柳州市2014年手足口病實驗室檢測結果分析

許澤輝羅世強王敬仁蔡鵬飛覃肖唐寧★

·論著·

柳州市2014年手足口病實驗室檢測結果分析

許澤輝1，2羅世強1，2王敬仁1，2蔡鵬飛1，2覃肖1，2唐寧1，2★

目的明確柳州地區手足口?。╤and，foot and mouth disease，HFMD）病毒的主要感染病毒型別及流行特征，為手足口病防治提供科學依據。方法收集2014年1月至2014年12月6 667例疑似手足口病感染者。運用實時熒光定量PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）方法，對腸道病毒71型（enterovirus 71，EV71）和柯薩奇腸道病毒16型（coxsackievirus A16，CoxA l6）特異性進行核酸檢測。結果6 667例患者標本中，EV71陽性數為1 310例，陽性率為19.65％，CoxA16陽性數為858例，陽性率12.87％。EV71和CoxA16合并感染陽性數為11例，陽性率為0.16％。男性人群手足口病發病率高于女性，4月～9月份為發病高峰。結論柳州市2014年手足口病主要致病病毒為EV71、CoxA16，基因分型對手足口病臨床診治及疾病爆發的預防有一定指導意義。

手足口??；病毒核酸；流行特征；防控措施

由腸道病毒（enterovirus，EV）引起的手足口?。╤and，footandmouth disease，HFMD）是一種兒童期常見傳染病。該病于5歲以下兒童好發，大多數患兒癥狀較輕，表現為低熱、厭食、口痛及手、足、口腔等部位出現小潰瘍或小皰疹。少數患兒會出現心肌炎、無菌性腦膜炎、肺水腫等并發癥。若病情發展快，可導致個別重癥患兒死亡。目前為止已有20多種（型）的腸道病毒可引發手足口病，最為常見的是腸道病毒71型（enterovirus 71，EV71）和柯薩奇病毒A16型（coxsackievirus A16，Cox A16）［1，2］。本文對2014年采集的共6 667例疑似HFMD感染者的咽拭子、糞便或皰疹液標本進行了EV核酸檢測，并結合病例臨床信息對結果進行分析。

1 對象與方法

1.1 對象

按照《手足口病預防控制指南（2010年版）》要求，采集柳州市婦幼保健院的6 667例疑似HFMD感染者（即發熱及手掌、腳掌、股部或口腔黏膜出現皰疹的患者）的咽拭子、糞便、皰疹液標本，其中男性3 846例，女性2 821例，年齡5天至14歲，平均年齡（2.30±0.02）歲。

1.2 方法

1.2.1 病毒RNA核酸提取

采用中山大學達安基因股份有限公司的病毒RNA核酸提取試劑盒進行EV核酸提取，嚴格按照說明書操作，收集病毒RNA提取液30μL，保存于－20℃備用。

1.2.2 EV核酸檢測

采用中山大學達安基因股份有限公司的腸道病毒71型核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）、柯薩奇病毒A16型核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）進行EV17、Cox A16的核酸檢測，所用儀器為美國ABI公司ABI 7300型實時熒光定量PCR基因擴增儀。實時熒光定量PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）的反應體系和反應條件參照其操作說明書進行。

1.3 統計學分析

采用SPSS 14.0軟件進行統計學分析，計數資料采用χ2檢驗進行分析，P＜0.05具有統計學意義。

2 結果

2.1 柳州市兒童手足口病的概況

柳州市手足口病全年的流行趨勢見表1。EV71在不同季節流行情況的差異有顯著意義（χ2＝65.33，P＜0.001），其中以春夏兩季最高；Cox A16在不同季節流行情況的差異有顯著意義（χ2＝335.03，P＜0.001），其中以冬春兩季最高；EV71陽性合并Cox A16陽性的發病情況無季節差異。

對6 667例疑似HFMD感染者標本進行RT-qPCR檢測，結果顯示EV71型陽性者1 310例，Cox A16陽性者858例，EV71、Cox A16的陽性率分別為19.65％（1 310／6 667）、12.87％（858／6 667），EV71和Cox A16同時陽性者11例，陽性率為0.16％，具體結果見表2。EV71型的陽性檢出率顯著高于Cox A16的檢出率（χ2＝112.53，P＜0.001），部分檢測結果見圖1。

