甲狀腺乳頭狀癌中FAK和MMP-9的表達及臨床意義

【軍事醫學與衛生裝備】

甲狀腺乳頭狀癌中FAK和MMP-9的表達及臨床意義

高玉寶1,李常恩2

(1.湖北十堰市丹江口市第一人民醫院普外科，湖北 十堰442000;

2.湖北醫藥學院附屬人民醫院甲狀腺乳腺血管外科，湖北 十堰442000)

摘要：目的研究甲狀腺乳頭狀癌中FAK和MMP-9蛋白的表達及臨床意義。方法采用免疫組織化學技術SP法檢測60例人甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁組織標本中FAK和MMP-9蛋白的表達。結果1) 人甲狀腺乳頭狀癌組織組中FAK和MMP-9蛋白的陽性表達率為75%、70.0%，而癌旁組織中FAK和MMP-9蛋白的陽性表達率為26.7%、11.7%，癌組織組中FAK和MMP-9陽性率明顯高于癌旁組織組，兩組差別在統計學上有明顯差異(P<0.05)。2) 有淋巴結轉移甲狀腺乳頭狀癌組中的FAK和MMP-9的陽性表達，明顯高于無淋巴結轉移組，在統計學上有明顯差異(P<0.05)。結論FAK和MMP-9在人甲狀腺乳頭狀癌組織中均呈高表達，參與了人甲狀腺乳頭狀癌的發生、發展及浸潤、轉移。

關鍵詞:甲狀腺乳頭狀癌；免疫組化；FAK蛋白；MMP-9蛋白

收稿日期：2015-01-24

作者簡介：高玉寶(1971—)，男，研究生，主要從事普外科研究。

doi:10.11809/scbgxb2015.06.040

中圖分類號：R581.9

文章編號：1006-0707(2015)06-0157-04

本文引用格式：高玉寶,李常恩.甲狀腺乳頭狀癌中FAK和MMP-9的表達及臨床意義[J].四川兵工學報，2015(6):157-160.

Citationformat:GAOYu-bao,LIChang-en.ExpressionandClinicalSignificanceofFAKandMMP-9inPapillaryThyroidCarcinoma[J].JournalofSichuanOrdnance,2015(6):157-160.

ExpressionandClinicalSignificanceofFAKandMMP-9

inPapillaryThyroidCarcinoma

GAOYu-bao1, LI Chang-en2

(1.DepartmentofGeneralSurgery,theFirstPeople’sHospitalofDanjiangkouCity,Shiyan442000,China；

2.DepartmentofThyroidandBreastSurgery,AffiliatedPeople’sHospital,

HubeiUniversityofMedicine,Shiyan442000,China； )

Abstract:Objective To study the role of FAK and MMP-9 expressions in the development of papillary thyroid carcinoma. Methods Expressions of FAK and MMP-9 were detected by SP immunohistochemical technique in 60 pairs of papillary thyroid carcinoma and the corresponding non-tumor tissues. Results 1) The Results show that the positive rates of FAK and MMP-9 protein in papillary thyroid carcinoma are 75% (45/60), 70.0% (42/60) respectively, and the positive rates of FAK and MMP-9 protein in the corresponding non-tumor tissues are 26.7% (15/60) and 11.7% (18/60) respectively, and FAK and MMP-9 expression in papillary thyroid carcinoma are higher than the corresponding non-tumor tissues (P<0.05). 2) FAK and MMP-9 protein in papillary thyroid carcinoma with lymph node metastasis and are higher than those without metastasis (P<0.05). Conclusion The high expressions of FAK and MMP-9 protein suggest that they may play an important role in the development of papillary thyroid carcinoma. It prompts tumor invasion and metastasis.

