HPLC法測(cè)定人參健脾丸中橙皮苷的含量

北京市平谷區(qū)食品藥品安全監(jiān)控中心（101200）劉紅玉 楊旭 劉志新 范保瑞 馬逢伯 張悅

人參健脾丸是由人參、白術(shù)及陳皮等11味藥組成，用于治療脾胃虛弱所致的飲食不化、脘悶嘈雜、惡心嘔吐、腹痛便溏、不思飲食、體弱倦怠等病癥。2010版《中國(guó)藥典》[1]及文獻(xiàn)報(bào)道[2]均采用高效液相色譜法測(cè)定橙皮苷的含量，以控制藥品質(zhì)量。但其供試品溶液制備方法均為索氏提取器中加石油醚（60～90℃）加熱提取3小時(shí)，再用甲醇加熱提取5小時(shí)，方法用時(shí)較長(zhǎng)，樣品易損失，不利于日常檢驗(yàn)[3]。本試驗(yàn)采用超聲法制備人參健脾丸的供試品溶液，測(cè)定其橙皮苷含量，操作簡(jiǎn)單，用時(shí)短并且節(jié)省化學(xué)試劑，利于環(huán)境保護(hù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津公司LC-2010AHT高效液相色譜儀，LC-2010 Detector檢測(cè)器。

1.2 藥品試劑 人參健脾丸(藥店購(gòu)買(mǎi)2個(gè)廠(chǎng)家的人參健脾丸)；水：UP水；其余試劑均為色譜純。對(duì)照品：橙皮苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110721-201316，95.3%）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠Waters symmetry C18（5μm 4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相：甲醇-醋酸-水（35:4:61）；檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm；柱溫：40℃；流速1.0mL·min-1；理論塔板數(shù)按橙皮苷計(jì)算應(yīng)不低于2000。

附圖1 橙皮苷對(duì)照品的高效液相色譜圖（1橙皮苷）

附圖2 人參健脾丸樣品的高效液相色譜圖（1橙皮苷）

附表1 加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果（n=5）

附表2 樣品測(cè)定結(jié)果

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)取，加甲醇制成每1mL含0.25 mg的溶液，即得。精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。具體見(jiàn)附圖1。

2.3 供試品溶液的制備 取大蜜丸，剪碎，混勻，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kH）40min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。具體見(jiàn)附圖2。

2.4 線(xiàn)形關(guān)系考察 精密吸取橙皮苷對(duì)照品溶液（0.7504 mg·mL-1）1.0，3.0，5.0，7.0，10.0 mL，分別置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取10μL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，橙皮苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并計(jì)算得回歸方程：Y=2*107X-16695，r=0.9997，結(jié)果表明，橙皮苷在0.030～0.300mg·mL-1范圍內(nèi)線(xiàn)形良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取人參健脾丸供試品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次求得樣品中橙皮苷含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為RSD=0.20%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取人參健脾丸供試品溶液10μL，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣一次，觀(guān)察供試品溶液穩(wěn)定性，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.43%。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液制備后24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按上述色譜條件對(duì)同一廠(chǎng)家樣品6份進(jìn)行測(cè)定，求得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.76%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，精密稱(chēng)取已知含量的樣品(橙皮苷含量2.6983mg·g-1)1.5g，平行5份，分別精密加入橙皮苷對(duì)照品（4mg），按上述條件操作，計(jì)算加樣回收率，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)附表1。

2.9 樣品測(cè)定結(jié)果 取樣品，按本法及2010版《中國(guó)藥典》方法檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)附表2。

3 討論

索氏提取法濾紙容易吸附橙皮苷，且樣品轉(zhuǎn)移容易造成損失，因此索氏提取法的含量測(cè)定結(jié)果略低于本法[4]。本法操作簡(jiǎn)單，檢驗(yàn)時(shí)間較短，消耗溶劑較少，有利于環(huán)境保護(hù)。