前列腺癌組織中SOX7及SOX9基因的表達及意義①

張　新，朱廣斌，張天宇，陳國強，劉湘彬

(1.佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154003；2.大慶油田總醫院，黑龍江 大慶 163001；3.大慶醫學高等專科學校，黑龍江 大慶 163001)

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前列腺癌組織中SOX7及SOX9基因的表達及意義①

張新1，朱廣斌2，張天宇1，陳國強2，劉湘彬3

(1.佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154003；2.大慶油田總醫院，黑龍江 大慶 163001；3.大慶醫學高等專科學校，黑龍江 大慶 163001)

摘要：目的：探討前列腺癌組織中SOX7及SOX9的表達及意義。方法：采用免疫組化法對SOX7及SOX9在30例前列腺癌組織及30例前列腺增生組織中的表達差異進行驗證，再采用反轉錄實時定量PCR(RT-QPCR)檢測SOX7及SOX9mRNA在30例前列腺癌組織及10例前列腺增生組織中的相對定量差異。結果：實驗組中的SOX7呈現了低表達，而在對照組中SOX7的表達偏高(P<0.05)；SOX9在前列腺癌組織中呈現高表達，在前列腺增生組織中呈現低表達(P<0.05)。在前列腺癌組織中，SOX7的Ct值相對SOX9偏高，說明前列腺癌組織中SOX7的表達量相對于SOX9低。相比對照組，SOX7在前列腺癌組織中的相對定量偏低，而SOX9在前列腺癌組織中的相對定量偏高。結論：SOX7與SOX9的表達呈負相關。SOX9的表達與前列腺癌惡性程度正相關，SOX7的表達與前列腺癌惡性程度負相關。它們的表達與年齡無明顯相關。

關鍵詞:前列腺癌;SOX7;SOX9

在西方國家，前列腺癌是老年男性發病率最高的腫瘤之一，死亡率僅次于肺癌，位于第二位[1]。而在我國，前列腺癌的死亡率也在逐年上升。生活習慣越偏向于西方化，許多傳統飲食能帶來的保護因素就越低[2]。作為一種基因病變，多種基因分不同步驟參與了前列腺癌的發生發展階段，如受體HER22、EGFR及E2cadherin表達出現異常[3]，原癌基因ras、c2myc的激活，抑癌基因P53和Rb等出現失活或突變在前列腺癌中多有發生。SOX7位于人類染色體8p23.1，為Wnt/β-catenin_TCF信號通路的負性調節因子[4]，能編碼30個氨基酸，是SOX基因F亞族成員之一。SOX7的低表達與包括原發性結腸癌、原發性腎腫瘤、乳腺癌在內的多種腫瘤的發生發展均有關[5]。SOX9位于17號染色體長臂上17q24.3-25.1，其HMG-box可以結合ImPortinβ、CaM[6]，SOX9能編碼509個氨基酸，是SOX基因E亞族的成員之一。筆者應用RT-QPCR及免疫組化評分對前列腺癌組織及正常前列腺增生組織中SOX7、SOX9的表達差異進行了檢測，并對其與臨床病理參數之間的關系進行了分析。

1　材料與方法

1.1材料

2013-03～2014-11由大慶市油田總醫院、大慶龍南醫院兩所醫院泌尿外科經直腸前列腺穿刺、手術切除的30例前列腺癌組織標本，30例標本經過病理診斷證實為前列腺癌。另選取上述醫院手術切除后病理診斷為前列腺增生的標本30例為對照組。標本離體后立即取材，半小時內凍存于液氮內并保存。

1.2方法

1.2.1免疫組化方法：液氮取出組織后脫水并石蠟包埋，自動切片機連續切片4μm并展片，按SP試劑盒說明進行一抗二抗染色操作。光鏡下每張切片選擇5個隨機高倍鏡視野(400×)，胞質或胞核出現棕色即判定為陽性細胞。按陽性細胞占總細胞的比例、陽性細胞染色強度對實驗結果進行評判。陰性對照使用PBS，由兩位病理學家對免疫組化結果進行評分。