Keywords:papillarythyroidcarcinoma;immunohistochemisty;FAKprotein;MMP-9protein

甲狀腺癌作為最常見的內分泌腫瘤之一，占全身惡性腫瘤的1%[1]，其中乳頭狀癌占甲狀腺癌的70%以上，多見中青年女性，兒童甲狀腺癌全部是乳頭狀癌。雖生長緩慢，但早期就發生淋巴轉移[2]。MazzaferriEL等報道甲狀腺乳頭狀癌患者初診時就有約60.9%出現頸部淋巴轉移[3]。殷玉林、胡 薇等報道在術前臨床未觸及的甲狀腺乳頭狀癌患者，而術后病理檢查提示有約46%～71.2%頸淋巴結已有轉移[4，5]。淋巴結轉移是術后復發及治療失敗的主要原因之一[6]。黏著斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)是一種非受體型蛋白酪氨酸激酶，其基因位于人染色體8q24，在胃癌、結直腸癌、宮頸癌、乳腺癌等高轉移性惡心腫瘤表達增高，而在癌旁組織中表達低，并且與增值、腫瘤浸潤程度和淋巴結轉移相關[7]。基質金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)作為參與降解ECM重要的酶家族之一，在腫瘤細胞浸潤和轉移中起著非常關鍵的作用，研究較多的主要為MMP-2、MMP-9。目前，在甲狀腺乳頭狀癌中FAK和MMP-9蛋白表達情況，以及與是否淋巴結轉移相關的研究較少。本研究檢測人甲狀腺乳頭狀癌中FAK、MMP-9的表達，探討其在人甲狀腺乳頭狀癌發生發展中的臨床病理意義。

1材料與方法

1.1標本與主要試劑

收集本院 2008—2010 年60例均經病理證實甲狀腺乳頭狀癌患者標本，男30例,女30例,年齡22～63(平均44.68)歲。有淋巴結轉移 33例，無淋巴結轉移27例。按照國際抗癌協會聯盟 (UICC)的TNM分期所選病例均屬于II～III期。所有病例術前未做任何治療，為初次就診患者。主要試劑:濃縮型兔抗人FAK多克隆抗體；濃縮型型鼠抗人MMP-9 蛋白多克隆抗體；羊抗兔/鼠生物素化二抗；免疫組織化學試劑盒為超敏即用型S-P通用型；DAB顯色試盒及多聚賴氨酸。以上試劑均購自北京中杉生物技術有限公司。

1.2檢測方法

用免疫組織化學SP法。將已知陽性的甲狀腺乳頭狀癌切片作為陽性對照,用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。實驗步驟嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3結果判定

顯微鏡下觀察、成像系統拍照并對陽性結果進行分析，胞漿內出現黃色或者褐色顆粒即為陽性細胞。每張切片隨機選取 5 個高倍視野(×400 倍),記錄每個高倍視野中陽性細胞數后計算平均值,進而求得陽性細胞比例。FAK蛋用染色強度和陽性細胞百分比兩項指標綜合評價陽性強弱，染色強度評分：陰性=0分，弱=1分，中度=2分，強=3分；陽性細胞百分比評分：≤10%陽性細胞=0分，>10%～≤25%陽性細胞=1分，>25%～≤50%陽性細胞=2分，>50%陽性細胞=3分。染色強度和陽性細胞百分比總評分相加，0-2分為“-”， 3分為“+”，4分為“++”，5分以上為“+++”。

1.4統計學方法

統計學采用SPSS17.0統計軟件統計分析，兩組之間的陽性率分別進行卡方檢驗進行比較。檢驗水準：P=0.05。

2結果

2.1FAK蛋白的表達

2.1.1FAK蛋白在癌組織及癌旁組織中的表達

在人甲狀腺癌組織切片中發現，FAK蛋白主要表達于癌細胞胞漿內，呈黃色或者黃褐色顆粒，呈密集型表達，大部分病例的癌組織呈“++～+++”；而在癌旁組織中，表達少甚至沒有表達；如圖1(A、B)。人甲狀腺乳頭狀癌組織的FAK蛋白表達陽性率為(75%)，癌旁組織的陽性率為(26.7%)，通過卡方檢驗，χ2=28.041,P=0.000,兩組之間差別有明顯統計學意義。如表1。

圖1　人甲狀腺乳頭狀癌和癌旁組織中 FAK，

組別病例個數FAK蛋白染色陰性++++++陽性率/%甲狀腺乳頭狀癌組織6015729975甲狀腺乳頭狀癌旁組織6044142026.7

2.1.2FAK蛋白表達與人甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移的關系

甲狀腺乳頭狀癌患者，可分為淋巴結轉移組(33)及未淋巴結轉移組(27)，有淋巴結轉移組陽性率為93.9%，未淋巴結轉移組陽性率為51.9%，淋巴結轉移組陽性率明顯高于未淋巴結轉移組，兩組之間比較，在統計學上有明顯差異。如表2。

