUN，Scr concentrations of serum in all groups ± s，n=8)

*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs control group;▲P ＜0.05 vs cDDP group

Group BUN/mmol·L-1 Scr/μmol·L -1 Control 5.75±0.84 10.50±3.89 cDDP 15.81±4.13＊＊ 22.63±5.34＊＊bFGF 1 10.66±3.91＊▲ 16.13±3.04＊▲bFGF 2 11.69±5.03＊▲ 17.50±5.98＊▲

2.3 腎組織的生化和酶學(xué)檢測(cè) 順鉑腎損傷后，腎組織內(nèi)NO、MDA含量明顯升高，GSH-Px、SOD活性明顯降低;bFGF可使腎組織內(nèi)NO、MDA含量降低，而GSH-Px和SOD活性升高;bFGF 1組與bFGF 2組之間比較，差異無顯著性(Tab 2)。

Tab 2 NO，MDA，GSH-Px，SOD levels of renal tissues in all groups( ± s，n=8)

Tab 2 NO，MDA，GSH-Px，SOD levels of renal tissues in all groups( ± s，n=8)

*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs control group;▲P ＜0.05，▲▲P ＜0.01 vs cDDP group

Group NO/μmol·g-1Pro MDA/μmol·g-1Pro GSH-Px/U·mg-1Pro SOD/U·mg-1Pro Control 0.77±0.36 83.00±2.91 272.69±32.82 35.62±1.99 cDDP 1.87±0.51＊＊ 145.24±3.96＊＊ 180.02±25.59＊＊ 19.68±5.56＊＊bFGF 1 1.28±0.38＊▲ 120.65±6.47＊＊▲▲ 227.33±51.94＊▲ 26.77±6.09＊▲bFGF 2 1.26±0.45＊▲▲ 117.52±5.24＊＊▲▲ 221.22±40.05＊▲ 27.52±8.40＊▲

3 討論

本研究中，我們利用cDDP建立小鼠順鉑腎損傷的動(dòng)物模型，一次性注射10 mg·kg-1順鉑，于實(shí)驗(yàn)5 d血中BUN、Scr升高，均高于空白對(duì)照組水平(P＜0.01);病理切片顯示小鼠腎小管呈局灶性水腫、變性、壞死;GSH-Px和SOD活性降低，而NO和MDA水平升高，差異有顯著性(P＜0.05)，復(fù)制動(dòng)物模型成功。自由基損傷以及細(xì)胞酶活性的改變?cè)赾DDP等腎損傷中發(fā)揮重要作用，而bFGF可拮抗順鉑腎損傷所引起的GSH-Px，SOD酶活性下降［2-3］。bFGF組的NO、MDA水平比模型組下降(P＜0.05或0.01)，但比空白對(duì)照組高，也就是說，NO、MDA水平?jīng)]有能夠恢復(fù)到正常對(duì)照組水平。其原因可能因?yàn)樽杂苫卸喾N形式，而GSH-Px、SOD等抗氧化酶可能只能對(duì)抗其中的一些自由基形式(如羥自由基、超氧陰離子);NO與超氧化物陰離子反應(yīng)的速率比SOD清除超氧化物陰離子的速率快得多，故NO可與SOD競(jìng)爭(zhēng)超氧化物陰離子生成超氧亞硝基陰離子，超氧亞硝基陰離子又通過使蛋白質(zhì)中的酪氨酸硝基化，抑制SOD活性，造成惡性循環(huán)。所以，雖然bFGF使GSH-Px、SOD等酶的活性有所恢復(fù)，但仍不能完全阻斷自由基產(chǎn)生的通路，使NO、MDA完全被清除［1，4］。

［1］劉麗敏，劉華鋼，黃巨恩，等.酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)順鉑腎損害保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.解剖學(xué)研究，2006，28(4):243-6.

［1］Liu L M，Liu H G，Huang J E，et al.Protective effects of aFGF on renal tubular epithelial cells damaged by cisplatin in vitro［J］.Anat Res，2006，28(4):243-6.

［2］黃巨恩，王慧杰，劉華鋼，等.酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)慶大霉素誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2007，23(11):2455-8.

［2］Huang J E，Wang H J，Liu H G，et al.Protective effects of aFGF on gentamicin-induced injuries of rats′renal tubular epithelial cells in vitro［J］.Chin Pharmacol Bull，2007，23(11):2455-8.

［3］劉慰華，黃河清，鄧艷輝，等.黃連素對(duì)糖尿病腎損傷大鼠腎功能、氧化應(yīng)激、腎臟醛糖還原酶的影響［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2008，24(7):955-9.

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［4］洪炳哲，王麗萍，高立建，等.bFGF激活tyrosine kinase/PI3K/PLCγ增加血管內(nèi)皮細(xì)胞［Mg2+］i的研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2008，24(1):50-3.

［4］Hong B Z，Wang L P，Gao L J，et al.bFGF increases intracellular free［Mg2+］i by tyrosine kinase/PI3K/PLCγ in HUVECs［J］.Chin Pharmacol Bull，2008，24(1):50-3.