PCR方法檢測(cè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞的價(jià)值探討

張璐靚

鄭州市第九人民醫(yī)院　鄭州　450053

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PCR方法檢測(cè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞的價(jià)值探討

張璐靚

鄭州市第九人民醫(yī)院鄭州450053

【摘要】目的探討PCR方法檢測(cè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞的臨床價(jià)值。方法選取我院收治的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒44例為研究對(duì)象(觀察組)，采用PCR定量檢測(cè)方法對(duì)腦脊液標(biāo)本的微量白血病細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)選擇40例健康兒童為對(duì)照組，行相同的檢測(cè)。觀察比較2組檢查結(jié)果，并對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病患者中PCR陽性情況與腦脊液檢查結(jié)果、臨床癥狀出現(xiàn)時(shí)間等進(jìn)行對(duì)照。結(jié)果對(duì)照組均為PCR陰性，觀察組中16例(共26份腦脊液標(biāo)本)檢測(cè)為PCR陽性，其中TCRr陽性4例，IgH CDR-Ⅲ陽性16例。先于常規(guī)腦脊液檢查，同時(shí)與腦脊液檢測(cè)獲得陽性結(jié)果的分別有5例和9例。臨床癥狀出現(xiàn)前檢出、出現(xiàn)臨床癥狀后檢出陽性結(jié)果的患者分別有11例和3例。其余2例PCR陽性患者無臨床癥狀，且經(jīng)腦脊液檢查無異常。所有PCR陽性患者經(jīng)治療后均轉(zhuǎn)陰。結(jié)論P(yáng)CR方法能對(duì)早期中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞進(jìn)行較準(zhǔn)確的檢測(cè)，且檢查的敏感性較高，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的治療有一定的指導(dǎo)意義。

【關(guān)鍵詞】PCR檢測(cè)；中樞神系統(tǒng)白血病；臨床價(jià)值

研究證實(shí)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病是造成急性淋巴細(xì)胞白血病患者復(fù)發(fā)的主要原因之一，嚴(yán)重影響患者的長(zhǎng)期存活率[1]。本文就我院收治的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒為研究對(duì)象，探討PCR方法檢測(cè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞的臨床價(jià)值。報(bào)告如下。

1資料和方法

1.1一般資料選取我院收治的急性淋巴細(xì)胞白血病患者44例為研究對(duì)象，本次參與調(diào)查研究的患者均為12歲以下，且所有患者均符合《小兒急性白血病診療建議》中制定的診斷和分型標(biāo)準(zhǔn)[2]。男26例，女11例；年齡4～12歲，平均(7.3±1.4)歲。其中，36例處于疾病的緩解期，8例為治療期。選擇40例健康兒童作對(duì)照，男30例，女14例，年齡4～12歲，平均(7.1±1.5)歲。2組被檢測(cè)者在性別、年齡等方面比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法分別采集被檢測(cè)者的腦脊液標(biāo)本，每份4～6 mL，其中處于緩解期的急性淋巴細(xì)胞白血病患者每人采集3份腦脊液標(biāo)本，治療期患者和健康兒童每人采集1份腦脊液標(biāo)本，急性淋巴細(xì)胞白血病的患者和健康兒童分別采集116份和40份腦脊液標(biāo)本。將腦脊液進(jìn)行離心分離，獲得細(xì)胞沉淀物后加入蒸餾水(0.5 mL)混合至均勻，轉(zhuǎn)移到EPP endorf管中，水浴加熱15 min，冷卻后再次離心，去除細(xì)胞碎片，在上清液中加醋酸鈉與無水乙醇，二者的劑量分別為上清液的1/10和2倍，置于-20 ℃的冰箱中冷凍>2 h，再次離心，室溫下進(jìn)行干燥，并在TE10中溶解。

以TD-Veq和TD-Jr作為PCR引物擴(kuò)增TCRr基因，以TD-V和TD-J擴(kuò)增IgH CDR-Ⅲ基因。將模板DNA加入反應(yīng)體系中，經(jīng)高溫(95 ℃)變性，加Taq dNA聚合酶以及石蠟封口，不同溫度下循環(huán)反應(yīng)(依次選擇93 ℃、55 ℃和72 ℃)后。將PCR反應(yīng)液與溴酚藍(lán)載樣液混合、點(diǎn)樣，在紫外檢測(cè)儀上觀察。

