Leu1p參與調(diào)節(jié)V-ATP酶的活性

高堂杰，張震宇

(江南大學糖化學與生物技術(shù)教育部重點實驗室,江蘇無錫，214122)

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Leu1p參與調(diào)節(jié)V-ATP酶的活性

高堂杰，張震宇

(江南大學糖化學與生物技術(shù)教育部重點實驗室,江蘇無錫，214122)

摘要：RAVE(regulator of the H+-ATPase of the vacuolar and endosomal membrane)由Rav1p、Rav2p和Skp1p3個亞基組成，是V-ATP酶活性調(diào)節(jié)機制中一個關(guān)鍵的多亞基復合物調(diào)節(jié)因子； Leu1p能夠與RAVE相互作用。通過融合PCR、同源重組分別構(gòu)建了釀酒酵母BY4742的Rav1、Rav2、Leu1和Vma2缺陷型菌株。進一步研究重組菌株對pH及CaCl2的耐受能力發(fā)現(xiàn)：Leu1缺陷型菌株(3-異丙基蘋果酸異構(gòu)酶(Leu1p)缺失)的生長狀況與Rav1、Rav2 缺陷型菌株的生長狀況基本一致，表明RAVE對V-ATP酶的活性調(diào)節(jié)極有可能需要通過與Leu1p結(jié)合才能實現(xiàn)。筆者所在實驗室為進一步研究RAVE與Leu1p的相互關(guān)系及其對V-ATP酶的活性調(diào)節(jié)提供了重要依據(jù)。

關(guān)鍵詞：V-ATP 酶；RAVE；Leu1p；同源重組；融合PCR

V-ATP酶(vacuolar ATPase)又稱液泡ATP酶，廣泛存在于生物的細胞膜和細胞器膜中。它能夠通過水解ATP產(chǎn)生的能量來轉(zhuǎn)移質(zhì)子，從而調(diào)節(jié)細胞內(nèi)外的pH，使細胞處于一個相對穩(wěn)定的pH環(huán)境[1]；同時，V-ATP酶擔負著調(diào)節(jié)細胞內(nèi)部分離子濃度的功能，如Ca2+、Zn2+等[2-3]。V-ATP酶的質(zhì)子泵效應與生物體內(nèi)的許多生化反應及代謝活動息息相關(guān)，同時也與一系列疾病(如癌癥、艾滋等)的產(chǎn)生與治療有關(guān)[4-6]。目前，醫(yī)學人員已越來越多地以V-ATP酶為目標來研發(fā)靶向性藥物。V-ATP酶由V1和V0兩部分組成。V1位于細胞質(zhì)當中，其主要功能是水解ATP；V0鑲嵌于細胞膜當中，負責轉(zhuǎn)移質(zhì)子。單獨的V1、V0是沒有活性的，只有當二者結(jié)合形成完整的V-ATP酶，才能發(fā)揮各自的功能，共同起到調(diào)節(jié)細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用[7-9]。……