阿托伐他汀對老年自身免疫性腦脊髓膜炎大鼠腦白質的保護作用

阿托伐他汀對老年自身免疫性腦脊髓膜炎大鼠腦白質的保護作用

楊挺嘉楚洪波1于慧玲2殷旭華2

(內蒙古醫科大學附屬醫院神經內科,內蒙古呼和浩特010050)

摘要〔〕目的探討阿托伐他汀對老年自身免疫性腦脊髓膜炎(EAE)大鼠腦白質髓鞘堿性蛋白(MBP)和少突膠質細胞轉錄因子(OLIG)1蛋白表達的影響。方法取老年Wistar雄性大鼠80只，隨機分為對照組、模型組、阿托伐他汀大劑量組(8 mg/kg組)和阿托伐他汀小劑量組(2 mg/kg組)，每組20只。采用新鮮豚鼠50%全脊髓勻漿液和完全弗氏佐劑(CFA)免疫制備EAE模型，免疫后第2天開始，模型組給予生理鹽水灌胃，阿托伐他汀組給予阿托伐他汀不同劑量灌胃，持續灌胃21 d，于第22天處死，取腦干和脊髓待測。采用實時熒光定量和免疫組織化學染色檢測各組腦干、脊髓中MBP和OLIG1的mRNA水平和蛋白陽性表達強度。結果與對照組比較，模型組MBP mRNA水平和蛋白陽性表達強度明顯升高、OLIG1明顯降低(P<0.01)；阿托伐他汀小劑量組MBP mRNA水平和蛋白陽性表達強度升高、OLIG1降低(P<0.01)；阿托伐他汀大劑量組MBP mRNA水平和蛋白陽性表達強度略升高、OLIG1略降低，無顯著差異(P>0.05)，模型組、阿托伐他汀大、小劑量組差異顯著(P<0.01)。結論阿托伐他汀能夠通過下調MBP、上調OLIG1 mRNA水平和蛋白陽性表達強度，對EAE大鼠的腦白質髓鞘損傷具有保護作用，且大劑量作用優于小劑量。

關鍵詞〔〕阿托伐他汀；自身免疫性腦脊髓膜炎；髓鞘堿性蛋白；少突膠質細胞轉錄因子1

中圖分類號〔〕R392.11〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：內蒙古自治區自然科學基金(No.2011MS1154)

通訊作者：殷旭華(1966-)，女，碩士，主任醫師，主要從事神經免疫學研究。

1長春大學特教學院2內蒙古醫科大學病理教研室

第一作者：楊挺嘉(1991-)，女，在讀碩士，主要從事神經免疫學研究。

自身免疫性腦脊髓炎(EAE) 其主要病理特點是中樞神經系統白質炎性脫髓鞘，其病因及發病機制迄今不明〔1〕。髓鞘堿性蛋白(MBP)和少突膠質細胞轉錄因子(OLIG)1是調控髓鞘的兩個重要蛋白〔2〕。本實驗旨在探究阿托伐他汀對EAE大鼠腦白質髓鞘損傷的保護作用。

1資料與方法

1.1實驗動物及分組吉林大學白求恩醫學部實驗動物中心Wistar雄性大鼠80只，鼠齡>18 w，平均體重(500±30)g，豚鼠10只，雌雄不限，平均體重(410±20)g，隨機分為4組(n=20)：對照組、模型組、阿托伐他汀大劑量組(8 mg/kg組)和阿托伐他汀小劑量組(2 mg/kg組)。

1.2模型制備〔3〕及實驗試劑除對照組，其他3組均采用新鮮豚鼠全脊髓和完全弗氏佐劑(CFA)免疫制備EAE模型，即新鮮豚鼠全脊髓與生理鹽水制成50%勻漿液，加上等體積的CFA，按0.5 ml/只注射于大鼠四肢足墊皮下。阿托伐他汀(大連輝瑞制藥有限公司, 生產批號為55837001)；CFA購于Sigma公司；MBP和OLIG1兔抗大鼠一抗及實時熒光定量試劑購于Santa Cruz和北京博奧森生物有限公司；DAB和SP9710試劑盒購于福州邁新生物有限公司。

