單唾液酸四己糖神經節苷脂對缺氧缺血性腦病患兒血清NSE S-100B的影響

裴雪梅 高 然 張文武 張國英 萬勝明

廣東深圳市寶安區人民醫院新生兒科 深圳 518101

單唾液酸四己糖神經節苷脂對缺氧缺血性腦病患兒血清NSE S-100B的影響

裴雪梅 高 然 張文武 張國英 萬勝明

廣東深圳市寶安區人民醫院新生兒科 深圳 518101

目的 探討單唾液酸四己糖神經節苷脂（GM1）對缺氧缺血性腦病（HIE）患兒血清NSE、S-100B水平的影響及其作用機制。方法 隨機選擇產科同期出生1d的健康足月新生兒20例作對照組，將40例HIE患兒隨機分為常規治療組（20例）和GM1治療組（20例），GM1治療組在常規治療基礎上于生后第2天加用GM1靜滴，20mg/d，連續用藥7d。常規治療組進行常規治療。3組新生兒均于生后第1天（治療前）、第8天（治療后）時采集血液標本，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法進行血清NSE、S-100B的檢測。結果 治療前，2組HIE患兒血清中NSE、S-100B的水平高于正常新生兒（P＜0.01）；常規治療組與GM1治療組血清NSE、S-100B水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。2組第8天血清NSE、S-100B水平均低于第1天（P＜0.01）。治療后，HIE患兒血清中NSE、S-100B水平高于正常對照組（P＜0.01）。GM1治療組血清NSE、S-100B水平下降率大于常規治療組（P＜0.01）。結論 HIE患兒腦組織中神經元和神經膠質細胞均有不同程度的損傷，動態檢測血清NSE、S-100B水平，可能有助于HIE的早期診斷和判斷HIE腦損傷的修復程度，GM1對神經元及神經膠質細胞均有修復作用。

單唾液酸四已糖神經節苷脂（GM1）；缺氧缺血性腦病（HIE）；神經元特異性烯醇化酶（NSE）；S-100B

新生兒缺氧缺血性腦病（hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）是導致新生兒死亡和嬰幼兒神經系統功能障礙的主要原因之一。單唾液酸四己糖神經節苷脂（monosialotetrahexosylganglioside，GM1）可促進神經重構，對缺氧缺血引起的腦損傷有修復作用，臨床已廣泛用于治療HIE，并取得明顯療效［1-3］，但其修復機制尚不明確。神經元特異性烯醇化酶（NSE）是神經元和神經內分泌細胞產生的特異性生化標志物，S-100B是神經膠質細胞的標記蛋白。正常情況下，血中NSE和S-100B含量甚少。本研究通過檢測HIE患兒在GM1治療前和治療后血清中NSE、S-100B水平的變化，了解神經系統不同細胞的損傷程度，探討GM1修復作用的機制，為臨床應用提供依據。

1 資料與方法

1.1 納入對象 全部病例為2012-05—2013-08入住深圳市寶安區人民醫院的HIE患兒，符合HIE診斷標準［4］和下列條件：（1）入院日齡≤24h，出生體質量≥2 500g的足月新生兒。（2）無嚴重先天畸形，如膈疝、腦發育不全。（3）無大量顱內出血、無嚴重呼吸道阻塞性疾病、無貧血。

按患兒出生時間編號，查隨機表格分為GM1治療組和常規治療組各20例，2組一般情況和臨床分度差異無統計學意義（HIE分度χ2＝0.410，P＞0.05）；隨機選擇產科同期出生1d的健康足月新生兒20例作對照組。保證3組性別、日齡、出生體質量、胎齡、生產方式差異無統計學意義（性別：χ2＝2.545；日齡：F＝0.517；出生體質量：F＝0.222；胎齡：F＝0.166；生產方式：χ2＝0.17；P均＞0.05）。

1.2 治療方法 根據新生兒HIE治療方案，對2組HIE患兒均進行相同的常規治療（對癥和支持治療）。GM1治療組于出生24h后（第2天）靜滴GM1（申捷，齊魯制藥有限公司），20mg/d，連續用藥7d。

1.3 檢測指標

1.3.1 標本采集：2組HIE患兒均于出生后第1天和生后第8天（即GM1治療前和治療后）分別采取股靜脈血3mL，同時采取正常對照組新生兒股靜脈血3mL，置于無熱原和內毒素的試管內，3 000rpm離心10min，分離血清，去除溶血標本，每份血清分為2份，按組標記，-70℃冰箱保存待測。

1.3.2 指標檢測：采用NSE試劑盒，用雙抗體夾心ABCELISA法進行血清NSE的檢測；采用S100B蛋白試劑盒，用雙抗體夾心ABC-ELISA法進行血清S100B的檢測（ELISA試劑盒有上海恒遠生物科技有限公司提供）。

1.4 統計學方法 應用SPSS 20.0統計學軟件進行統計分析。計量資料用均數±標準（ˉx±s）表示，進行正態檢驗和方差齊性檢驗，組間比較采用配對設計的t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，均數的兩兩比較采用LSD檢驗。P ＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 治療前后各組血清NSE、S-100B水平變化比較（1）治療前（第1天），2組HIE患兒血清中NSE、S-100B的水平高于正常新生兒，差異有統計學意義（P＜0.01）；常規治療組與GM1治療組血清中NSE、S-100B水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。（2）3組第8天血清NSE、S-100B水平均低于第1天，差異有統計學意義（P＜0.01）。（3）治療后第8天，HIE患兒血清中NSE、S-100B水平高于正常對照組，差異有統計學意義（P＜0.01）。見表1。

