同步檢測(cè)孕母及新生兒骨形成標(biāo)志物結(jié)果分析

尉全平　翟洪然　孫子梅

同步檢測(cè)孕母及新生兒骨形成標(biāo)志物結(jié)果分析

尉全平翟洪然孫子梅

【摘要】目的通過對(duì)孕母及其新生兒骨形成標(biāo)志物進(jìn)行分析，探討新生兒骨代謝的特點(diǎn)。方法選擇正常分娩的72對(duì)孕母及新生兒，孕婦于分娩前采集空腹靜脈血，新生兒于娩出后采集臍血，分離血清，酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清骨堿性磷酸酶水平，檢測(cè)其中48對(duì)母子的血清骨鈣蛋白水平。結(jié)果72例孕母血清骨堿性磷酸酶水平低于新生兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);48例孕母血清骨鈣蛋白水平低于新生兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。孕母血清骨堿性磷酸酶水平與新生兒無相關(guān)性(r =0.128，P＞0.05);孕母血清骨鈣蛋白水平與新生兒無相關(guān)性(r = 0.228，P＞0.05)。結(jié)論新生兒血清骨堿性磷酸酶和骨鈣蛋白水平明顯高于孕母，骨形成標(biāo)志物活性增高，骨代謝十分活躍。

【關(guān)鍵詞】新生兒;骨形成標(biāo)志物;骨堿性磷酸酶;骨鈣蛋白

【中圖分類號(hào)】R 336

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002－7386(2015)17－2647－03

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.17.029

收稿日期:( 2015－02－09)

項(xiàng)目來源:張家口市科學(xué)技術(shù)和地震局科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào): 1101122D)

作者單位: 075100河北省張家口市，河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院兒科(尉全平、孫子梅)，消化內(nèi)科(翟洪然)

骨骼構(gòu)成人體的支架，決定了人體的基本外形，是人體身高的基礎(chǔ)，并對(duì)各器官起到保護(hù)支持作用，故健康的骨骼對(duì)人體意義重大。骨骼發(fā)育是新生兒(胎兒)發(fā)育的重要組成部分，骨代謝是骨骼發(fā)育的基礎(chǔ)，為骨骼縱向生長(zhǎng)、骨塑造、骨再造提供物質(zhì)能量來源，同時(shí)也是評(píng)價(jià)骨健康的依據(jù)之一［1，2］。骨代謝包括骨形成和骨吸收兩個(gè)過程，分別由成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞介導(dǎo)，通過兩者協(xié)同活動(dòng)來完成。成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞在骨代謝過程中產(chǎn)生一系列酶及其他代謝產(chǎn)物，這些產(chǎn)物以一定比例釋放入血或由尿中排出，其含量與骨代謝密切關(guān)聯(lián)，稱為骨代謝的特異性標(biāo)志物，分為骨形成標(biāo)志物和骨吸收標(biāo)志物。成骨細(xì)胞的功能是形成骨骼，調(diào)節(jié)細(xì)胞外骨基質(zhì)的構(gòu)成以及骨基質(zhì)的礦化。骨形成標(biāo)志物包括Ⅰ型前膠原羧基端前肽(carboxyterminal propeptide of typeⅠprocollagen，PICP)、骨堿性磷酸酶(bone-specific alkaline phosphatase，BAP)、骨鈣蛋白(osteocalcin，OC)等［3］，均為成骨細(xì)胞在不同分化階段的基因表達(dá)產(chǎn)物，可以反應(yīng)成骨細(xì)胞功能。骨吸收標(biāo)志物包括β膠原分解片段(β-crossLaps，β-CTx)、Ⅰ型膠原肽、尿羥脯氨酸(hydroxyproline，HOP)、血漿抗酒石酸酸性磷酸酶等［4］，是反應(yīng)破骨細(xì)胞活動(dòng)的代謝產(chǎn)物。新生兒剛脫離母體，結(jié)束了胎兒階段，開始了嬰兒階段的生長(zhǎng)發(fā)育，身體各器官包括骨骼處于快速發(fā)育生長(zhǎng)時(shí)期，其骨代謝有著不同于其他生命階段的特點(diǎn)，有必要對(duì)其進(jìn)行研究。本文對(duì)孕母及其新生兒骨形成標(biāo)志物中的骨堿性磷酸酶和骨鈣蛋白進(jìn)行分析研究，探討新生兒骨代謝特點(diǎn)，為評(píng)價(jià)新生兒骨健康狀況提供參考。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2010年12月至2011年2月在我院產(chǎn)科經(jīng)產(chǎn)道分娩的72對(duì)孕母及新生兒，測(cè)定孕母和新生兒血清骨堿性磷酸酶濃度，并檢測(cè)其中48對(duì)母子的血清骨鈣蛋白濃度。孕婦健康，除外肝、腎、甲狀旁腺疾病以及糖尿病、高血壓等疾病，新生兒無先天性疾病。家屬均知情同意。72例新生兒，男42例，女30 例;胎齡35～41周;出生體重2.45～4.45 kg，平均(3.20±0.36)kg;檢測(cè)骨鈣蛋白的48例新生兒，男27例，女21例;胎齡35～41周，出生體重2.45～4.1 kg，平均(3.18±0.38)kg。