1.3給藥劑量及給藥方式免疫后第2天開始，模型組給予生理鹽水灌胃，阿托伐他汀組給予阿托伐他汀不同劑量灌胃(8 mg/kg組和2 mg/kg組)，持續治療21 d，于第22天處死，取腦干和脊髓待測。

1.4各組腦干、脊髓中MBP和OLIG1蛋白陽性表達強度的檢測10%的水合氯醛腹腔麻醉大鼠，取部分大鼠腦干、脊髓放入4%多聚甲醛液中固定、脫水、透明、浸蠟、包埋，然后切成3 μm的切片，進行免疫組織化學染色，染色結果通過Motic Images Advanced 3.2圖像分析軟件進行統計學分析，測定光密度值(OD值)；光密度值越大陽性表達越高，反之則越低。

1.5各組腦干、脊髓中MBP和OLIG1 mRNA水平的檢測取部分大鼠腦干、脊髓凍存待測，采用實時熒光定量試劑盒檢測，操作嚴格按照試劑盒步驟進行。

1.6統計學方法應用SPSS16.0統計學分析軟件進行t檢驗。

2結果

與對照組比較，模型組MBP蛋白、mRNA表達強度明顯升高、OLIG1蛋白和mRNA明顯降低(P<0.01)；阿托伐他汀小劑量組MBP蛋白和mRNA表達強度升高、OLIG1蛋白和mRNA降低(P<0.01)；阿托伐他汀大劑量組MBP蛋白和mRNA表達強度略升高、OLIG1蛋白和mRNA略降低無顯著差異(P>0.05)，模型組、阿托伐他汀大、小劑量組差異顯著(P<0.01)，見表1。

表1　各組腦干和脊髓中MBP和OLIG1蛋白和mRNA表達比較

與對照組比較:1)P<0.01；與模型組比較:2)P<0.01；與阿托伐他汀小劑量組比較:3)P<0.01

3討論

中樞神經系統腦白質由軸突、少突膠質細胞及由少突膠質細胞形成的髓鞘組成〔4〕。MBP是髓鞘的主要組成成分之一，是功能性的髓鞘結構蛋白，當髓鞘損傷時，MBP蛋白釋放表達增高〔2〕。中樞神經系統的傳導功能，需要神經纖維髓鞘化才能正常發揮；而髓鞘形成的過程由OLIG1調控〔5～7〕，本實驗從形態學水平和分子生物學水平上反映阿托伐他汀能夠下調MBP、上調OLIG1 mRNA水平和蛋白陽性表達強度，對EAE大鼠的腦白質炎性脫髓鞘具有保護作用，且大劑量作用優于小劑量，其作用機制有待于進一步探討。

4參考文獻

1金世杰,徐俊,黃榕,等.口服耐受防治大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓膜炎的實驗研究〔J〕.嶺南急診醫學雜志，2009；14(2)：84-6.

2Kessaris N, Pringle N, Richardson WD.Specification of CNS gliafrom neural stem cells in the embryonic neuroepithelium〔J〕.Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci,2008；363(1489)：71-85.

3徐玉, 劉瑞春, 王穎, 等.Wistar大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型的建立〔J〕.腦與神經疾病雜志,2007；15(6)：415-7.

4Cao QL, Zhang YP, Howard RM,etal. Pluripotent stem cell sengrafted into the normal or lesioned adult rat spinal cord are restricted to a glial lineage〔J〕. Exp Neurol,2001；167(1):48-58.

5趙紅, 高曉玉, 張擁波, 等.Olig家族調控腦白質損傷后神經修復的研究進展〔J〕.中華神經醫學雜志,2009;8(2)：201-3.

6高曉玉,王得新,張擁波.腦缺血再灌注后Olig1、Nogo-A基因表達與白質損傷〔J〕.中華神經科雜志,2009;42(322)：808-12.

7呂合作,鄒健,王艷霞,等. Olig1過表達對大鼠神經干細胞向少突膠質細胞分化的影響〔J〕.神經解剖學雜志,2010；26(2):201-5.

〔2015-05-19修回〕

(編輯苑云杰)