表1 3組治療前后血清NSE、S-100B水平變化比較（ˉx±s）

2.2 治療前后各組血清NSE、S-100B下降率比較 2組HIE患兒血清中NSE、S-100B水平下降率大于對照組，差異有統計學意義（P＜0.01）；GM1治療組血清中NSE、S-100B水平下降率大于常規治療組，差異有統計學意義（P＜0.01）。見表2。

表2 治療前后3組血清NSE、S-100B下降率比較（ˉx±s）

3 討論

NSE主要存在于神經元和神經內分泌細胞中，正常血液中NSE含量甚微，波動范圍小，相對穩定；腦損傷后神經細胞受損，血腦屏障破壞，NSE釋放入腦脊液及血液。研究表明，NSE是早期判斷神經細胞損傷的靈敏指標，且與病情嚴重程度呈正相關［5］，血清NSE水平可以評估HIE的嚴重程度和神經系統后遺癥發生率［6］。S-100B（S-100Bprotein，S-100B）是一種酸性鈣結合蛋白，分子是由α亞基和β亞基組成，特異性地存在于中樞神經系統的星形、少突、大、小膠質細胞內，被認為是神經膠質的標記蛋白。研究表明，血清S-100B水平可作為腦損傷的敏感性和特異性標記物［7-8］。本研究結果顯示，HIE患兒經歷缺氧缺血以后，血清中NSE、S-100B水平均顯著升高，表明HIE患兒的神經元及神經膠質細胞均受到不同程度的損傷。本文結果與上述文獻報道一致。由此可見，臨床上遇有缺氧缺血病史并有神經系統癥狀和體征的患兒，同時檢測外周血中NSE、S-100B水平的變化，則有助于了解患兒有無神經元及神經膠質細胞損傷及其損傷程度。

本文結果顯示，對照組健康新生兒和HIE組患兒第8天血清NSE、S-100B水平均低于第1天水平，表明在正常情況下和疾病狀態下，NSE、S-100B水平在新生兒體內可能存在自然降解過程。尚未見文獻報道這一現象，但新生兒屬于特殊的群體，體內多種生化指標可隨著日齡而變化（如白細胞、心肌酶、膽紅素等）。因此，在把NSE、S-100B水平作為判斷神經元和神經膠質細胞損傷及其損傷程度的指標時，應考慮新生兒日齡因素對其造成的影響。本文結果顯示，治療后（第8天），HIE患兒常規治療組和GM1治療組血清中NSE、S-100B水平高于正常對照組，表明經過7d治療后，神經元和神經膠質細胞尚未完全恢復，仍需繼續治療。可能是因本研究選擇的HIE患兒中重度的比例（65％）較大，腦損傷的恢復需要較長時間所致。

GM1是含唾液酸的糖神經鞘脂，存在于哺乳類動物細胞膜，是神經細胞膜的組成成分，在神經發生、生長、分化過程中起必不可少的作用，對于損傷后的神經修復也非常重要。研究表明，當受到缺氧缺血刺激時，新生大鼠腦內的GM1減少，從而引起神經細胞死亡和大腦發育延遲［9］；外源性GM1對缺氧缺血引起的腦白質損傷有保護作用，外源性GM1是唯一可以透過血腦屏障的一種節神經苷脂，可進入中樞神經系統，并整合到神經細胞膜發揮作用［10］；GM1在圍生期缺血缺氧性腦損傷中具有雙重作用，急性期可拮抗興奮性氨基酸的興奮性神經毒性，保護細胞膜完整性，抑制一氧化氮（NO）合成和凋亡；恢復期可增強神經營養因子的作用，促進修復［11］。本研究結果顯示，GM1治療組血清中NSE、S-100B水平下降率明顯大于常規治療組，即GM1對神經元及神經膠質細胞均有修復作用。其修復機制可能為：在HIE患兒中，缺氧缺血使神經細胞受到損傷，神經細胞膜上的GM1減少，細胞膜的完整性受到破壞，血腦屏障的通透性增加，NSE、S-100B釋放入腦脊液及血液；而外源性的GM1可透過血腦屏障，進入中樞神經系統，與神經細胞膜結合，保證細胞膜的完整性，且能促進神經元萌發突起，提供充足的營養與能量，促進受損細胞的修復和再生；同時可對抗興奮性氨基酸和自由基的神經毒性，并減少自由基對細胞膜的損害。GM1對HIE患兒腦損傷的具體修復機制，以及是否可通過動態觀察血清中NSE、S-100B的水平調整臨床治療HIE的時間，為GM1的使用療程提供實驗室依據，有待進一步研究。

［1］吳立新.單唾液酸四己糖神經節苷脂治療新生兒缺氧缺血性腦病的療效及對血清TNF-α、IL-6的影響［J］.現代中西醫結合雜志，2013，22（14）：1 524-1 526.

［2］劉靜炎.神經節苷脂治療新生兒缺氧缺血性腦病療效觀察［J］.中國實用神經疾病雜志，2010，13（10）：77-78.

［3］牛淑娟，王寶風，張雪梅，等.單唾液酸四己糖神經節苷脂治療新生兒缺氧缺血性腦病療效觀察［J］.實用兒科臨床雜志，2004，19（8）：698-698，709.

［4］楊于嘉，姚裕家.新生兒缺氧缺血性腦病診斷標準［J］.中華兒科雜志，2005，43（8）：584-584.

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［11］曹云.神經節苷脂對缺氧缺血性腦損傷的保護作用［J］.新生兒科雜志，2002，17（3）：133-136.

（收稿2014-03-05）

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1673-5110（2015）04-0064-02