PCR檢驗在高危型人乳頭瘤病毒診斷中的應用研究

李春杰（盤錦市中心醫院檢驗科，遼寧 盤錦 124010）

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PCR檢驗在高危型人乳頭瘤病毒診斷中的應用研究

李春杰
（盤錦市中心醫院檢驗科，遼寧 盤錦 124010）

目的 分析PCR檢驗在高危型人乳頭瘤病毒診斷中的應用及價值。方法 選擇2013年7月至2015年6月之間來我院接受檢查和治療的117例人乳頭瘤病毒感染患者作為觀察對象。應用PCR與第二代雜交式捕獲法HC 2對117例患者進行臨床檢查，結合病理學結果對兩種方式的診斷準確性及特異性結果予以對比。結果 熒光PCR法相對于第二代雜交式捕獲法HC 2對于CIN-HPV以及鱗狀上皮病變的檢出率更高，差異結果具有統計學意義（P＜0.05）；此外，熒光PCR法的診斷特異性及敏感度均高于HC 2，差異結果同樣具有統計學意義（P ＜0.05）。結論 PCR檢驗在高危型人乳頭瘤病毒診斷中具有很高的應用價值，對于臨床治療方案的確定具有較高的應用價值。

PCR檢驗；HC 2；高危型人乳頭瘤病毒；CIN-HPV

人乳頭瘤病毒（HPV）感染據當前認為的引發宮頸癌及癌前病變的主要因素，且大部分宮頸上皮內瘤樣病變（CIN）伴隨有人乳頭瘤病毒感染［1］。據相關資料統計，90%以上的宮頸癌病理標本中都能夠檢出人乳頭瘤病毒DNA，在高危型感染中更為常見。因此，加強相關人群關于人乳頭瘤病毒感染的篩查與診斷，能夠在一定程度上促進宮頸疾病的防治，對于促進女性健康具有非常重要的價值［2］。臨床中高危型人乳頭瘤病毒有15種左右，主要檢查方法為HC 2。隨著技術的進步，熒光PCR在疾病診斷中產生積極作用。本文對117例人乳頭瘤病毒感染進行研究，探討PCR檢驗的臨床價值。

1　資料與方法

1.1一般資料：選擇2013年7月至2015年6月之間來我院接受檢查和治療的117例人乳頭瘤病毒感染患者作為觀察對象，患者的年齡在27～61歲，平均年齡為（34.7±6.2）歲；根據病理學結果有高度上皮內鱗狀病變患者31例、不典型鱗狀細胞特征患者49例、低度上皮內鱗狀病變37例。

1.2方法：在檢查之前，使用窺陰器將患者宮頸暴露出來，使用棉拭子對宮頸口分泌物進行擦拭，使用專用HPV宮頸刷對宮頸口進行收集，輕輕轉動4～5圈后獲得足量的上皮細胞樣本。隨后慢慢將宮頸刷取出，折斷后放入專用保存液中浸泡，標記之后送檢［4］。

PCR檢測方法：對117例患者的宮頸脫落細胞標本進行PCR檢驗，以13000轉/分的速度離心處理1 min之后，在沉淀物中加入50 μL裂解液，水浴加熱10 min后再次離心處理，去上層清液作為PCR模板。嚴格按照試劑盒上的說明書進行操作。HC 2法：首先對得到的宮頸上皮細胞標本DNA進行雙鏈解鏈處理，然后使用RNA探針進行雜交，得到的雜交體與特異性抗體結合、根據發光的強度與大小進行定量測定，計算得到雜交體的含量。HPV負荷量超過1.0 pg/mL的情況下可以判定為炎性，同樣嚴格按照說明書上的操作進行。

1.3統計分析：采用統計學軟件SPSS22.0對文中得到的數據資料進行處理，檢驗結果等計數資料均使用百分比（%）的形式表示，比較通過χ2值檢驗。以P＜0.05代表不同檢測方法之間的結果具有統計學意義［5］。