2.2 人群分布特征

表1 不同季節患兒的EV檢出情況Table 1 The detectable rates of the virus subtypes in different seasons

按照不同年齡組進行統計分析，計算其構成

比。按照手足口病病例的年齡（0～、1～、2～、3～、4～、＞5歲）進行分組，在EV71病毒感染組中，不同年齡組發病構成由高到低依次為3～（31.71％）、2～（24.33％）、＞5（23.90％）、4～（22.44％）、1～（17.79％）、0～（9.00％），χ2＝220.20，P＜0.001；在Cox A16病毒感染組中，不同年齡組發病構成由高到低依次為4～（18.05％）、2～（13.79％）、3～（13.02％）、＞5（12.91％）、1～（12.47％）、0～（11.05％），χ2＝15.64，P＝0.008。EV71和Cox A16病毒合并感染主要分布在2歲～5歲的兒童中，具體結果見表2。

圖1 EV71、Cox A16基因分型結果Figure 1 The genotyping results of EV71 and Cox A16

表2 不同年齡患兒的EV檢出情況Table 2 The detectable rates of the virus subtypes in differentages

2.3 性別分布特征

根據性別對不同病原體進行統計分析，統計結果見表3。EV71在男女患兒中的陽性率均最高，其次為Cox16，EV71合并Cox A16感染的患兒則比較罕見；在EV71、Cox A16病毒感染及EV71陽性合并Cox A16陽性組中，男性人群的手足口病發病率與女性之間的差異無顯著意義，說明EV71、Cox A16病毒感染在不同性別的感染情況無差異。

2.4 月份分布特征

2014年手足口病的流行發病時間是4月～9月，5月份最高，達到2 355例；1月、2月、3月、11月和12月發病人數在100以下；4月～9月發病人數為6 338例，占全年的95.06％（圖2）。

表3 不同性別患兒的EV檢出情況Table 3 The detectable rates of the virus subtypes in differentgenders

圖2 不同月份兒童手足口病發病人數趨勢Figure 2 Prevalent features of HFMD in differentmonths

2.5 重型病例情況分析

2014年備案的重型中，由EV71引起的有68例，其中危重型4例，重型55例，轉為危重9例，而Cox A16引起的重型病例一共5例（3例重型，2例轉為危重）。EV71病毒感染導致危重型、重型及轉為危重型病之和與Cox A16病毒感染導致危重型、重型及轉為危重型病之和存在著明顯的差異（P＜0.05），且EV71病毒感染更容易導致重型手足口病，結果見表4。

表4 EV71與CoxA16病毒感染所導致的重型病例分布情況Table 4 Severe HFMD caused by EV71 and CoxA16

3 討論

手足口病一般由多種腸道病毒共同引起，其中以Cox A16、EV71為主。大多數患者癥狀輕微，部分病例臨床表現不典型，患兒就診時間早，早期只表現為發熱，無皮疹及其他表現，給早期診斷帶來困難，易導致誤診，是引起危重手足口發生的重要原因之一［3］。因此對于流行季節的嬰幼兒，雖無手足口病的典型表現也要高度懷疑，做進一步實驗室診斷，而采用簡便、快捷、準確的技術則是實驗室診斷的關鍵［4］。

RT-qPCR是將PCR技術和熒光檢測技術結合起來實現了對核酸的自動化檢測的技術，其原理是在PCR反應體系中加入熒光基團，利用PCR對DNA的高效擴增，運用高特異性的探針和高敏感性的光譜技術檢測目的片段及定量。RT-qPCR對病毒的檢測極大地縮短了免疫學檢測的“窗口期”問題，可以盡早發現病毒攜帶者，為疾病的預防及診治提供科學依據。因此熒光定量基因檢測方法可準確、靈敏地反映EV感染數量和治療恢復情況，對EV診斷和療效的觀察具有重要的指導作用［5－8］。

