SLC1A5在結直腸癌中的表達及與其轉移的關系

劉　婷

作者單位:101200 北京市平谷區醫院

SLC1A5在結直腸癌中的表達及與其轉移的關系

劉婷

作者單位:101200 北京市平谷區醫院

【摘要】目的分析溶質載體家族1成員5(SLC1A5)蛋白在原發性結直腸癌組織和癌旁正常黏膜組織中的表達情況及其與結直腸癌臨床病理參數的關系。方法應用組織芯片和免疫組化的方法,檢測80例原發性結直腸癌組織和35例癌旁正常組織中SLC1A5的表達，分析SLC1A5表達與結直腸癌臨床病理參數的相關性。結果SLC1A5在80例結直腸癌患者癌組織標本中的陽性表達率(88.75%)高于35例癌旁正常組織中陽性表達率(42.86%)(P<0.05)。SLC1A5高表達與結直腸癌患者是否存在遠處轉移有關(P<0.05)。但癌組織中SLC1A5的表達水平與患者性別、年齡、T分期、N分期和分化程度無明顯相關性(P>0.05)。結論SLC1A5可能是一個促進腫瘤遠處轉移的因子。

【關鍵詞】溶質載體家族1成員5；結直腸腫瘤；腫瘤轉移

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:047～049)

結直腸癌是消化系統常見的惡性腫瘤，近年來其發病率快速增長，嚴重危害人類及健康。因此，尋找到一種能夠早期診斷遠處轉移的標記物對轉移性結直腸癌的綜合治療非常重要的。

溶質載體家族1成員5(SLC1A5)，是氨基酸轉運系統中重要的成員。多位學者在研究中發現SLC1A5在多種腫瘤中呈異常高表達[1-4]，并通過反義RNA干擾、化學藥物阻斷等手段取得了可喜的實驗結果[5]。目前，有關SLC1A5在結直腸癌方面的文獻報道尚少，因此，我們采用免疫組化及組織芯片檢測方法檢測結直腸癌組織中的表達情況，并分析其與結直腸癌臨床參數及預后的相關性，初步探討其在結直腸癌發生發展的作用。

1材料與方法

1.1　病例資料

隨機收集北京市平谷區醫院2001年-2006年結直腸癌病例組織石蠟標本80例，其中結直腸癌組織80例，癌旁正常組織35例(距離腫瘤邊緣5cm以上)。所有腫瘤組織標本和癌旁正常黏膜組織通過HE染色被證實。80例腫瘤患者中，男性45例，女性35例；年齡30～70歲，平均年齡60.07歲；淋巴結轉移陽性34例，淋巴結轉移陰性46例；無遠處轉移65例，遠處轉移15例，其中肝轉移10例，肺轉移2例，骨轉移2例，顱骨轉移1例。80例結直腸癌中Ⅰ期23 例，Ⅱ期24 例，Ⅲ期18 例，Ⅳ期15 例(按照2009年國際抗癌聯盟制定的第7版TNM分期標準)。所有患者均未接受過術前放化療，臨床病理及隨訪資料包括性別、年齡、分化程度、TNM分期[根據腫瘤(T)、淋巴結(N)和轉移(M)情況的分類法]。

1.2　主要儀器及試劑

ALPHELYS組織芯片制作儀；LeiCaRM2245型切片機；兔抗人SLC1A5抗體(BIOSS,bs-0473R)；HRP-Peroxide-DAB試劑盒(DACO)。

1.3　方法

1.3.1制作組織芯片首先選擇所需結直腸癌病理存檔蠟塊，根據HE切片形態學觀察，確定具有代表性的病變部位并標記。每個標本取2個點，直徑1 mm，按照組織芯片制作儀操作流程，制成組織芯片蠟塊，每個芯片蠟塊含12×8個點。將芯片蠟塊切片，厚度4 μm，裱于載玻片上。

1.3.2免疫組化染色應用SABC免疫組織化學法染色，組織切片經二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，3%H2O2中消除內源性過氧化酶活性，pH 6.0的檸檬酸鈉溶液中微波抗原修復。滴加適量SLC1A5抗體(濃度1∶200)4 ℃過夜，按DACO試劑盒說明進行染色，DAB顯色和蘇木精復染，用已知陽性片做陽性對照，以PBS代替一抗做陰性對照。

1.3.3結果判讀SLC1A5染色的評分由2個獨立和有經驗的病理科醫生判讀。陽性表達為細胞質膜染色，主要表現為胞質及胞膜內非均勻棕黃色顆粒。0分為不著色或弱著色，陽性比率為<10%；1分為弱著色，陽性比率為10%～40%；2分為中等著色，陽性比率為40%～70%；3分為強著色，陽性比率>70%。

1.4　統計學分析

應用SPSS 16.0軟件進行分析。采用χ2檢驗分析SLC1A5在正常黏膜組織和癌組織中的表達差異以及SLC1A5表達水平和各項臨床參數的相關性。

2結果

2.1　SLC1A5在正常黏膜和結直腸腺癌中的表達

SLC1A5在正常黏膜和癌組織中表達均位于胞質膜，未見明顯胞核著色。大部分癌組織顯示SLC1A5強表達，為2~3分，而大部分正常黏膜顯示弱表達，為0~2分。>0分為陽性表達。80例結直腸癌組織中，71例陽性表達；35例癌旁正常黏膜組織中，25例陽性表達。統計學分析發現，2組SLC1A5蛋白表達水平有明顯差異，SLC1A5在結直腸癌組織中的表達率(88.8%)明顯高于癌旁正常黏膜組織(71.4%)，見表1。

