血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP聯(lián)合檢測在膿毒癥患者中的臨床應(yīng)用價值

樊兵胥順

·論著·

血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP聯(lián)合檢測在膿毒癥患者中的臨床應(yīng)用價值

樊兵1★胥順2

目的探討血清脂聯(lián)素、腫瘤細(xì)胞壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）、C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）聯(lián)合檢測在膿毒癥患者中的臨床應(yīng)用價值。方法選取2013年6月至2014年6月重慶市九龍坡區(qū)第五人民醫(yī)院重癥監(jiān)護(hù)病房（intensive care unit，ICU）收治的40例膿毒癥病例為觀察組，另選隨機(jī)抽取40例同期在本院行身體檢查的正常體檢者為對照組，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）測定兩組血清脂聯(lián)素、TNF-α水平，應(yīng)用免疫比濁法測定兩組CRP水平。結(jié)果觀察組血清TNF-α、CRP水平均高于對照組（P＜0.05），而血清脂聯(lián)素水平低于對照組（P＜0.05）。隨著急診膿毒癥死亡風(fēng)險（mortality in emergency department sepsis，MEDS）增加，患者血清TNF-α、CRP水平升高，而血清脂聯(lián)素水平下降（P＜0.05）。結(jié)論聯(lián)合檢測血清TNF-α、CRP、脂聯(lián)素能更加準(zhǔn)確的預(yù)測膿毒癥患者病情進(jìn)展，具有一定的臨床應(yīng)用價值。

血清脂聯(lián)素；腫瘤細(xì)胞壞死因子α；C反應(yīng)蛋白；膿毒癥

膿毒癥［1］即感染（可能或已有的）感染引起的全身炎癥反應(yīng)，可導(dǎo)致器官功能障礙或組織灌注不足。膿毒癥是重癥監(jiān)護(hù)病房（intensive care unit，ICU）病房中常見的危急重癥，患者治療不及時則可導(dǎo)致多器官功能衰竭而死亡［2－3］。其高發(fā)病率常導(dǎo)致ICU過度擁擠，危重患者停留時間延長，明顯加大了醫(yī)院負(fù)擔(dān)及患者死亡風(fēng)險。相關(guān)研究指出，膿毒癥的發(fā)生與機(jī)體感染后產(chǎn)生大量炎癥因子并作用于靶器官導(dǎo)致機(jī)體多器官功能衰竭有關(guān)［4－5］。炎癥因子的被激活及大量釋放是引起膿毒癥的重要因素，通過控制及抑制炎癥因子水平的釋放將有助于膿毒癥病情的改善［6－7］。脂聯(lián)素是一種新近發(fā)現(xiàn)由脂肪細(xì)胞分泌的特異性蛋白，具有抗炎癥的作用，介導(dǎo)促炎反應(yīng)的作用［7－8］，其濃度水平與炎癥因子分泌水平呈負(fù)相關(guān)。通過測定血清中脂聯(lián)素水平可有效預(yù)測危重病患者病情進(jìn)展情況，有助于盡早對患者病情作出準(zhǔn)確的診斷。C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）是指在機(jī)體受到感染或組織損傷時血漿中一些急劇上升的蛋白質(zhì)［9－10］，當(dāng)CRP水平增加時則預(yù)示著機(jī)體出現(xiàn)急性炎癥反應(yīng)［11］。腫瘤細(xì)胞壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）是由巨噬細(xì)胞分泌的炎癥因子，正常水平的TNF-α可以調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、抗感染、促進(jìn)組織修復(fù)、引起腫瘤細(xì)胞凋亡等，但大量產(chǎn)生和釋放則會破壞機(jī)體的免疫平衡，與其它炎癥因子一起產(chǎn)生多種病理損傷［12］，其水平升高則預(yù)測著患者體內(nèi)出現(xiàn)炎癥［13］。酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法操作簡單安全、靈敏度較高、特異性較好，可檢測人血清APN及TNF-α含量。CRP的檢測方法眾多，本實驗采用靈敏度和精確度較高且成本較低的比濁法。

本研究將通過聯(lián)合檢測膿毒癥患者血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP水平，并探討這些指標(biāo)對預(yù)測膿毒癥患者病情進(jìn)展的臨床價值。

