豬TCAP基因啟動子克隆與活性分析

喬木 程碧軍 武華玉 黃京書 劉貴生 彭先文 李良華 吳俊靜 梅書棋

摘要：為了尋找鑒定與豬骨骼肌生長發育相關的基因，克隆了豬TCAP基因1 662 bp的核心啟動子序列，通過軟件預測，構建了7個缺失片段表達載體，轉染PK細胞，確定了其核心啟動子序列位于轉錄翻譯起點上游0～155 bp之間。

關鍵詞：豬;TCAP基因;啟動子;轉錄活性

中圖分類號：Q78 ? ? ? ?文獻標識碼：A ? ? ? ?文章編號：0439-8114（2015）23-6051-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.23.065

Cloning and Activity Analysis of Pig TCAP Gene Promoter

QIAO Mu1a，CHENG Bi-jun1b，WU Hua-yu1a，HUANG Jing-shu2，LIU Gui-sheng1a，PENG Xian-wen1a，Li Liang-hua1a， WU Jun-jing1a，MEI Shu-qi1a

（1a. Institute of Animal and Veterinary Science;1b. Technical Institute of Agricultural Economy， Hubei Academy of Agricultural Sciences， Wuhan 430064， China; 2. Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Hubei Provence， Wuhan 430070， China）

Abstract：It has great implications for identifying pig genes which have function in skeletal muscle growth and development. The promoter sequences （1 662 bp） of pig TCAP gene was cloned， 7 plasmid vectors with deletion of different fragments to transfect PK cell was constructed， and found the core promoter sequence of TCAP gene was located in 0～155 bp upstream.

Key words：pig; TCAP gene;promoter;transcriptional activity

TCAP蛋白（Titin-cap，Telethonin）是一種在橫紋肌和心肌中特異性表達的蛋白，是肌聯蛋白激酶的作用底物，綁定于肌聯蛋白Z1-Z2區[1]，通過連接和支撐肌聯蛋白為其他肌纖維蛋白提供結合位點，從而在調節肌原纖維的組裝中起到重要作用[2]。該蛋白除在肌原纖維的組裝中扮演重要角色外，對肌原纖維的翻轉同樣起著重要作用[3]。研究發現該基因與肌肉萎縮、心肌癥、肌肉營養不良、心肌損傷等相關[4-6]。

TCAP基因定位于人染色體HSA17q1.2，由2個外顯子和1個內含子組成，編碼167個氨基酸[7]。Cheong等[8]克隆了牛的TCAP基因，編碼了166個氨基酸，其與人和鼠的TCAP基因相似性達到95.8%和95.2%;牛TCAP基因第一內含子和第二外顯子的多態位點與肌肉大理石紋評分顯著相關。黃京書[9]分離克隆了豬TCAP基因部分序列，本試驗采用PCR方法克隆豬TCAP基因的啟動子序列，并研究TCAP基因啟動子不同區段的轉錄活性，為研究TCAP基因表達調控機制奠定基礎。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

大白豬（湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所原種豬場）、梅山豬（英山縣綠源養豬專業合作社）、長白豬（華中農業大學試驗豬場）前腔靜脈采血，采用傳統的苯酚/氯仿提取法提取DNA。……