1.2標(biāo)本采集采集孕婦分娩前空腹靜脈血3 ml，不抗凝，室溫放置2～4 h，然后2 000 r/min離心15 min，提取血清，保存于－20℃冰箱待測(cè)。新生兒娩出后即刻采集胎盤臍帶殘端中的臍血3 ml，按照同樣方法處理后保存。

1.3檢測(cè)方法酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定骨堿性磷酸酶及骨鈣蛋白濃度。儀器為芬蘭Wellscan MK3全自動(dòng)酶標(biāo)儀、北京DEM-II全自動(dòng)洗板機(jī)、普通離心機(jī)、EPPENDORF移液器等。試劑均由英國(guó)Immunodiagnostic Systems Linited公司生產(chǎn)。骨堿性磷酸酶檢驗(yàn)原理為生物素標(biāo)記的抗骨堿性磷酸酶單克隆抗體與血清中的骨堿性磷酸酶及包被在孔壁上的鏈霉親和素反應(yīng)，形成復(fù)合物，洗滌后加入酶底物孵育，終止反應(yīng)后讀取吸光度，吸光度值與樣品中骨堿性磷酸酶濃度成正比。骨鈣蛋白檢驗(yàn)原理為試劑盒中的生物素標(biāo)記抗體用于捕獲抗原抗體復(fù)合物，過氧化物酶偶聯(lián)抗體用于檢測(cè)，

標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測(cè)樣品加入鏈霉親和素包被的微孔板中，加入試劑，孵育后清洗微孔板，加入生色底物，終止顯色反應(yīng)，最后測(cè)量吸光度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1孕母和新生兒骨堿性磷酸酶、骨鈣蛋白比較孕母血清骨堿性磷酸酶水平明顯低于新生兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。孕母血清骨鈣蛋白濃度明顯低于新生兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

表1　孕母和新生兒骨堿性磷酸酶、骨鈣蛋白比較　±s

表1　孕母和新生兒骨堿性磷酸酶、骨鈣蛋白比較　±s

注:與孕母比較，*P＜0.01

人群　　骨堿性磷酸酶(U/L)(n =72)　　骨鈣蛋白(ng/ml)(n =48)孕母34±20　19±30新生兒　74±28*　63±68*

2.2母子之間的相關(guān)性分析孕母血清骨堿性磷酸酶水平與新生兒無相關(guān)性(r =0.128，P＞0.05);孕母血清骨鈣蛋白水平與新生兒無相關(guān)性(r = 0.228，P＞0.05)。

3　討論

骨形成標(biāo)志物是成骨細(xì)胞在不同時(shí)期的表達(dá)產(chǎn)物，正常的骨形成過程中，成骨細(xì)胞首先合成I型骨膠原，后者為骨基質(zhì)的主要成分，然后合成骨堿性磷酸酶，為礦化做準(zhǔn)備，礦化開始后合成骨鈣蛋白，骨鹽結(jié)晶不斷沉積在類骨質(zhì)中，最后類骨質(zhì)完成礦化，成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)楣羌?xì)胞［5］。骨堿性磷酸酶是成骨細(xì)胞合成分泌的一種細(xì)胞外酶，為成骨細(xì)胞增殖停止初期的產(chǎn)物，當(dāng)成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)楣羌?xì)胞時(shí)，其合成逐漸下降。骨堿性磷酸酶是骨骼生長(zhǎng)發(fā)育的重要蛋白質(zhì)，它可促進(jìn)焦磷酸鹽分解及抑制磷酸鈣在細(xì)胞外沉積，在骨礦化過程中起到非常重要的作用，是骨形成必需的催化劑［6］。堿性磷酸酶有多個(gè)來源，如骨源性、肝源性、腎源性、腸源性等多種途徑，不能準(zhǔn)確反應(yīng)成骨細(xì)胞功能，而骨堿性磷酸酶是成骨細(xì)胞合成分泌的特異性產(chǎn)物，可直接反應(yīng)成骨細(xì)胞功能。骨鈣蛋白是僅由成骨細(xì)胞分泌的一種非膠原蛋白，是一種維生素K依賴性鈣結(jié)合蛋白，它具有鈣離子結(jié)合位點(diǎn)，可以吸附羥磷灰石，使其沉積在膠原蛋白和粘多糖構(gòu)成的支架上，羥磷灰石結(jié)晶逐漸沉積，類骨質(zhì)完成礦化過程。同時(shí)骨鈣蛋白促進(jìn)非結(jié)晶的鈣磷鹽向羥磷灰石轉(zhuǎn)變，調(diào)節(jié)結(jié)晶在膠原上的分布及走向，起到增加骨鹽含量、提高骨強(qiáng)度的作用。維生素D在基因轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控骨鈣蛋白的合成。骨鈣蛋白主要沉積在骨組織的間質(zhì)細(xì)胞外，大約20%釋放入血，血循環(huán)骨鈣蛋白水平代表骨組織中的骨鈣蛋白含量，可直接反映成骨細(xì)胞的功能狀態(tài)［5］。