1 資料及方法

1.1 臨床資料

自2013年6月至2014年6月連續(xù)收集重慶市九龍坡區(qū)第五人民醫(yī)院ICU收治的40例嚴(yán)重膿毒癥病例為研究對象（觀察組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）病例均符合美國危重病學(xué)會（Society of Critical Care Medicine，SCCM）對嚴(yán)重膿毒癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）病例均簽署知情同意書；（3）均獲得本院倫理委員會批準(zhǔn)。同時排除肝腎功能不全、惡性腫瘤、嚴(yán)重心血管疾病、自身免疫性疾病及近期接受糖皮質(zhì)激素治療的患者。其中男性24例，女性16例，年齡22歲～78歲，平均年齡（48.96±3.45）歲；肺部感染12例，腹腔感染10例，泌尿感染5例，其他部分感染3例。另選隨機(jī)抽取40例同期在本院行身體檢查的正常體檢者為對照組，男22例，女18例，年齡20歲～67歲，平均年齡（49.36±3.12）歲。兩組性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 資料收集

記錄觀察組及對照組性別、年齡、入院時間、臨床癥狀、生化指標(biāo)、血常規(guī)、生命體征等情況，并記錄患者感染部位及主訴癥狀。急診膿毒癥死亡風(fēng)險（mortality in emergency department sepsis，MEDS）評分是2003年Shapiro等［14］通過前瞻性研究篩選出與病死率相關(guān)的9個獨(dú)立危險因素而組成的一套評分系統(tǒng)，根據(jù)此系統(tǒng)進(jìn)行評分（表1），其中MEDS≤4分：極低危；MEDS 5～7分：低危型；MEDS 8～12分：中危型；MEDS 13～15分：高危型；MEDS＞15分：極高危型。

1.2.2 血清TNF-α、CRP、脂聯(lián)素測定

觀察組入院后于次日清晨空腹抽取靜脈血5 m L，體檢者于體檢當(dāng)天空腹抽取靜脈血5m L。以3 000 r／m in離心處理5min后，留取上清，并置于-20℃保存?zhèn)溆谩?yīng)用ELISA測定2組樣本血清脂聯(lián)素、TNF-α水平。血清脂聯(lián)素試劑盒由上海西唐生物技術(shù)公司提供，TNF-α試劑盒由北京紫金生物技術(shù)公司提供。CRP水平采用免疫比濁法測定，測試過程嚴(yán)格按照試劑盒及儀器說明書進(jìn)行操作。ELISA法簡要操作流程如下：標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本及一抗加入反應(yīng)孔內(nèi)；37℃溫育1 h；洗滌并用吸水紙拍干，重復(fù)此操作3次；加入80μL的辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素（horseradish peroxidase conjugated streptavidin，HRP-Streptavidin），37℃溫育30m in；洗滌并用吸水紙拍干，重復(fù)此操作3次；加入底物A、B各50μL，37℃溫育10m in，避免光照；迅速加入50μL終止液，立即測定結(jié)果；在450 nm波長處測定各孔的光密度（optical density，OD）值。CRP的測定為兩點(diǎn)終點(diǎn)法，試劑1＋樣本在37℃保溫2min～5m in，加入試劑2，分別于保溫10 s和300 s后記錄吸光度（absorbance，A）。

表1 MEDS評分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Mortality in emergency department sepsis（MEDS）score

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。組間計量資料比較采用t檢驗，不同MEDS評分患者血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP水平分析應(yīng)用方差分析，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP水平對比

觀察組血清TNF-α、CRP水平均高于對照組（P＜0.05），而血清脂聯(lián)素水平低于對照組（P＜0.05），結(jié)果詳見表2。

表2 觀察組與對照組血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP水平對比（±s）Table 2 Comparison of serum adiponectin，TNF alpha and CRP in observation group and control group（±s）

表2 觀察組與對照組血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP水平對比（±s）Table 2 Comparison of serum adiponectin，TNF alpha and CRP in observation group and control group（±s）

組別觀察組對照組例數(shù)40 40 t值P值血清脂聯(lián)素（mg／L）4.25±1.35 8.86±2.45 5.978 0.000 TNF-α（ng／L）62.14±10.28 20.36±5.47 6.712 0.000 CRP（mg／L）47.12±6.78 8.02±1.32 8.125 0.000