本研究6 667例患者標本中，檢測出EV71陽性數為1 310例，陽性率為19.65％；CoxA16陽性數為858例，陽性率12.87％；EV71和CoxA16合并感染陽性數為11例，陽性率為0.16％。結合本地區與國內其他地區的結果說明EV71手足口病最常見的病原體［9］。然而各地EV71和CoxA16占手足口病原體的比例存在差異，Yang和Li等［10－11］報道杭州與武漢等地的EV71和CoxA16病毒感染與本地區的相近，Lu等報道廣州地區EV71的感染明顯高于本地區［12］。從我們檢測結果表明全年均有發病，以夏、秋季為高發季節，5月份病例突然增加，并迅速達最高峰，10月份發病人數開始下降，發病人數主要集中在4月～9月。王春榮和Xu等［13－14］報道濟南和云南地區的發病趨勢與本地相似，夏季為高發季節，5月～7月是發病高峰期。由此可以推測手足口病的發病與季節有直接的關系，春夏兩季是手足口病的發病流行高峰。因此在疾病預防控制上應加強該段時間的監測與控制，做好消毒及疾病預防宣傳工作，以防止疾病的暴發流行［4］。本研究男性發病人數多于女性，可能是由于手足口病是由腸道病毒引起的，主要由接觸了帶有病毒的鼻咽排泄物、糞便和皰疹液而感染。而男孩生性好動，活動范圍大，比女孩更容易接觸被手足口病患者污染過的物品而感染手足口病。手足口重型病例，主要以EV71感染的為主。EV71感染除了引起手足口病以外，還可能引起嚴重的神經系統疾病，如腦干腦炎、無菌性腦膜炎和脊髓灰質炎樣麻痹等，甚至危及生命，因此在早期檢測到EV71陽性的病例，需加強監測，預防病情的加重及并發癥的發生［15－18］。

對于嬰幼兒而言，其免疫系統發育尚未完全成熟，體內無相應的抗體保護，機體的抵抗力相對較差，容易受到EV的感染［4，17］。因此應加強對嬰幼兒特別是5歲以下兒童進行EV病毒檢測和分型。EV感染的早期診斷，不僅能防止疾病的進一步惡化，更能避免手足口病在本地區流行性爆發［19］。從我們所做結果來看，RT-qPCR用于腸道病毒的檢測，對于疑似手足口病患者，可以做到早診斷、早報告、早隔離和早治療，能夠廣泛地運用于各種實驗室檢測。在柳州市4月～9月份手足口病高發的季節，對于出現發熱及手掌、腳掌、股部或口腔黏膜出現皰疹等疑似手足口病臨床表現的患者，腸道病毒感染的檢測是必不可少的。

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Analysis of the laboratory diagnosis results of hand-foot-mouth disease in 2014 in Liuzhou city

XU Zehui1,2,LUO Shiqiang1,2,WANG Jingren1,2,CAIPengfei1,2,QIN Xiao1,2,TANG Ning1,2★
(1.Department of Clinical Laboratory,Liuzhou Maternal and Child Care Hospital,Liuzhou,Guangxi,China, 545001；2.Liuzhou Key Laboratory of Birth Disease Prevention and Control,Liuzhou,Guangxi,China, 545001)

Objective To study the virus subtypes of hand-foot-mouth disease(HFMD)and prevalent features so as to provide scientific basis for the surveillance and control of HFMD.Methods A total of 6 667 specimens were collected from January to December in 2014.Nucleic acid in genotype of enterovirus 71(EV71)and coxsackievirus 16(CoxA16)were detected by real-time quantitative PCR(RT-qPCR).Results 1 310 cases(19.65％),858 cases(12.87％)and 11 cases(0.16％)were positive for EV71, CoxA16 and EV71 combined w ith CoxA16,respectively.Male’smorbidity was higher than that of female’s, and peaks of incidence occurred from April to September.Conclusion EV71 and CoxA16 are the main pathogenic viruses of HFMD in Liuzhou in 2014.Genetic analysis has profound guiding significance for HFMD diagnosis and outbreaks prevention.

Hand-foot-mouth disease；Viral nucleic acids；Prevalent features；Surveillance and controlmeasures

柳州市科學研究與技術開發計劃項目（2014G020404）

1.柳州市婦幼保健院檢驗科，廣西，柳州545001 2.柳州市出生缺陷預防與控制重點實驗室，廣西，柳州545001

★通訊作者：唐寧，E-mail：tn825＠126.com