大王棕內生真菌次級代謝產物的研究

王忠,羅都強

(河北大學藥物化學與分子診斷教育部重點實驗室，河北 保定 071002)

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大王棕內生真菌次級代謝產物的研究

王忠,羅都強

(河北大學藥物化學與分子診斷教育部重點實驗室，河北 保定 071002)

摘要：通過高效液相色譜法，正相硅膠柱色譜法、凝膠柱色譜法等分離方法對大王棕內生真菌的次級代謝產物進行分離純化，再應用NMR和MS等現代波譜分析方法對其進行結構鑒定，從中首次分離鑒定了6個化合物，分別為1’, 2’-epoxy-3’, 4’-didehydropenicillide.；丁二酸；3β- 羥基- 5α, 8α- 過氧化麥角甾- 6, 22- 二烯；ergosta- 7, 22- dien- 3β, 5α, 6α- triol；3β- 羥基- 麥角甾- 5, 7, 22- 三烯；4- 羥基苯乙酸。

關鍵詞：大王棕；化學成分；結構鑒定

大王棕也稱大王椰子，植株很高大，但是種子小的如黃豆一般[1]，大王棕樹形及其美觀好看，是一種優良的觀光綠化喬木，極其合適在西雙版納栽種，其果實富含油脂，可以作為飼料，種子也可以用作鴿子的飼料，葉子可以作為掃把，葉柄可以加工制作成牙簽[2]，具有很高的經濟價值。

1主要儀器與材料

植物內生真菌Pestalotiopsis briosiana采自海南尖峰大王棕葉子，河北大學藥物化學與分子診斷教育部重點實驗室菌種庫保藏。Bruker AM-600核磁共振儀(德國BRUKER光譜儀器公司)；Bruker Apex-Ultra 7.0 T質譜儀(德國BRUKER光譜儀器公司)；GF254薄層層析硅膠(青島海洋化工廠)；柱層析硅膠(100-200、200-300目，青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20凝膠(瑞典Amersham Biosciences公司)；

2菌株的發酵

超凈工作臺紫外照射30 min后，用接種環將植物內生真菌Pestalotiopsis briosiana 的菌種接種到改良土豆液體培養基中(10×300 mL)，將其放入雙層搖床在28 ℃，150 r/min恒溫培養7天，得到3 L種子液；按照15% (v/v)的接種量，將發酵好的種子液轉接至土豆培養基中擴大培養(共150瓶)，室溫(26℃)恒濕培養15天，得液體發酵物40L。

3提取及分離純化

將收集得到的液體發酵物放入萃取桶里，按1倍體積比加入乙酸乙酯40 L，將液體發酵產物攪碎，排除空氣，使其完全浸泡在乙酸乙酯中，總共萃取4次，兩次浸泡萃取間隔7天，合并萃取液，利用旋轉蒸發儀減壓蒸餾得浸膏123 g。

將得到123 g濃縮浸膏與123 g柱層析硅膠(60-80目)按1：1的比例充分攪拌混勻，避光室溫放置干燥成粉末狀，達到使提取物充分吸附于硅膠顆粒上的效果。然后裝柱進行加壓硅膠(200-300目)柱層析，用石油醚/乙酸乙酯系統梯度洗脫(100:0，95:5，90:10，60:10，40:10，20:10，10:10(v/v))，得到7個部分(Fr.1-7)。Fr.2(300 mg)經反復硅膠柱層析，Sephadex LH-20凝膠(CHCl3/CH3OH，1:1)過濾和重結晶，得到化合物1 (17 mg)、2(15 mg)、4(19 mg)，Fr.4(200 mg)經反復硅膠柱層析，Sephadex LH-20凝膠(CHCl3/CH3OH，CH3OH)過濾及重結晶，得到化合物3 (7 mg)、5 (11 mg)、6 (13 mg)

4結構鑒定

化合物1，C28H40O6，淡黃色晶體。1H- NMR (600 MHz, CDCl3): δH:6.93 (H, d, 8.4, H-1), 7.36 (H, d, 8.5, H-2), 5.22 (2H, s, H-7), 6.42 (1H, s, H-8), 6.87 (1H, s, H-10), 4.11 (1H, d, 1.4, H-1’), 3.32 (1H, d, 1.4, H-2’), 1.03 (2H, s, H-4’), 1.80 (3H, s, H-5’), 3.98 (3H, s, OMe-4), 2.25 (3H, s, Me-9). 13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δC: 117.56 (d, C-1), 129.42 (d, C-2), 129.85 (s, C-3), 156.22 (s, C-4), 120.98 (s, C-4a), 166.72 (d, C-5)，69.02 (t, C-7), 125.72(s, C-7a), 120.34 (d, C-8), 135.13 (s, C-9), 117.88 (d, C-10), 147.25 (s, C-11), 141.28 (s, C-11a), 151.65 (s, C-12a)，53.43 (d, C-1’), 64.66 (d, C-2’), 140.39 (s, C-3’), 115.25 (t, C-4’), 16.72 (q, C-5’), 63.10 (q, OMe-4), 20.90 (q, Me-9).上述氫譜碳譜數據與文獻[3]一致。被命名為 1’, 2’-epoxy-3’, 4’-didehydropenicillide.

