p53蛋白在非小細胞肺癌中表達及與其臨床特征、同步放化療療效的關系分析

劉東芳　王曉紅　劉春秋　趙洪煥　張曉斌　楊俊泉　張成俠

王建功　汪宏斌　趙　凱

作者單位:063000 河北省唐山市人民醫院

p53蛋白在非小細胞肺癌中表達及與其臨床特征、同步放化療療效的關系分析

劉東芳王曉紅劉春秋趙洪煥張曉斌楊俊泉張成俠

王建功汪宏斌趙凱

作者單位:063000 河北省唐山市人民醫院

【摘要】目的檢測p53蛋白在非小細胞肺癌患者中的表達水平，并探討其表達與臨床特征的相關性及同步放化療療效的關系。方法采用免疫組化方法，檢測100例非小細胞肺癌組織中p53表達水平，結合顯微圖像分析儀測定p53免疫組化強度，以陽性單位為定量分析單位。分析p53表達水平與患者臨床病理特征及同步放化療療效的關系。結果p53蛋白在非小細胞肺癌中陽性表達率為48%；p53表達與淋巴結轉移、遠端轉移和TNM分期均無顯著相關性；非小細胞肺癌p53蛋白表達者放化療效果顯著低于p53蛋白表達陰性患者，且p53蛋白表達與患者生存期呈負相關。結論p53表達與否影響非小細胞肺癌患者化療效果，與生存期直接相關，臨床治療時可考慮將其作為治療靶點。

【關鍵詞】非小細胞肺癌；p53；同步化療

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:026～028)

肺癌已成為世界范圍內威脅人類生存的一大殺手，其中非小細胞肺癌所占比例為70%～80%[1-2]。本文對我院近幾年收集的100例同步放化療非小細胞肺癌患者p53表達情況進行檢測，并分析其與患者臨床參數和生存期的相關性，探討p53蛋白表達與同步放化療療效的關系。

1材料與方法

1.1　一般資料

選取我院2009年9月-2014年9月收治的非小細胞肺癌患者石蠟標本100例，均有明確的病理學診斷，病理組織分型根據WHO/IASLC肺和胸膜腫瘤組織學分類(1999)標準，按2009年國際抗癌聯盟(UICC)肺癌TNM分期第7版標準對臨床分期進行分類，所有患者均采用手術和放療聯合治療手段，所有患者均無化療禁忌癥。

1.2治療方法

為便于醫生制定后期治療方案，治療前所有患者均行常規臨床分期檢查，主要包括胸部、顱腦CT或MR，腹部CT或B超，對所有患者進行全身核素掃描；所有患者行常規心電圖、血常規、尿常規、生化常規等檢查。

放療：所有患者均先行放射治療，均采取平臥式，雙手抱頭，先用熱縮體膜進行固定，然后對體表進行定點標記。采用6-MV直線加速器常規分割三維適形放療，放射劑量為2 Gy/次，1周5次，達到總劑量為60~70 Gy/6~7周。

化療：放療的第1天即開始同步化療，方案為第1~5天、第29~33天使用依托泊苷(劑量為50 mg/m2)，第1、8、29、36天使用順鉑(劑量為50 mg/m2)。為防止患者出現惡心、嘔吐等副作用，常規使用5-羥色胺受體阻斷劑等藥物。

1.3　療效評價

記錄所有患者放療結束1個月后臨床恢復情況，并囑咐患者每3個月進行1次復查。采用實體瘤客觀評價標準(RECIST)對患者治療效果進行評價，共分為4個等級：完全緩解(complete response，CR)指目標病灶全部消失達4周以上；部分緩解(partial response，PR)指基線病灶最大徑之和至少減少30%達4周以上；疾病進展(progression disease，PD)指基線病灶最大徑之和至少增加20%或出現新病灶；病變穩定(stable disease，SD)指基線病灶最大徑之和減少但并未達到PR或有增加但未達PD。此外，治療客觀有效率(objective response rate，ORR)為CR+PR兩種情況，疾病控制率(disease control rate，DCR)指CR+PR+SD。總生存期(overall survival，OS)指從治療首日至死亡日或統計日，隨訪截止2014年9月，以月為單位計算。

