反相高效液相色譜法測定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中主藥含量

逯小萌

（河南省濮陽市食品藥品檢驗所，河南濮陽457000）

反相高效液相色譜法測定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中主藥含量

逯小萌

（河南省濮陽市食品藥品檢驗所，河南濮陽457000）

目的建立測定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中鹽酸倍他司汀含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）法。方法色譜柱為Thermo-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為0.01mol/L醋酸鈉緩沖液（含0.004mol/L庚烷磺酸鈉，0.2%三乙胺，用冰醋酸調節pH= 4.0）-甲醇（70∶30），流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為261 nm。結果鹽酸倍他司汀進樣量在0.102 3～1.023 0μg范圍內與峰面積呈良好線性關系（r=0.999 9），平均回收率為99.61%，RSD=0.21%（n=9）。結論該方法準確度、靈敏度及重復性均較好，可用于鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中鹽酸倍他司汀的含量測定。

鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液；鹽酸倍他司汀；反相高效液相色譜法；含量測定

鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液的主要成分為鹽酸倍他司汀，輔料為氯化鈉與注射用水，主要用于內耳眩暈癥，亦可用于動脈硬化、缺血性腦血管疾病及高血壓所致體位性眩暈、耳鳴［1］。其國家藥品標準［2］中含量測定項使用紫外分光光度法。紫外分析法相對液相色譜法不準確，專屬性不強。為此，本試驗中建立了反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中鹽酸倍他司汀的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫Agilent1260型高效液相色譜儀；G1314B型安捷倫Agilent 1260可變波長檢測器（安捷倫公司）；H4033A色譜工作站；Precisa92SM-202A型電子天平。鹽酸倍他司汀對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100265-201203，供含量測定用）；鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液（河南天方華中藥業有限公司，批號分別為F14042403，F14042404，F1404243，每瓶含鹽酸倍他司汀0.02 g、氯化鈉4.5 g）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Thermo-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：0.01mol/L醋酸鈉緩沖液（含0.004mol/L庚烷磺酸鈉，0.2%三乙胺，用冰醋酸調節pH=4.0）-甲醇（70∶30）；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：261 nm；進樣量：20μL。理論板數大于2 000，鹽酸倍他司汀峰與相鄰雜質峰的分離度大于1.5。在此色譜條件下，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密量取本品20mL，置25mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，即得每1mL中含32μg的供試品溶液。精密稱取鹽酸倍他司汀對照品17.05 mg，置50 mL容量瓶，用流動相稀釋至刻度，再取5mL，置50mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，即得對照品溶液。按供試品溶液制備方法制備不含鹽酸倍他司汀的陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性考察：分別精密稱取2份鹽酸倍他司汀對照品10mg，置150mL容量瓶中，進行破壞性試驗。加入0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，室溫放置30min，進行酸破壞；加入0.1mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，室溫放置30min，進行堿破壞。按擬訂色譜條件進樣20μL測定。結果倍他司汀在酸性或堿性條件下均穩定。

線性關系考察：精密吸取對照品溶液3，5，10，15，20，25，30μL注入高效液相色譜儀，以對照品進樣量（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=30.852X-1.537 3，r= 0.999 9（n=7）。結果表明，鹽酸倍他司汀進樣量在0.102 3～1.023 0μg范圍內與峰面積線性關系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液20μL，重復進樣6次。結果峰面積平均值為616.83，RSD=0.20%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h時進樣測定。結果峰面積的平均值為617.09，RSD= 0.41%（n=8），表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

重復性試驗：取同一批樣品，按擬訂方法平行制備6份供試品溶液，分別進樣測定。結果的RSD=0.23%（n=6），表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密量取已知含量的同一批樣品6份各2mL，分別加入0.8，1.0，1.2mL質量濃度為0.081 g/L的對照品溶液，用流動相定容至5mL，配成高（120%）、中（100%）、低（80%）3個量級的待測溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表1。

表1 鹽酸倍他司汀加樣回收試驗結果（n=9）

2.4 樣品含量測定

分別精密量取3批樣品，依法制備供試品溶液并進樣測定，用外標法計算含量。結果批號為F14042403，F14042404，F1404243的鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中鹽酸倍他司汀的含量分別為99.71%，100.07%，100.02%，其RSD分別為0.16%，0.21%，0.19%（n=2）。

3 討論

本品的現行藥品標準采用紫外分光光度法，按原標準檢驗過程中試驗數據有時不穩定，對試驗結果造成影響，放置時間的延長及室溫等客觀原因造成溶劑的揮發也是影響試驗數據的因素［3-6］。本試驗中采用RP-HPLC法，選定最大吸收波長261 nm和流動相pH調節至4.0等色譜條件對樣品進行測定。結果表明，樣品主成分峰與相鄰溶劑及雜質峰達到基線分離，且陰性對照品溶液峰對其無干擾，分離效果滿意。此外，方法學考察的內容均達到了相應的標準要求，說明該方法準確、專屬性強，受客觀因素的影響較小，可用于鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液中鹽酸倍他司汀的含量測定。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：768-769.

［2］國家藥典委員會.國家藥品標準化學藥品地方標準上升國家標準第七冊［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2002：227.

［3］唐坤.反相高效液相色譜法測定倍他司汀的含量［J］.藥物分析雜志，2006，26（4）：502-504.

［4］郭宇鵬，王克柳，夏方亮.HPLC法測定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液的含量［J］.齊魯藥學，2005，24（8）：469-470.

［5］宋毓.反相高效液相色譜法測定倍他司汀片的含量［J］.黑龍江科技信息，2014（7）：14.

［6］代廣會，張錦，周定利，等.HPLC法測定鹽酸倍他司汀氯化鈉注射液主藥及其有關物質的含量［J］.中國藥房，2008，19（4）：296-297.

Content Determination of Betahistine Hydrochloride in Betahistine Hydrochloride Sodium Chloride Injection by RP-HPLC

Lu Xiaomeng
（Puyang Municipal Institute for Food and Drug Control，Puyang，Henan，China 457000）

Objective To establish an RP-HPLC method for the Content Determination of betahistine hydrochloride in Betahistine Hydrochloride Sodium Chloride Injection.Methods The chromatographic column was Thermo-C18column（250 mm×4.6 mm，5μm）；the mobile phase was 0.01 mol/L sodium acetate buffer（containing 0.004 mol/L heptane sulfonic acid sodium salt，0.2%triethylamine，regulated to pH 4.0 glacial acetic acid）-methanol（70∶30）；the flow rate was 1.0 mL/min；the column temperature was 30℃；the detection wavelength was 261 nm.Results Betahistine hydrochloride showed good linear relationship with the peak area in the range of 0.102 3-1.023 00μg（r=0.999 9），the average recovery was 99.61%，RSD=0.21%（n=9）.Conclusion This method is accurate，sensitive and repeatable，and can be used as the content determination of betahistine hydrochloride in Betahistine Hydrochloride Sodium Chloride Injection.

Betahistine Hydrochloride Sodium Chloride Injection；betahistine hydrochloride；RP-HPLC；content determination

R927.2；R987

A

1006-4931（2015）22-0121-02

2015-02-05；

2015-05-20）