2.2　SLC1A5表達與結直腸癌臨床病理參數的相關性分析

SLC1A5表達與結直腸癌遠處轉移(P<0.05)呈正相關。然而，腫瘤組織中SLC1A5表達量與患者性別、年齡、T分期、N分期和分化程度無明顯相關性(P>0.05)，見表1。

表1　SLC1A5蛋白表達與結直腸癌臨床病理參數的關系/例

15例發生遠處轉移的結直腸癌標本中，SLC1A5均為陽性表達；在65例未發生遠處轉移的結直腸癌標本中， 55例SLC1A5陽性表達，發生遠處轉移者其陽性表達率比未發生遠處轉移者升高，這表明與未發生遠處轉移患者相比，發生遠處轉移的癌組織中SLC1A5蛋白表達水平更高。

3　討論

近些年，氨基酸在腫瘤中的作用逐漸成為熱點。谷氨酸胺是人體內含量最豐富的游離氨基酸和重要的代謝前體，在核苷酸、蛋白以及谷胱甘肽合成中發揮重要作用。最新的研究發現谷氨酰胺具有促進腫瘤增殖[6]、侵襲[7-8]，刺激腫瘤組織新血管形成[9]等作用。而作為谷氨酰胺的最主要轉運載體，SLC1A5在腫瘤中的作用自然也備受關注。Yuneva等[10]研究發現，通過阻斷SLC1A5限制谷氨酰胺攝入可引起依賴MYC的細胞凋亡。Fuchs等[1]研究發現，在正常肝組織谷氨酰胺的主要載體是系統N；然而在肝癌組織中，谷氨酰胺主要轉運載體卻轉變成SLC1A5，而且轉運效率是系統N在正常組織的3倍。Kim等[2]通過對702例乳腺癌標本進行組織芯片和免疫組化對比分析，發現SLC1A5在乳腺癌中呈異常高表達。Wasa等[3]在神經細胞瘤細胞株的研究也發現SLC1A5呈高表達，并證實Na+依賴型谷氨酰胺攝入占該系細胞總谷氨酰胺攝入量的95%以上。另外，近些年發現SLC1A5高表達的腫瘤還有前列腺癌、肺癌等。Fuchs等[4]利用給予EST信息的數據庫對腫瘤差異表達基因進行了篩選，共選取了15種常見組織類型的腫瘤組織及其對應的正常組織的EST文庫，通過軟件對比，發現SLC1A5在很多常見腫瘤表達中都有明顯上調。

我們通過免疫組化的方法檢測80例癌組織和35例癌旁正常的黏膜組織中SLC1A5的表達，其陽性率為分別為88.75%及42.86%，結果表明SLC1A5在結直腸癌患者的癌組織中表達較癌旁正常組織中升高。進一步分析SLC1A5的表達情況和各個臨床參數的關系顯示：在遠處轉移的結直腸癌組織中，檢測到SLC1A5高表達的頻率較沒有遠處轉移患者的腫瘤組織標本中表達量高(P<0.05)。這表明SLC1A5可能在腫瘤的轉移過程中扮演了非常重要的角色，這一現象和之前報道的在前列腺癌、乳腺癌中的研究一致。通過檢測術后結直腸癌組織中SLC1A5的表達情況，可能對腫瘤的惡性程度做出判斷和預測。

目前結直腸癌診療面臨的最大的挑戰之一是早期診斷結直腸癌的遠處轉移以及在此基礎上進行的是否需行輔助治療的判斷[11]。對于早期的結直腸癌患者，僅僅需要外科手術治療[12]；而對于進展期的患者，除了手術治療外還需要化療或者放療等輔助性治療提高患者生存期[13]。我們的研究發現SLC1A5在轉移的結直腸癌中表達是明顯升高，這一現象預示SLC1A5的表達升高和結直腸癌轉移密切相關。對于臨床未發現遠處轉移，而腫瘤組織中SLC1A5高表達的結直腸癌患者我們需要更為密切的關注以及更多的輔助檢查是否存在遠處轉移。

綜上所述，高表達的SLC1A5和結直腸癌的遠處轉移相關，腫瘤組織中高表達SLC1A5的結直腸癌患者可能需要更多的輔助性治療和更為密切的隨訪。但是，本研究中發生遠處轉移標本例數偏少，可能會帶來統計學上的誤差，SLC1A5能否作為臨床上治療選擇標記為及其促進結直腸癌轉移的機制仍需要進一步的實驗研究證實。

參考文獻

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[3]Wasa M,Wang HS,Okada A.Characterization of L-glutamine transport by a human neuroblastoma cell line〔J〕.Am J Physiol Cell Physiol,2002,282(6):C1246-C1253.

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Expression of SLC1A5 in Colorectal Cancer Tissues and its Correlation with Distant

Metastasis in Colorectal Cancer Patients

LIUTing.BeijingPingguHospital,Beijing,101200

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression of SLC1A5 in primary colorectal cancer and adjacent normal mucosa,and to analyze the relationship between SLC1A5 expression and clinicopathological parameters.MethodsThe expression of SLC1A5 in carcinoma tissues and normal mucosa was examined by a set of tissue microarrays and the method of immunohistochemistry.The potential relationship between SLC1A5 expression and clinicopathological features was also analyzed.ResultsThe positive expression rate of SLC1A5 in colorectal cancer tissues was 88.75%,which was significantly higher than in normal tissue(P<0.05).The expression rate in the patients with metastasis was also significantly higher than that in those with locally advanced disease(P<0.05).However,no correlation between SLC1A5 expression and age at surgery,sex,the depth of invision,lymph node metastasis,or differentiation grade was found(P>0.05).ConclusionSLC1A5 maybe a promotive factor in the process of distant metastasis.

【Key words】SLC1A5;Colorectal neoplasms;Neoplasm metastasis

中圖分類號：R73-36

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)01-0047-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.01.014