1.2.2目標基因mRNA檢測：采用Trizol法提取實驗組織總RNA，按照試劑盒說明反轉錄合成cDNA并儲存在-20℃冰箱備用。以cDNA為模版，進行RT-QPCR擴增SOX7、SOX9及內參GAPDH基因，引物序列見表1。擴增體系由10μLSYBR Green I Master Mix、6.4μL超純水、2μLcDNA、0.8μLPrimer Mix組成。設置PCR儀的反應條件為：95℃預變性60S，95℃變性10S，60℃退火15S，72℃延伸20S，共40個循環。SOX7、SOX9的mRNA表達水平為2- Ct， Ct=Ct(目標基因)-Ct(內參基因)。

表1　引物序列

1.3統計學方法

2　結果

2.1免疫組化結果

30例前列腺癌組織中SOX7陽性表達12例，陽性率40%；30例前列腺增生組織中SOX7陽性表達21例，陽性率70%(χ2=5.455，P <0.05)。30例前列腺癌組織中SOX9陽性表達28例，陽性率93.3%，30例前列腺增生組織中SOX9陽表達22例，陽性率73.3%(χ2=4.320，P <0.05)。前列腺癌組織中SOX7表達明顯低于前列腺增生組織，SOX9在前列腺癌組織中表達明顯強于前列腺增生組織。

圖1　SOX7染色結果(400×)，左為前列腺癌組織，右為前列腺增生組織

圖2　SOX9染色結果(400×)，左為前列腺癌組織，右為前列腺增生組織

2.2SOX7、SOX7染色評分對比臨床病理參數

見表2。

表2　SOX7、SOX9染色評分與臨床病理參數的關系

2.3SOX7及SOX9mRNA在Pca組織和BPH組織中的表達

對SOX7及SOX9在前列腺癌組織及前列腺增生組織中的mRNA表達量進行獨立樣本t檢驗，結果可見SOX7在前列腺癌組織中的mRNA表達量為(2.760±0.908)，而在前列腺增生組織中的表達量為(4.274±0.874)，差異具有顯著性(P <0.05)。

2.4不同臨床病理參數Pca組織中SOX7及SOX9mRNA的表達

見表3。

表3　SOX7、SOX9mRNA表達量與臨床病理參數的關系

3　討論

前列腺癌是男性生殖系統中最常見的癌癥。在對前列腺癌的早期診斷中，血清PSA一直是臨床上廣泛使用的"金標準"，但在實際臨床工作中，我們經常可以見到術前應用PSA評估病情未達到前列腺癌診斷標準，術后病理診斷卻證實為前列腺癌的病例；有些病例是術前PSA經過反復檢查一直偏高，術后病理診斷卻是良性前列腺增生。這樣的病例并非偶然，血清PSA的診斷灰區正在令臨床醫生變得越來越尷尬。前列腺癌是一種病因尚未明確的復雜性疾病，目前針對前列腺癌的治療多種多樣，諸如雄激素抑制治療(Androgen suppression therapy, AST)這樣的治療方法對于前列腺癌，尤其是轉移性前列腺癌，已經被公認為是最為有效，但幾乎所有經過一段時間AST的患者均會產生雄激素抵抗，而一旦發展為AIPC或HRPC，前列腺癌就會復發并變得無法治愈[7]。因此，找到對前列腺癌早期診斷有幫助，且對判斷前列腺癌進展及預后有一定提示作用的新的分子標志物變得越來越迫切。