2結(jié)果

觀察2組PCR檢測(cè)結(jié)果可見，40例健康兒童檢測(cè)均為PCR陰性，44例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒中，16例(共26份腦脊液標(biāo)本)檢測(cè)為PCR陽性，其中TCRr陽性4例，IgH CDR-Ⅲ陽性16例。

將急性淋巴細(xì)胞白血病患者中PCR陽性情況與患兒的腦脊液檢查結(jié)果、臨床癥狀出現(xiàn)時(shí)間等進(jìn)行對(duì)照，可見先于常規(guī)腦脊液檢查、同時(shí)與腦脊液檢測(cè)獲得陽性結(jié)果的分別有5例和8例，無陽性表現(xiàn)2例。先于臨床癥狀出現(xiàn)之前檢出、出現(xiàn)臨床癥狀后檢出陽性結(jié)果的患者分別有11例和3例。其余2例PCR陽性患者無臨床癥狀，且經(jīng)腦脊液檢查無異常。

3討論

白血病是臨床較常見的一種造血系統(tǒng)惡性腫瘤，對(duì)患者健康造成巨大威脅。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷進(jìn)步和發(fā)展，急性淋巴細(xì)胞白血病的治療取得很大進(jìn)步，患者的完全緩解率、治療后生存時(shí)間等均顯著提高，但復(fù)發(fā)率仍高達(dá)30%～40%[3]。而研究證實(shí)微小殘留病是引起白血病復(fù)發(fā)的重要因素。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生理構(gòu)造的特殊性常成為白血病復(fù)發(fā)的根源，研究認(rèn)為急性淋巴細(xì)胞白血病患者一半左右的B細(xì)胞，幾乎所有的T細(xì)胞內(nèi)均存在TCRr基因重排現(xiàn)象，而4/5的B細(xì)胞和1/10 T細(xì)胞均存在IgH CDR-Ⅲ基因(免疫球蛋白重鏈基因重排產(chǎn)生的第3互補(bǔ)決定區(qū))重排現(xiàn)象[4]，通過PCR引物對(duì)其進(jìn)行體外擴(kuò)增則可對(duì)患者腦脊液中的微量白細(xì)胞進(jìn)行有效檢測(cè)。

本文健康兒童的PCR檢測(cè)結(jié)果均呈陰性，而16例患者的檢測(cè)結(jié)果呈陽性，與常規(guī)腦脊液檢查結(jié)果及臨床表現(xiàn)對(duì)照后，只有2例不符合，且28.6%的患者檢測(cè)陽性先于腦脊液，78.6%的患者先于臨床癥狀出現(xiàn)。同時(shí)，考慮復(fù)發(fā)早期腦脊液中的白血病數(shù)量少，易漏診。故PCR檢測(cè)的敏感性更強(qiáng)。

總之，PCR方法能對(duì)早期中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞進(jìn)行較準(zhǔn)確的檢測(cè)，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的治療有一定的指導(dǎo)意義。

4參考文獻(xiàn)

[1]呂曉東，辛亞萍，丁晶，等.急性白血病骨髓中微小殘留病與中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的關(guān)系[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，17(17)：59-60.

[2]宋斌，陳雁.腦脊液Cystatin C對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的早期診斷價(jià)值[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，23(21)：2 360-2 361.

[3]徐翀，何妙俠，鄭建民.兒童急性淋巴細(xì)胞白血病微小殘留病檢測(cè)及其進(jìn)展[J].海峽醫(yī)學(xué)，2013，28(4)：342.

[4]羅建蓉，賈永前.實(shí)時(shí)熒光定量PCR在監(jiān)測(cè)微量殘留性白血病中的應(yīng)用[J].華西醫(yī)學(xué)，2006，21(2)：417-418.

(收稿2015-03-15)

【中圖分類號(hào)】R733.7

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B

【文章編號(hào)】1673-5110(2016)02-0102-02