高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定萸黃連飲片中2組分含量*

申麗莎，陳國(guó)慶，楊帆，鄧開(kāi)英

（1.重慶市中藥研究院，重慶400065；2.重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶401121；3.重慶市藥物過(guò)程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶401121）

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定萸黃連飲片中2組分含量*

申麗莎1，陳國(guó)慶1，楊帆2，3，鄧開(kāi)英2，3

（1.重慶市中藥研究院，重慶400065；2.重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶401121；3.重慶市藥物過(guò)程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶401121）

目的建立同時(shí)測(cè)定萸黃連中吳茱堿和吳茱萸次堿含量的高效液相色譜法。方法采用Agilent Zobax SBC18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸溶液（35∶65），流速為2.0mL/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm。結(jié)果吳茱萸堿和吳茱萸次堿進(jìn)樣量分別在0.040 24～0.201 2μg和0.020 04～0.100 2μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r分別為0.999 8和0.999 9；平均回收率分別為97.79%和97.43%（n=6），RSD分別為2.28%和2.09%。結(jié)論該法簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確、靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于萸黃連的質(zhì)量控制。

萸黃連；吳茱萸堿；吳茱萸次堿；高效液相色譜法；含量測(cè)定

Shen Lisha1，Chen Guoqing1，Yang Fan2，3，Deng Kaiying2，3

（1.Chongqing Academy of Chinese Materia Medica，Chongqing，China 400065；2.Chongqing Institute for Food and Drug Control，Chongqing，China

401121；3.Chongqing Engineering Center for Pharmaceutical Process and Quality Control，Chongqing，China 401121）

吳茱萸始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有散寒止痛、疏肝下氣之功［1-2］。萸黃連飲片為吳茱萸水煎煮液炮制黃連所得［3］，去萸不用，去藥存性，其目的是用吳茱萸的辛熱抑制黃連的苦寒，使黃連寒而不滯又能散肝膽郁火［4-5］。萸黃連作為黃連的一種炮制品，收載于2015年版《中國(guó)藥典（一部）》黃連項(xiàng)下［6］，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)黃連生物堿進(jìn)行了鑒別和含量控制，但未對(duì)吳茱萸的有關(guān)成分進(jìn)行含量控制。現(xiàn)有很多研究報(bào)道也只檢測(cè)黃連中多個(gè)生物堿的含量來(lái)評(píng)價(jià)萸黃連飲片的質(zhì)量［7-8］，均不能很好地控制飲片的質(zhì)量。因此，參考文獻(xiàn)［9-10］，建立了同時(shí)測(cè)定萸黃連飲片中吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量的高效液相色譜法，為更好地控制萸黃連的質(zhì)量提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀（美國(guó)），HP-Chemstation色譜工作站；BP211S型電子天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；Simplicity-185型超純水機(jī)（美國(guó)Millipore公司）；KQ500型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。吳茱萸堿對(duì)照品（批號(hào)110802-200908）和吳茱萸次堿對(duì)照品（批號(hào)110801-201207）均購(gòu)自于中國(guó)藥品生物制品檢定研究院；萸黃連飲片3批，由重慶市中藥研究院2015年版《中國(guó)藥典（一部）》黃連科研任務(wù)研究組提供，經(jīng)重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院楊帆副主任中藥師鑒定確認(rèn)；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent Zobax SBC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸溶液（35∶65）；流速：2.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：對(duì)照品溶液10μL，供試品溶液20μL。在此色譜條件下的色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取吳茱萸堿10.06 mg、吳茱萸次堿10.02 mg，分置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取吳茱萸堿對(duì)照品溶液2 mL、吳茱萸次堿對(duì)照品溶液1 mL，置同一50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液；取萸黃連樣品，粉碎，過(guò)3號(hào)篩，取粉末5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%乙醇25 mL，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，浸泡1 h，超聲處理40 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用80%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。另取黃連飲片，粉碎，按供試品溶液制備方法制備，作為陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：取陰性對(duì)照品溶液20μL，注入液相色譜儀。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜圖中，在與吳茱萸堿和吳茱萸次堿對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置上無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾（圖1）。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5，10，15，20，25μL，測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量（C，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，吳茱萸堿A= 4 935.4C-7.54（r=0.999 8），吳茱萸次堿A=2 745C-4.57（r=0.9999），線性范圍分別為0.04024～0.2012μg和0.02004～0.100 2μg（n=5）。

