HPLC法測定人參健脾丸中橙皮苷的含量

北京市平谷區食品藥品安全監控中心（101200）劉紅玉 楊旭 劉志新 范保瑞 馬逢伯 張悅

人參健脾丸是由人參、白術及陳皮等11味藥組成，用于治療脾胃虛弱所致的飲食不化、脘悶嘈雜、惡心嘔吐、腹痛便溏、不思飲食、體弱倦怠等病癥。2010版《中國藥典》[1]及文獻報道[2]均采用高效液相色譜法測定橙皮苷的含量，以控制藥品質量。但其供試品溶液制備方法均為索氏提取器中加石油醚（60～90℃）加熱提取3小時，再用甲醇加熱提取5小時，方法用時較長，樣品易損失，不利于日常檢驗[3]。本試驗采用超聲法制備人參健脾丸的供試品溶液，測定其橙皮苷含量，操作簡單，用時短并且節省化學試劑，利于環境保護。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津公司LC-2010AHT高效液相色譜儀，LC-2010 Detector檢測器。

1.2 藥品試劑 人參健脾丸(藥店購買2個廠家的人參健脾丸)；水：UP水；其余試劑均為色譜純。對照品：橙皮苷（中國食品藥品檢定研究院，批號110721-201316，95.3%）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠Waters symmetry C18（5μm 4.6 mm×250 mm）；流動相：甲醇-醋酸-水（35:4:61）；檢測波長：284 nm；柱溫：40℃；流速1.0mL·min-1；理論塔板數按橙皮苷計算應不低于2000。

附圖1 橙皮苷對照品的高效液相色譜圖（1橙皮苷）

附圖2 人參健脾丸樣品的高效液相色譜圖（1橙皮苷）

附表1 加樣回收率試驗測定結果（n=5）

附表2 樣品測定結果

2.2 對照品溶液的制備 取橙皮苷對照品適量，精密稱取，加甲醇制成每1mL含0.25 mg的溶液，即得。精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。具體見附圖1。

2.3 供試品溶液的制備 取大蜜丸，剪碎，混勻，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kH）40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。具體見附圖2。

2.4 線形關系考察 精密吸取橙皮苷對照品溶液（0.7504 mg·mL-1）1.0，3.0，5.0，7.0，10.0 mL，分別置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取10μL，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，橙皮苷進樣量為橫坐標繪制標準曲線并計算得回歸方程：Y=2*107X-16695，r=0.9997，結果表明，橙皮苷在0.030～0.300mg·mL-1范圍內線形良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取人參健脾丸供試品溶液10μL，重復進樣6次求得樣品中橙皮苷含量的相對標準偏差為RSD=0.20%。

2.6 穩定性試驗 精密吸取人參健脾丸供試品溶液10μL，每隔一定時間進樣一次，觀察供試品溶液穩定性，相對標準偏差RSD=1.43%。試驗結果表明，供試品溶液制備后24h內基本穩定。

2.7 重復性試驗 按上述色譜條件對同一廠家樣品6份進行測定，求得相對標準偏差RSD=0.76%。

2.8 加樣回收率試驗 采用加樣回收法，精密稱取已知含量的樣品(橙皮苷含量2.6983mg·g-1)1.5g，平行5份，分別精密加入橙皮苷對照品（4mg），按上述條件操作，計算加樣回收率，測定結果見附表1。

2.9 樣品測定結果 取樣品，按本法及2010版《中國藥典》方法檢測，測定結果見附表2。

3 討論

索氏提取法濾紙容易吸附橙皮苷，且樣品轉移容易造成損失，因此索氏提取法的含量測定結果略低于本法[4]。本法操作簡單，檢驗時間較短，消耗溶劑較少，有利于環境保護。