有文獻(xiàn)對(duì)新生兒骨代謝標(biāo)志物之間的關(guān)系進(jìn)行了研究，如王愛萍等［4］對(duì)62例足月兒骨鈣蛋白、β膠原分解片段、25(OH)D3的關(guān)系進(jìn)行研究，結(jié)果表明血清骨鈣蛋白水平與β膠原分解片段呈負(fù)相關(guān)，與25(OH)D3呈正相關(guān)，表明足月新生兒骨形成增加，骨吸收減少，骨代謝活躍，同時(shí)對(duì)25(OH)D3的需求也增加。有文獻(xiàn)對(duì)不同胎齡新生兒骨代謝標(biāo)志物的活性進(jìn)行比較，馬素苓等［7］對(duì)不同胎齡新生兒分組進(jìn)行骨堿性磷酸酶水平的對(duì)比，顯示隨著胎齡增加骨堿性磷酸酶水平呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，32周以后各組新生兒骨堿性磷酸酶水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，提示骨骼礦化過程發(fā)生在32周以后。有文獻(xiàn)把探討點(diǎn)放在母嬰之間骨代謝標(biāo)志物的關(guān)系上，張會(huì)豐［8］對(duì)40例孕婦及其新生兒血清骨堿性磷酸酶活性進(jìn)行分析，結(jié)果表明孕婦及其新生兒血清骨堿性磷酸酶水平差異有高度顯著性，前者低于后者，同時(shí)具有相關(guān)性，表明新生兒成骨細(xì)胞功能及其活躍。劉秀平等［9］文獻(xiàn)表明孕婦骨鈣蛋白水平低于新生兒，而且兩者有相關(guān)性，表明新生兒成骨細(xì)胞功能十分活躍。

本研究結(jié)果顯示新生兒血清骨堿性磷酸酶及骨鈣蛋白水平明顯高于孕母。表明新生兒骨形成標(biāo)志物水平高于孕母，成骨細(xì)胞功能及其活躍，骨轉(zhuǎn)換速度極快。其原因?yàn)樾律鷥禾幱谏眢w快速生長(zhǎng)階段，其骨骼發(fā)育速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于其它生命階段，以滿足身體的快速生長(zhǎng)需要。身長(zhǎng)是骨骼生長(zhǎng)的基礎(chǔ)，新生兒的快速生長(zhǎng)是以活躍的骨代謝為基礎(chǔ)。此期骨形成大于骨吸收，以完成骨縱向生長(zhǎng)、骨塑造與骨再造。而孕母作為成年人，骨縱向生長(zhǎng)、骨塑造已停止，只進(jìn)行骨再造，骨形成與骨吸收偶聯(lián)，成骨細(xì)胞功能不及新生兒活躍。本研究顯示孕母血清骨堿性磷酸酶和骨鈣蛋白水平與新生兒均無相關(guān)性，與前述作者的結(jié)果不符。骨堿性磷酸酶和骨鈣蛋白作為孕母和新生兒各自合成的生化標(biāo)志物，其水平受多種因素影響。王愛萍等［10］的文獻(xiàn)表明新生兒的骨鈣蛋白水平受胎齡及出生體重的影響。本研究對(duì)象新生兒的胎齡跨度為35～41周，可能為母子之間骨堿性磷酸酶、骨鈣蛋白水平無相關(guān)性的原因之一，確切原因有待深入探討。

綜上所述，新生兒骨形成標(biāo)志物水平增高表明其骨代謝十分活躍。本階段對(duì)鈣磷、維生素D等骨營(yíng)養(yǎng)素需求較大，易發(fā)生骨營(yíng)養(yǎng)素缺乏，需注意維生素D、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)素的補(bǔ)充。

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10王愛萍，陶娜，李楊方，等.新生兒骨代謝指標(biāo)的檢測(cè)分析.中國(guó)兒童保健雜志，2011，19: 732-734.