磷脂酶D高產菌株的原生質體紫外誘變選育

楊蘭蘭，張小里，封娟娟，朱南南，趙彬俠

(西北大學化工學院，陜西西安710069)

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磷脂酶D高產菌株的原生質體紫外誘變選育

楊蘭蘭，張小里，封娟娟，朱南南，趙彬俠

(西北大學化工學院，陜西西安710069)

摘要：為了獲得磷脂酶D高產菌株，由鏈霉菌野生菌株LD0501出發研究原生質體的制備和再生條件，建立原生質體紫外誘變篩選方案。采用酶解法制備原生質體，用紫外線對原生質體誘變，TLC檢測突變株產磷脂酶D活力。原生質體的適宜條件：種子培養基中甘氨酸質量濃度5 g/L，菌齡72 h，用3 mg/mL的溶菌酶在30 ℃下酶解75 min。通過原生質體誘變篩選，得到1株高產菌株，磷脂酶D水解活力達4.29 U/mL，提高幅度為180.4%。該方法有效改善了鏈霉菌野生菌株原生質體的制備效果，紫外誘變篩選顯著提高了磷脂酶D的活力，高產突變株具有較好的穩定性。

關鍵詞：磷脂酶D；原生質體；紫外誘變；篩選

磷脂酶D(phospholipase D，PLD)普遍存在于生物界中，是重要的細胞磷脂代謝酶，通過磷酸二酯鍵，催化水解卵磷脂(PC)產生磷脂酸(PA)和游離膽堿。PLD亦能在醇類物質存在下催化磷脂酰基轉移反應制備(合成)磷脂或稀有磷脂[1-2]。磷脂在食品工業中起到乳化、濕潤和分散作用，在醫藥中是抗腫瘤藥物制劑的重要輔料。鏈霉菌屬微生物是常用磷脂酶D的生產菌株，但野生菌株酶活較低(<1.5 U/mL)，因此，通過篩選及改良獲得高產菌株是提高磷脂酶D活力的重要途徑。

目前，國外利用微生物發酵生產PLD的研究報道較多，研究者通過野生菌株篩選、基因重組等方法篩選高產菌株，已經取得了一定的效果[3]。與之相比，國內研究磷脂酶D菌株選育的報道較少，文獻報道的磷脂酶D高產菌株酶活為3～3.5 U/mL[4]。……