化合物2, C4H6O4，白色晶體。1H- NMR (600 MHz, CD3OD):δH: 5.25 (2H, brs, -COOH), 2.70 (4H, m, H-2, 3).13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δC: 174.5 (d, C-1,4), 29.7 (t, C-2,3) ，上述NMR數據與文獻[4]對照一致。被命名為丁二酸。

化合物3，C28H44O3，無色針狀結晶。13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δC: 33.4 (t, C-1), 28.8 (t, C-2), 65.5 (d, C-3), 38.7 (t, C-4), 83.1 (s, C-5), 136.7 (d, C-6), 130.8 (d, C-7), 79.8 (s, C-8), 51.5 (d, C-9), 37.4 (s, C-10), 23.5 (t, C-11), 39.5 (t, C-12), 44.4 (s, C-13), 51.5 (d, C-14), 20.7 (t, C-15), 28.3 (t, C-16), 56.8 (d,C-17), 13.2 (q, C-18), 18.6 (q, C-19), 39.5 (d, C-20), 20.6 (q, C-21), 135.2 (d, C-22.), 132.4 (d, C-23), 42.7 (d, C-24), 32.8 (d, C-25), 20.5 (q, C-26), 19.4(q, C-27), 18.1 (q, C-28)。上述NMR碳譜數據與文獻[5]一致，故鑒定該化合物為3β- 羥基- 5α, 8α- 過氧化麥角甾- 6, 22- 二烯。

化合物4，C28H46O3，無色晶體。13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δC: 31.3 (t, C-1), 21.3 (t, C-2), 67.7 (d, C-3), 39.8 (t, C-4), 76.2 (s, C-5), 73.7(d, C-6), 118.2 (d, C-7), 142.6 (s, C-8), 44.2 (d, C-9), 34.1 (s, C-10), 22.6 (t, C-11), 37.7 (t, C-12), 44.1 (s, C-13), 55.4 (d, C-14), 23.5 (t, C-15), 28.9 (t, C-16), 56.8 (d ,C-17), 12.4 (q, C-18), 12.3 (q, C-19), 39.6 (d, C-20), 18.6 (q, C-21), 136.5 (d, C-22), 132.8 (d, C-23), 41.4 (d, C-24), 17.8 (q, C-25), 33.5 (d, C-26), 19.9 (q, C-27), 19.7 (q, C-28)。上述碳譜數據與文獻[6]數據一致，故鑒定該化合物為ergosta- 7, 22- dien- 3β, 5α, 6α- triol。

化合物5，C28H44O，無色針狀結晶。13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δC: 38.3 (t, C-1), 32.1 (t, C-2), 70.4 (d, C-3), 40.1 (t, C-4), 139.7 (s, C-5), 119.6 (d, C-6), 116.1 (d, C-7), 141.5 (s, C-8), 46.1 (d, C-9), 37.3 (s, C-10), 21.3 (t, C-11), 39.2 (t, C-12), 42.8 (s, C-13), 54.2 (d, C-14), 23.7 (t, C-15), 28.1 (t, C-16), 56.0 (d, C-17), 12.1 (q, C-18), 16.2 (q, C-19), 40.6 (d, C-20), 21.4 (q, C-21), 135.3 (d, C-22), 132.5 (d, C-23), 42.9 (d, C-24), 32.8 (d, C-25), 20.2 (q, C-26), 19.9 (q, C-27), 17.5 (q, C-28) 。上述碳譜數據與文獻[7]一致，故鑒定該化合物為3β- 羥基- 麥角甾- 5, 7, 22- 三烯。

化合物6：C8H8O3，黃色油狀。1H-NMR(600 MHz , CD3OD) δH:7.12 (2H, d, J=8.4 Hz,H-2, H-6), 6.65 (2H, d, J=8.4Hz,H-3,H-5), 3.47 (2H,s,H-7);13C-NMR (150MHz, CD3OD)δC: 127.3 (s,C-1), 131.5 (d,C-2,6), 116.5 (d,C-3,5), 157.3 (s,C-4), 41.4 (t,C-7) ,173.5 (s,C-8)。以上MNR數據與文獻[8]一致，故鑒定為4- 羥基苯乙酸。

參考文獻:

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中圖分類號:O629

文獻標志碼：A

文章編號：1671-1602(2016)08-0031-02

通訊作者簡介：羅都強(1968-)，男，河北大學生命科學學院教授，研究方向為植物化學及藥物研究開發。

作者簡介：王忠(1989-)，男，河北大學碩士研究生，研究方向為天然產物化學。