豬硒蛋白P基因克隆、鑒定及組織mRNA相對表達量分析

湯加勇　趙　華?　何愛華　周繼昌　賈　剛　劉光芒　陳小玲　蔡景義（.四川農業大學動物營養研究所，成都630；.深圳市慢性病防治中心分子生物學實驗室，深圳5800）

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豬硒蛋白P基因克隆、鑒定及組織mRNA相對表達量分析

湯加勇1趙華1?何愛華1周繼昌2賈剛1劉光芒1陳小玲1蔡景義1
（1.四川農業大學動物營養研究所，成都611130；2.深圳市慢性病防治中心分子生物學實驗室，深圳518020）

摘要:本試驗旨在克隆、鑒定豬硒蛋白P基因（Sepp1），并探明其在豬不同組織中的mRNA相對表達量，為以豬為模型研究硒蛋白P（SelP）的功能奠定基礎。根據表達序列標簽（EST）序列設計引物，利用cDNA末端快速克?。?′-RACE）技術從豬肝臟總RNA中擴增出含開放閱讀框（ORF）至polyA片段，然后與EST序列進行拼接；采用熒光定量PCR技術考察Sepp1在豬9個組織中的mRNA相對表達量。結果顯示：1）擴增出共1 707 bp的片段，測序后與EST拼接獲得了2 109 bp的豬Sepp1序列，并提交至NCBI GenBank數據庫，序列號為EF113596.2；該基因1 170 bp的ORF編碼區和對應的氨基酸殘基與人相應序列分別有83.72%和75.64%序列同源性，其編碼390個氨基酸，含有14個硒代半胱氨酸（Sec）殘基，分別位于第59、267、286、309、311、327、339、352、354、361、376、378、385和387位。2）Sepp1 mRNA在豬組織中廣泛分布，在肝臟中具有最高分布，依次為甲狀腺＞腎臟＞睪丸＞下丘腦＞脾臟＞垂體＞心臟＞肌肉。本試驗成功克隆、鑒定了豬Sepp1，檢測了其在豬不同組織中表達分布情況，為其進一步以豬為模型探討其功能奠定了基礎。

關鍵詞:豬；Sepp1；克?。粺晒舛縋CR

硒（Se）是哺乳動物新陳代謝所必需的基本微量元素，其在動物的健康生長、繁殖等方面起著重要作用。Se在動物體內主要以硒蛋白的形式來發揮其多種生理功能，而硒蛋白又是一種特殊的蛋白質，它是Se以硒代半胱氨酸（selenocysteine，Sec）形式結合到蛋白質上的形成存在。……