2　結 果

2.1高危型HPV陽性檢出率結果差異：病理學檢測結果中，CIN Ⅰ有35例、CIN Ⅱ有21例、CIN Ⅲ有10例，鱗狀上皮細胞病變及慢性宮頸炎患者31例；通過熒光PCR法檢測得到的CIN Ⅰ有33例（94.29%）、CIN Ⅱ有19例（90.48%）、CIN Ⅲ有10例（100%），鱗狀上皮細胞病變及慢性宮頸炎患者17例（54.84%）；應用HC 2檢驗結果顯示，CIN Ⅰ有30例（85.71%）、CIN Ⅱ有17例（80.95%）、CIN Ⅲ有10例（100%），鱗狀上皮細胞病變及慢性宮頸炎患者10例（32.26%）。熒光PCR法檢測宮頸病變的符合率為93.94%，對于炎性病變的檢出率為54.84%；HC 2對于宮頸病變的診斷符合率為86.36%，炎性病變檢出率為32.26%。對比兩組差異結果具有統計學意義（P＜0.05）。

2.2兩種方法的診斷特異性與靈敏度對比：PCR法診斷高危HPV的特異度為91.4%、靈敏度為88.3%；而HC 2的特異度與靈敏度分別為72.1%和69.6%。對比兩種方法的診斷特異性與靈敏度差異結果具有統計學意義（P＜0.05）。

3　討 論

宮頸癌是對女性健康威脅巨大的惡性腫瘤，其發病率在女性惡性腫瘤占據第二位。其中人乳頭瘤病毒感染，是造成宮頸癌的主要致病因素，有研究提示，超過99.7%的宮頸癌患者存在人乳頭瘤病毒感染［6］。根據病毒與宮頸癌之間的關系，臨床中將HPV分為高危型和低危型，可引發外生殖器濕疣以及宮頸上皮內病變。盡早發現人乳頭瘤病毒感染，加強對病毒情況的監測是防治宮頸癌的主要手段［7］。大量的臨床研究證實，第二代雜交捕獲法對于人乳頭瘤病毒DNA具有較好的檢測效果，但是該方法的價格高昂，操作程序較為繁瑣，其應用受到一定的限制。隨著技術的進步與創新，PCR則得到了更為廣泛的應用，相對于HC 2，該方法的自動化程度更高、檢測的周期較短且具有較高的特異性，能夠為疾病的診斷與治療提供科學的臨床依據［8］。

本組中，應用熒光PCR法對117例患者進行檢查，對于高危型HPV感染的診斷結果與病理學結果非常接近，對于炎性病變也具有較好的檢出率。此外，該技術手段的特異性和靈敏度均較高，對于HC 2的差異顯著，提示PCR檢驗在高危型人乳頭瘤病毒診斷中具有較高的價值，值得推廣。

［1］ 南京柱,李秀娟,楊秀,等.6319例高危型人乳頭瘤病毒核糖核酸定量檢測的結果分析［J］.標記免疫分析與臨床,2012,19（2）：74-77.

［2］ 向華國,黎國,曾錦婷,等.PCR-反向點雜交技術在女性下生殖道人乳頭瘤病毒感染分型檢測的應用研究［J］.國際檢驗醫學雜志, 2012,33（8）：916-917.

［3］ 蔡蘭蘭,李振雪,樊冰,等.人乳頭瘤病毒檢測在宮頸疾病中的診斷價值［J］.檢驗醫學與臨床,2010,7（16）：1741-1742.

［4］ 涂海健,李勵軍,謝志勇,等.高危型及低危型人乳頭瘤病毒感染在宮頸病變的分布特征［J］.分子診斷與治療雜志,2012,4（2）：100-102.

［5］ 張海平,穆會君,謝平,等.多重實時熒光PCR技術檢測高危型人乳頭瘤病毒的臨床應用分析［J］.國際檢驗醫學雜志,2013,34（17）：2256-2258.

［6］ 陳炎添,陳青龍,熊燕,等.HR-HPV DNA PCR聯合TCT檢測對宮頸癌前病變的診斷價值［J］.檢驗醫學,2013,28（6）：516-518.

［7］ 王洪珍,李峰,劉大標,等.鎮江地區女性高危型人乳頭瘤病毒感染的流行病學現狀與宮頸病變患病率調查［J］.中國婦幼保健,2014,2 9（31）：5141-5144.

［8］ 張立冬,張慧敏,劉美玲,等.細胞圖像DNA倍體分析結合高危型HPV、支原體和衣原體檢查與宮頸上皮內瘤變相關性研究［J］.中華實驗和臨床病毒學雜志,2014,28（6）：433-436.

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1671-8194（2016）20-0103-02