一株產ε-聚賴氨酸的白色鏈霉菌遺傳轉化體系

孫朱貞，馮小海，許召賢，曹長虹，徐　錚，徐　虹

(1. 南京工業大學材料化學工程國家重點實驗室，江蘇南京210009;

2. 南京工業大學食品與輕工學院，江蘇南京211800)

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一株產ε-聚賴氨酸的白色鏈霉菌遺傳轉化體系

孫朱貞1,2，馮小海1,2，許召賢1,2，曹長虹1,2，徐錚1,2，徐虹1,2

(1. 南京工業大學材料化學工程國家重點實驗室，江蘇南京210009;

2. 南京工業大學食品與輕工學院，江蘇南京211800)

摘要：為了更好地研究ε-聚賴氨酸(ε-PL)生物合成的分子機制以及構建ε-PL高產基因工程菌株，擬建立一株ε-PL產生菌株Streptomyces albulus PD-1的遺傳轉化體系。通過對培養基類型、孢子預萌發處理、培養基中Mg(2+)濃度等條件進行考察，以Escherichia coli ET12567(pUZ8002)為供體菌，成功地將pIB139質粒導入S. albulus PD-1中。結果表明：質粒轉化效率達到(3±0.4)× 10(-6)個接合轉化子/受體。接合子傳代實驗和PCR結果發現，pIB139質粒能夠穩定整合在S. albulus PD-1染色體的attB位點上。本研究建立了一株ε-PL生產菌株的遺傳轉化體系，為從分子水平上研究ε-PL的合成及ε-PL高產菌株的構建奠定了基礎。

關鍵詞：ε-聚賴氨酸；白色鏈霉菌；遺傳轉化體系；pIB139

ε-聚賴氨酸(ε-poly-L-lysine，ε-PL)是由L-賴氨酸的α-氨基和ε-羧基通過酰胺鍵連接而成的同型聚氨基酸。由于其良好的抑菌性和生物安全性，ε-PL已經作為一種天然的食品及化妝品防腐劑被多個國家批準使用[1-2]。2014年我國批準ε-PL及其鹽酸鹽作為新型食品添加劑可以在食品行業中使用[3]，極大地推動了國內ε-PL的生產和研究工作。

在工業上，ε-PL主要是通過放線菌發酵獲得。自1977年第1株ε-PL產生菌株被篩選出來，研究者們通過新型菌株篩選、高效菌株誘變、發酵體系優化等措施大大提高了微生物合成ε-PL的效率[4-6]，但是關于ε-PL合成機制的研究卻較少。……