表2　癌組織 FAK蛋白表達與淋巴結轉移之間關系

2.2 MMP-9蛋白的表達

2.2.1MMP-9蛋白在癌組織及癌旁組織中的表達

在人甲狀腺癌組織切片中發現，MMP-9蛋白主要表達于癌細胞胞漿內，呈黃色或者黃褐色顆粒，呈密集型表達；而在癌旁組織中，表達少、稀疏甚至沒有表達。如圖1(C、D)。人甲狀腺乳頭狀癌組織的MMP-9蛋白表達陽性率為(70.0%)，癌旁組織的陽性率為(11.7%)，通過卡方檢驗，χ2=42.254,P=0.000,兩組之間差別有明顯統計學意義。如表3。

表3　不同組織中 MMP-9蛋白染色統計表

2.2.2MMP-9蛋白表達與人甲狀腺乳頭狀癌淋巴結轉移的關系

在甲狀腺乳頭狀癌患者中，可分為淋巴結轉移患者(33例)及未淋巴結轉移患者(27例)，有淋巴結轉移組陽性率(90.9%)明顯高于未淋巴結轉移組(44.4%)，兩組之間比較，在統計學上有明顯差異。如表4。

表4　癌組織 FAK蛋白表達與淋巴結轉移之間關系

3結論

甲狀腺乳頭狀癌(PapillaryThyroidCarcinoma,PTC)作為最常見的甲狀腺癌，其多見于中青年,女性多于男性，轉移的主要方式為淋巴轉移，初次確診時，淋巴結的轉移率高達60.9%[8]。甲狀腺乳頭狀癌的分化程度高，因此預后好，5年及10年的生存率高達96%、90%，約10%的患者死于該病,同時很多患者有著死亡和復發的危險[9]。目前主要的治療方式為手術及內分泌治療為主，但其術后復發和轉移仍為研究的重點。

研究表明FAK在多種惡性腫瘤中高表達，并在體外實驗中證實，與腫瘤細胞存活、增殖、黏附、侵襲和轉移都密切相關[7,10,11]。FAK作為信號轉導的關鍵分子,可傳遞由胞外到胞內的多種信號,其中FAK可通過FAK-Ras-MAPK途徑，調節基質金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPS)的表達，參與腫瘤的浸潤和轉移[12,13]。腫瘤的侵襲轉移是一個復雜的、多階段過程，細胞外基質及基膜的破壞是其重要的步驟之一。MMP-9是MMPS家族中分子量最大的明膠酶，其可降解細胞外基質及基膜，在眾多腫瘤中如胃癌、乳腺癌，與腫瘤的侵襲和轉移有關[14,15]。

本研究結果顯示，甲狀腺乳頭狀癌組織中FAK蛋白表達陽性率為75%，明顯高于癌旁組織26.7%，FAK蛋白表達陽性率在伴淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組,陽性率分別為93.9%和51.9%， 均在統計學有顯著性差異(P<0.05)。此研究結果與Weiner[16]等在結腸癌、甲狀腺癌研究結果相似，提示FAK參與甲狀腺乳頭狀癌的發生、發展、侵襲、轉移。本實驗同時測定了MMP-9在甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁組織中表達，結果顯示甲狀腺乳頭狀癌組織MMP-9的表達增高，陽性率為70.0%，而癌旁組織表達較低甚至不表達，陽性率為11.7%，兩組比較，在統計學上有明顯差異(P<0.05)。而且我們研究發現伴有淋巴結轉移組陽性率明顯高于無淋巴轉移組，陽性率分別為90.9%、44.4 %。研究結果與王喜梅等[17]類似，MMP-9增強表達與甲狀腺乳頭狀癌的淋巴結轉移密切相關,該指標可能作為臨床判斷甲狀腺乳頭狀癌轉移有價值的參考指標。

研究表明，在多個惡性腫瘤中，FAK可通過FAK-Ras-MAPK途徑，調節基質金屬蛋白酶的表達，參與腫瘤的浸潤和轉移，備受醫學界的關注。本研究通過組織學角度，發現FAK、MMP-9共同高表達于甲狀腺乳頭癌組織，提示在甲狀腺乳頭狀癌發生發展以及侵襲轉移中，MMP-9可能為FAK的效應分子。具體的調節機制，在下一步細胞水平研究進一步證實。

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(責任編輯何杰玲)