1.4　p53表達檢測

應用免疫組化技術檢測p53在非小細胞肺癌組織中的表達水平，病理科負責切取石蠟標本組織，厚度為4 μm，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，首先采用高溫高壓對抗原進行修復，然后自然冷卻至室溫，紗布將殘留修復液小心擦去，然后滴加二抗，孵育過夜，嚴格按照說明書并根據預實驗選擇合適的一抗濃度，滴加一抗，對照組采用磷酸鹽緩沖液(PBS)進行替代。采用萊卡顯微鏡對結果進行分析，隨機選取5個高倍鏡(×400)視野并計算平均數進行陰陽性結果判定，其中陽性表達細胞定義為細胞核染為棕黃色，且陽性細胞比例≥10%；而陰性表達細胞指細胞核內未見棕黃色染色顆粒或陽性細胞比例<10%。

1.5　統計學方法

所有數據均采用Ave±SED表達，均記錄在Excel表格，應用SPSS 16.0統計軟件進行分析。采用Spearman檢驗是否存在相關性，Log-rank分析Kaplan-Meier曲線，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1　p53蛋白表達陽性率及與臨床參數相關性分析

p53為胞內蛋白，染色顆粒位于細胞核內，免疫組化結果顯示，p53在部分非小細胞肺癌組織中呈陽性表達；統計結果顯示，100例癌組織中48例p53表達陽性，其陽性率為48%(48/100)，p53陰性52例，陰性率為52%(52/100)。p53陽性表達與淋巴結轉移、遠端轉移和TNM分期均無相關性(表1)，且差異均無統計學意義(P均>0.05)。

表1　p53蛋白表達與非小細胞肺癌臨床病理參數的關系/例

2.2　放化療短期療效客觀分析

放療結束1個月之后，對患者進行客觀療效分析，結果顯示，CR 34例，PR 32例，SD 30例，PD 4例，ORR為66%(66/100)，DCR為96%(96/100)；按照p53是否表達，將患者分為p53陽性組和p53陰性組，其中陽性組ORR為54.1%(26/48)，陰性組ORR為73.1%(38/52)，對兩組ORR進行統計分析，結果顯示，p53陰性組ORR顯著高于陽性組，且差異有統計學意義(P=0.0215)。

2.3　p53蛋白表達對非小細胞肺癌患者總體生存率影響

將100例患者按照是否表達p53分為陽性組和陰性組，并對其生存期進行分析，結果顯示，p53陽性表達組患者中位生存期為16個月，p53陰性表達組患者中位生存期為41個月；p53陽性表達組患者和陰性表達組患者平均生存期分別為20個月和42個月，對其進行統計分析結果顯示，p53陰性表達組患者生存期明顯長于陽性表達患者，差異有統計學意義(圖1)。

圖1　非小細胞肺癌患者生存曲線分析

3　討論

非小細胞肺癌已逐漸成為威脅男性和女性健康生存的一大殺手，盡管隨著醫學技術的進步和對其致病機制的深入研究，其治療已取得較大進展，但臨床部分患者對放化療不敏感，降低了患者治療效果。作為最早發現的腫瘤抑制基因，p53編碼的p53蛋白在調節細胞周期和抑制細胞癌變過程中發揮重要作用。然而，p53發生突變后不僅喪失了抑癌基因功能，反而還獲得了促進細胞惡性轉化的癌基因功能。Mayo 等研究結果顯示，p53表達異常與癌癥發生及進展密切相關，且對患者放化療效果產生較大影響，可能作為預測患者預后的一個重要指標[3]。

本研究中，我們就p53在非小細胞肺癌組織中的表達進行蛋白水平的檢測，結果顯示，100例癌組織中p53蛋白在48例中均有不同程度的表達，其陽性表達率為48%，張洪蘭等曾報道，p53蛋白在非小細胞肺癌組織中表達陽性率為44.3%[4]，這與我們的報道結果相類似。這一結果提示，p53蛋白在非小細胞肺癌組織中表達呈現群體性差異，該種差異可能直接影響患者臨床療效。我們對p53蛋白表達與非小細胞肺癌患者臨床參數進行相關性分析，結果顯示，p53蛋白患者淋巴結轉移、TNM分析和遠端轉移均無顯著相關，這與趙君等人研究報道結果相一致[5]。