2.2 不同MEDS評分血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP水平分析

隨著MEDS增加，患者血清TNF-α、CRP水平升高，而血清脂聯(lián)素水平下降（P＜0.05），見表3。

3 討論

本研究通過聯(lián)合檢測血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP三種血清學(xué)標(biāo)志物來對膿毒癥患者病情進(jìn)行評估鑒定。結(jié)果顯示，觀察組血清TNF-α、CRP水平均高于對照組（P＜0.05），而血清脂聯(lián)素水平低于對照組（P＜0.05）。根據(jù)已有報道提示，脂聯(lián)素可作為膿毒癥治療的調(diào)控靶標(biāo)，且與血清CRP的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；也有研究［15］表明脂聯(lián)素具有抗炎效應(yīng)，采用脂聯(lián)素刺激巨噬細(xì)胞能夠顯著抑制脂多糖誘導(dǎo)的TNF-α的表達(dá)，其濃度與致炎因子TNF-α水平呈反向變化，兩者相互拮抗可能發(fā)揮抗炎作用［16］，說明血清脂聯(lián)素水平降低可能是膿毒癥發(fā)生發(fā)展的重要因素，提示脂聯(lián)素在膿毒癥病理生理過程中參與了炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)［17］，這與本研究結(jié)論一致。而如果我們進(jìn)行單個指標(biāo)的檢測，可能無法得出與膿毒癥密切相關(guān)的有意義結(jié)論。同時，我們還發(fā)現(xiàn)，觀察組中隨著MEDS評分增加，患者血清TNF-α、CRP水平升高，而血清脂聯(lián)素水平下降（P＜0.05），這也進(jìn)一步支持了前面結(jié)論，從而提示通過測定TNF-α、CRP及脂聯(lián)素水平將有助于臨床對膿毒癥患者病情的診斷，具有一定的臨床

應(yīng)用價值。

越來越多對TNF-α、CRP及血清脂聯(lián)素水平進(jìn)行聯(lián)合檢測的研究顯示［7，18］，聯(lián)合檢測3種標(biāo)志物對于膿毒癥的判斷是具有臨床價值的，在膿毒癥的病情分析、預(yù)后判斷以及療效評估中發(fā)揮了重要作用。在膿毒癥患者過程中，還有其他的一些炎癥因子也起著不可或缺的作用，因此，我們需要進(jìn)一步對更多個指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合檢測來評價其臨床應(yīng)用價值。

表3 觀察組不同MEDS評分血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP水平分析（±s）Table 3 Analysis of serum adiponectin，TNF alpha and CRP in observation group w ith different MEDS score（±s）

表3 觀察組不同MEDS評分血清脂聯(lián)素、TNF-α、CRP水平分析（±s）Table 3 Analysis of serum adiponectin，TNF alpha and CRP in observation group w ith different MEDS score（±s）

a與≤MEDS 4分相比，P＜0.05；b與MEDS 5～7分相比，P＜0.05；c與MEDS 8～12分相比，P＜0.05；d與MEDS 13～15分相比，P＜0.05

MEDS評分（分）≤4 5～7 8～12 13～15＞15 F值P值例數(shù)7 8 8 1 0 7血清脂聯(lián)素（mg／L）7.12±0.85 5.48±1.12a4.23±1.08ab3.10±0.98abc1.12±0.95abcd12.023 0.000 TNF-α（ng／L）23.45±3.28 35.16±5.485a46.98±6.825ab62.12±8.965abc72.86±9.635abcd9.686 0.000 CRP（mg／L）13.48±2.10 23.05±3.455a39.78±4.215ab52.63±3.785abc62.12±5.225abcd8.978 0.000

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Clinical application values of a combinational detection of serum adiponectin,TNF-α,CRP in patients w ith sepsis

FAN Bing1★,XU Shun2
(1.Clinical Laboratory of Jiulongpo District Fifth People's Hospital of Chongqing City,Chongqing,China, 401329；2.Darui Biotechnology Co.Ltd.,Guangzhou,Guangdong,China,510665)

Objective To investigate clinicalapplications value of a combinational detection of serum adiponectin,tumor necrosis factor-α(TNF-α),C-reactive protein(CRP)in patients w ith sepsis.Methods Serum sampleswere chosen as the observation group from 40 patientsw ith sepsis in intensive care unit(ICU).40 healthy persons were chosen as the control group.A ll 80 specimens were collected in Jiulongpo District Fifth People's Hospital from June 2013 to June 2014.Concentration of adiponectin and TNF-αweremeasured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).CRPweremeasured by immunoturbidimetry in both groups.Result s Both levels of TNF-α,CRP in the observation group were higher than that in the control group while the serum adiponectin was lower.The differences were statistically significant(P＜0.05).Moreover,w ith the risk of mortality in emergency department sepsis(MEDS)increased,the levels of TNF-αand CRP were elevated while adiponectin was decreased.The differences were statistically significant(P＜0.05),as well.Conclusion Themethod has certain clinical applications values.

Serum adiponectin；Tumor necrosis factor-α；C-reactive protein；Sepsis

國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃（863計劃）（2012AA020205）

1.重慶市九龍坡區(qū)第五人民醫(yī)院檢驗科，重慶401329 2.廣州市達(dá)瑞生物技術(shù)股份有限公司，廣東，廣州510665

★通訊作者：樊兵，E-mail：767861243＠qq.com