根據先前的研究，在某些人類腫瘤細胞系中，如宮頸癌Hela S3、結腸癌SW480等，SOX7并沒有檢測到表達，進而推測SOX7基因在這些腫瘤的發生發展過程中可能充當了抑癌基因的角色[8]。在前列腺癌中，SOX7的mRNA及蛋白表達均被證實是下調的，這在本實驗中得到證實，這種下調的表達被認為是其特異性啟動子甲基化所造成的。 Drivdahl等人[9]在2004年發現，在前列腺癌細胞株中具有較高表達的SOX9可以導致正常細胞增殖率的下降，使正常細胞周期停滯于G0/G1，SOX9同時還增加了細胞凋亡的敏感性；Wang等人[10]也表明，在復發性激素難治性前列腺癌細胞中的SOX9呈現更高的表達；SOX9通過促進腫瘤細胞的增殖，從而參與了前列腺癌腫瘤重新激活的發展過程，這些之前的研究都與本次實驗有著相似的結果。

從本次RT-QPCR結果中可以看出，SOX7在對照組及實驗組呈現了明顯的定量差異，在前列腺癌組織中，SOX7的相對定量偏低，而SOX9與之相反，在前列腺癌組織中呈現了高表達量。實時熒光PCR擴增曲線的Ct值代表了擴增所需要的循環數，而Ct值與相對定量成反比，實驗組中SOX9的Ct值相對SOX7低，相應其表達量就偏高，結合免疫組化實驗中前列腺癌組織中SOX9蛋白的高表達，不難看出SOX9可能是促癌基因，它的上調可能對前列腺癌的進展起了促進作用。SOX7可能是抑癌基因，它的下調也參與了前列腺癌的進展。

參考文獻:

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[9]Drivdahl R,Haugk KH,Sprenger CC,et al. Suppression of growth and tumorigenicity in the prostate tumor cell line M12 by overexpression of the transcription factor SOX9[J].Oncogene,2004, 23(26):4584-4593

[10]Wang H, Leav I,Ibaragi S,et al. SOX9 is expressed in human fetal prostate epithelium and enhances prostate cancer invasion[J].Cancer Res,2008,68(6):1625-1630

The expression of prostate cancer SOX7 and SOX9 gene and its significance

ZHANGXin1,ZHUGuang-bin2,ZHANGTian-yu1,CHENGuo-qiang2,LIUXiang-bin3

(1.The First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China; 2.Daqing Oilfield General Hospital, Daqing 163001, China; 3.Daqing Medical College, Daqing 163001, China)

Abstract:Objective:To discuss prostate cancer (prostate cancer, PCa) tissue expression and the significance of SOX7 and SOX9mRNA.Method:Immunohisto chemical method was used to stain the differences of SOX7 and SOX9 expression differences in prostate cancer tissues and 30 cases of benign prostatic hyperplasia verify. Then quantitative real-time reverse transcription PCR (RT-QPCR) and SOX9mRNA SOX7 were used to detect prostate cancer in 30 cases quantitative differences in the relative organization and 10 cases of benign prostatic hyperplasia.Result:SOX7 experimental group presented low expression, while in the control group, the expression of SOX7 was high (P<0.05). SOX9 was highly expressed in prostate cancer tissues, but showing low expression (P<0.05) in benign prostatic hyperplasia. In prostate cancer, compared with SOX7, Ct values of SOX7 was relatively high, indicating that the expression of SOX7 in prostate cancer was low compared with SOX9. Compared to the control group, relative quantification of SOX7 in prostate cancer tissues was low, and relative quantification of SOX9 in prostate cancer tissues was high.Conclusion:SOX7 and SOX9 expression is negatively correlated. SOX9 expression is positively related to the degree of malignancy of prostate cancer. The expression of prostate cancer is negatively correlated to malignancy SOX7. Their expressions were no significant correlation with age.

Key words:prostate cancer ( PCa);SOX7;SOX9

中圖分類號：R737.25

文獻標識碼：A

文章編號：1008-0104(2015)06-0009-03

基金項目：①1.黑龍江省衛生廳科研課題，編號：2011-398；2.黑龍江省科技廳自然基金面上項目，編號：D201225。

作者簡介：張新(1987～)男，內蒙古呼倫貝爾人，在讀碩士研究生，醫師。

通訊作者：劉湘彬(1955～)男，黑龍江大慶人，碩士，教授，碩士研究生導師。E-mail:liuxbin@vip.sina.com。

(收稿日期：2015-03-26)