精密度試驗(yàn)：精密吸取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果吳茱萸堿、吳茱萸次堿峰面積的RSD分別為0.8%，1.3%（n=5），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：分別取同一批萸黃連樣品，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液各6份，依法進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果吳茱萸堿、吳茱萸次堿含量的RSD分別為1.4%，2.8%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取新制備的同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12 h時(shí)進(jìn)樣20μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果吳茱萸堿、吳茱萸次堿峰面積的RSD分別為0.7%，1.3%（n=5），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱(chēng)取已測(cè)定含量的同一批萸黃連樣品（同重復(fù)性試驗(yàn)樣品）2.5 g，各6份，分置具塞錐形瓶中，分別精密加入混合對(duì)照品溶液適量，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

按擬訂的含量測(cè)定方法，對(duì)3批萸黃連樣品進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果3批樣品中吳茱萸堿的含量分別為0.037，0.019，0.011mg/g，吳茱萸次堿含量分別為0.024，0.014，0.010mg/g。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

3 討論

參考2010年版《中國(guó)藥典（一部）》吳茱萸藥材項(xiàng)下含量測(cè)定供試品溶液制備方法，以80%乙醇作為提取溶劑，經(jīng)浸泡后再超聲提取。經(jīng)考察，該制備方法基本能將萸黃連中吳茱萸堿和吳茱萸次堿提取完全。

在試驗(yàn)研究中，流動(dòng)相還考察了乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸、乙腈-0.2%磷酸不同溶劑系統(tǒng)。結(jié)果表明，乙腈-0.2%磷酸為流動(dòng)相分離度好。

檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定在吳茱萸堿和吳茱萸次堿均具較大吸收的225 nm處。經(jīng)DAD檢測(cè)，樣品中吳茱萸堿和吳茱萸次堿與對(duì)應(yīng)的對(duì)照品UV光譜一致。

［1］雷載權(quán).中藥學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：316.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：282.

［3］中華人民共和國(guó)藥政管理局.全國(guó)中藥炮制規(guī)范［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1988：96.

［4］陳嘉謨.本草蒙筌［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1988：81.

［5］賈曉斌，蔣俊，陳斌，等.萸黃連炮制研究進(jìn)展及炮制機(jī)制研究思路與方法［J］.中國(guó)中藥雜志，2009，34（10）：1 314-1 317.

［6］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：303.

［7］廖慶文，樊冬麗，肖小河，等.不同黃連炮制品HPLC指紋圖譜研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2007，32（3）：210-214.

［8］陳衛(wèi)紅，蔣孟良，周卓，等.正交設(shè)計(jì)優(yōu)選微波法炮制萸黃連的最佳工藝［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2010，17（3）：57-58.

［9］陳衛(wèi)紅，周平蘭，閻敏.高效液相色譜法測(cè)定萸黃連中吳茱萸堿的含量［J］.湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004，10（4）：72-73.

［10］蔣俊，賈曉斌，陳彥，等.HPLC-DAD法測(cè)定炮制輔料吳茱萸汁中綠原酸、吳茱萸內(nèi)酯、吳茱萸堿和吳茱萸次堿［J］.中草藥，2010，41（3）：396-398.

Simultaneous Determination of Two Ingredients in Decoction Pieces of Yuhuanglian by HPLC

Objective To establish an HPLC method for simultaneous determination of two ingredients in decoction pieces of Yuhuanglian.Methods The Agilent Zobax SB C18column（250 mm×4.6 mm，5μm）was used with the mobile phase of acetonitrile-0.2%phosphoric acid（35∶65）with the flow rate of 2.0 mL/min and the column temperature was 30℃.The detection wavelength was set at 225 nm.Results The linear ranges of Evodiamine and Rutaecarpinefell within the ranges of 0.040 24-0.201 2μg and 0.020 04-0.100 2μg，respectively（r=0.999 8，0.999 9）The average recoveries were 97.79%and 97.43%（n=6）with RSD were 2.28%and 2.09%，respectively.Conclusion The method is convenient，quick，accurate and suitable for the qulity control of the decoction pieces of Yuhuanglian.

Yuhuanglian；evodiamine；rutaecarpine；HPLC；determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0126-02

申麗莎，女，藥師，主要從事中藥生產(chǎn)與質(zhì)量檢測(cè)，（電子信箱）shenlisa@163.com；鄧開(kāi)英，女，主任藥師，主要從事藥品質(zhì)量控制研究，本文通訊作者，（電子信箱）dengkaiying6811@ sina.com。

2015-07-23；

2015-08-15）

*重慶市科委自然科學(xué)基金計(jì)劃資助項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：cstc2012jjA10154。