本研究中，我們將患者分為p53陽性表達組和p53陰性表達組，并分析放化療效果以研究其表達與非小細胞肺癌同步放化療療效關系，結果顯示，放療結束1個月之后，100例患者中，CR為34例，PR為32例，SD為30例，PD為4例，而ORR為66%(66/100)，DCR為96%(96/100)；其中p53陽性組ORR為54.1%(26/48)，p53陰性組ORR為73.1(38/52)，p53陰性組ORR顯著高于陽性組，這與汪宏斌等人以局部晚期非小細胞肺癌患者為研究對象揭示的p53蛋白表達患者療效較差結果相一致[6]。這提示著p53蛋白表達可能與非小細胞肺癌患者生存期相關，因此，接下來我們統計分析100例非小細胞肺癌患者生存期，結果顯示，p53陽性表達組患者中位生存期為16個月，遠遠低于p53陰性表達組患者41個月中位生存期；p53陽性表達組患者和陰性表達組患者平均生存期分別為20個月和42個月，統計分析結果顯示，p53陰性表達組患者生存期明顯長于陽性表達患者，這與余輝等報道的結果相一致[7]。

綜上所述，p53蛋白在非小細胞肺癌患者中的陽性表達率為48%，雖然p53蛋白表達與患者淋巴結轉移、TNM分析和遠端轉移均無顯著相關，但是p53蛋白表達直接影響患者放化療療效，且陽性表達患者生存期顯著低于陰性表達患者，因此，臨床治療非小細胞肺癌患者時，應該探尋以p53為靶點的輔助治療手段以提高臨床療效。

參考文獻

[1]Sánchez de Cos Escuín J,Disdier Vicente C,Corral Penafiel J,et al.Overall Long-Term Survival in Lung Cancer Analyzed in 610 Unselected Patients〔J〕.Arch Bronconeumol,2004,40(6):268-274.

[2]Yano T,Okamoto T,Fukuyama S,et al.Therapeutic strategy for postoperative recurrence in patients with non-small cell lung cancer〔J〕.World J Clin Oncol,2014,5(5):1048-1054.

[3]Mayo LD,Dixon JE,Durden DL,et al.PTEN protects p53 from Mdm2 and sensitizes cancer cells to chemotherapy〔J〕.J Biol Chem,2002,277(7):5484-5489.

[4]張洪蘭，舒紅，姜衛國.PTEN、p53和P-gp在非小細胞肺癌中的表達及和預后的關系〔J〕.中國肺癌雜志,2009,12(11):1213-1216.

[5]趙君，丁衛忠，劉景義，等.SKP2、p53蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義〔J〕.現代腫瘤醫學,2009,17(3):473-476.

[6]汪宏斌，楊俊泉.局部晚期非小細胞肺癌p53蛋白表達與同步放化療療效的關系研究〔J〕.中國全科醫學,2014,17(3):282-285.

[7]余輝，吳一龍，戎鐵華，等.非小細胞肺癌組織中p53蛋白的表達對預后及術后放療療效的影響〔J〕.腫瘤研究與臨床,2006,18(1):16-18.

(編輯：吳小紅)

The Correlations between p53 Expression and Clinical Characteristics and

Chemo-radiotherapy Efficacy in Non-small Cell Lung Cancer

LIUDongfang，WANGXiaohong，LIUChunqiu，etal.Tangshanpeople'shospital，Tanshan，063000

【Abstract】ObjectiveTo investigate p53 expression in non-small cell lung cancer,and its relationships with clinical characteristics and chemoradiotherapy efficacy.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of p53 in 100 cases of non-small cell lung cancer tissues,and the expression strength was detected using micro image analyzer.The relationships between p53 expression and clinical characteristics and chemo-radiotherapy efficacy were analyzed.ResultsThe positive rate of p53 in non-small cell lung cancer was 48%;there were no correlations among p53 expression and lymph node metastasis,distant metastasis or TNM stage;NSCLC patients with p53 expression had worse chemo-radiotherapy effect than those without p53 expression,and p53 expression was negatively associated with patients' survival time.ConclusionThe status of p53 expression have effect on synchronous chemotherapy in patients with non-small cell lung cancer,and is directly related with the survival time.p53 may be represented as a promising target for non-small cell lung cancer.

【Key words】Non-small cell lung cancer； p53；Synchronous chemotherapy

中圖分類號：R734.2

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)01-0026-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.01.008

收稿日期(2015-01-20修回日期 2015-06-11)