高效液相色譜法測定小兒胃寶咀嚼片中熊果酸含量

杜小英，姜錦花，宋愿智，馬東衛

（1.陜西方舟制藥有限公司，陜西西安710075；2.陜西省食品藥品檢驗所，陜西西安710065）

高效液相色譜法測定小兒胃寶咀嚼片中熊果酸含量

杜小英1，姜錦花1，宋愿智2，馬東衛1

（1.陜西方舟制藥有限公司，陜西西安710075；2.陜西省食品藥品檢驗所，陜西西安710065）

目的建立測定小兒胃寶咀嚼片中熊果酸含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為KromasilODSC18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-甲醇-水-醋酸銨（70∶16∶14∶0.5），流速為1.0mL/min，柱溫為室溫，檢測波長為210 nm。結果熊果酸質量濃度在0.123 6～0.824 0 g/L（r=0.999 5）范圍內與峰面積線性關系良好；平均回收率為97.45%，RSD為1.30%（n=5）。結論該法簡便易行，靈敏度高，重復性好，可作為小兒胃寶咀嚼片的質量控制方法。

高效液相色譜法；小兒胃寶咀嚼片；熊果酸

小兒胃寶片由山楂、山藥、麥芽、六神曲、雞蛋殼5味藥材經提取精制而成，具有消食化積、健脾養胃、增進食欲、肥兒壯體的功效，用于傷食傷乳、嘔吐泄瀉、脾虛胃弱、消化不良等癥的治療［1］。原質量標準僅有1項顯微鑒別，無含量測定項。小兒胃寶咀嚼片為小兒胃寶片的改劑型品種，為有效控制其質量，根據國家食品藥品監督管理總局（CFDA）《藥品注冊管理辦法》及相關技術指導原則［2-3］，本研究中對其質量標準進行了研究，參照文獻［4-6］對其含量測定方法進行了研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 600E型高效液相色譜儀；Waters 600泵；Waters 2487型紫外檢測器；Millog型色譜工作站；奧豪斯電子天平等。熊果酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110742-200516，供含量測定用）；小兒胃寶咀嚼片（陜西方舟制藥有限公司）；乙腈、甲醇為色譜純，水為二次蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Kromasil ODSC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；柱溫：室溫；流動相：乙腈-甲醇-水-醋酸銨（70∶16∶14∶0.5）；流速：1.0mL/min；檢測波長：210 nm；進樣量：10μL。理論板數按熊果酸計算應大于2 000，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

取熊果酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得對照品溶液。取本品20片，精密稱定，研細混勻后，精密稱取5 g，置索氏提取器中，加乙醚提取8 h，提取液回收乙醚至干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5mL容量瓶中，加甲醇稀至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取不含山楂的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：取熊果酸對照品貯備液（0.824 0 g/L），分別稀釋成質量濃度為0.123 6，0.206，0.412 0，0.618 0，0.824 g/L的溶液，取上述溶液各10μL進樣，記錄峰面積，以質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y= 213 799X+29 047，r=0.999 5（n=5）。結果表明熊果酸質量濃度在0.123 6～0.824 0 g/L范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液10μL，連續進樣6次，依法測定，記錄峰面積。結果的RSD為0.99%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批樣品，依法制備供試品溶液并進樣測定含量。結果的RSD為1.38%（n=5），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：精密吸取同一供試品溶液，分別于0，1，2，3，5，8 h時依法測定峰面積。結果的RSD為0.61%（n=6），表明供試品溶液在8 h內基本穩定。

加樣回收試驗：取已知含量的同批樣品5份，分別精密加入熊果酸對照品，再依法制備供試品溶液，進樣測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 熊果酸加樣回收試驗結果（n=5）

2.4 樣品含量測定

取樣品，依法制備供試品溶液，進樣測定。結果10批樣品中熊果酸含量均值為每片0.189mg。

3 討論

小兒胃寶咀嚼片是由山楂、山藥、麥芽等5味中藥材組成的復方制劑。山楂為君藥，主要含有機酸和黃酮類成分，而起消食化積作用的主要是其有機酸類成分。原質量標準僅有性狀、顯微鑒別和片劑的通用檢查項目，無含量測定項，難以控制其質量。本試驗中參考文獻［4-6］，采用高效液相色譜（HPLC）法對其熊果酸含量進行測定。

熊果酸的最大吸收波長為203.4 nm［7-10］，為減少干擾，選擇210nm為檢測波長。采用KromosilODSC18色譜柱，以乙腈-甲醇-水-醋酸銨溶液為流動相，210 nm為檢測波長，熊果酸與其他成分得到良好分離。檢測結果表明，該方法重復性、精密度、穩定性、回收率等均符合要求，可用于小兒胃寶咀嚼片的質量控制。

［1］WS3-B2283-97.衛生部藥品標準·中藥成方制劑（第12冊）［S］.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：130.

［3］國家食品藥品監督管理局.藥物研究技術指導原則［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2005：196.

［4］黃豪萬，常明泉，李玲，等.顛胃酸口服液中熊果酸的含量測定［J］.實用藥物與臨床，2014，17（4）：469-471.

［5］鄭單萍.高效液相色譜法測定夏枯草中熊果酸的含量［J］.海峽藥學，2012，24（9）：72-74.

［6］李培，潘廣洲.高效液相色譜法測定消食健胃片中熊果酸含量［J］.中國藥業，2014，23（11）：36-38.

［7］孫桂梅，鐘秀華，馬杰.高效液相色譜法測定六味地黃膠囊中熊果酸含量［J］.中國藥業，2014，23（13）：21-22.

［8］朱斌，朱興述，付澤華.高效液相色譜法測定馬鞭草中熊果酸含量［J］.中國藥業，2013，22（11）：44-45.

［9］危華玲，蒙大平，郭炎榮.高效液相色譜法測定苦丁茶含片中熊果酸含量［J］.中國藥業，2008，17（3）：14-15.

［10］黃和軍，許惠琴，崔小兵.HPLC-ELSD法測定山茱萸萜中齊墩果酸與熊果酸的含量［J］.中國藥房，2012，23（39）：3 699-3 700.

Content Determination of the Ursolic Acid in Xiaoerweibao Chewable Tablets by HPLC

Du Xiaoying1，Jiang Jinhua1，Song Yuanzhi2，Ma Dongwei1
（1.Shaanxi Fangzhou Pharmaceutical Limited Company，Xi′an，Shaanxi，China 710075；2.Shaanxi Institute for Food and Drug Control，Xi′an，
Shaanxi，China 710065）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of the ursolic acid in Xiaoerweibao Chewable Tablets.Methods The column chromatography was performed on a C18Kromosil ODS column（250 mm×4.6 mm，5μm）.The mobile phase was acetonitrile-methanol-water-acetic acid ammonium（70∶16∶14∶0.5）；the flow rate was 1.0 mL/min；the column temperature was room temperature；the detection wavelength was 210 nm.Results The content had good linear relationship with the peak area in the range of 0.123 6～0.824 0 g/L（r=0.999 5）；the average recovery rate was 97.45%，and RSD was 1.30%（n=5）. Conclusion The method is simple，sensitive and reproducible，and can be used as the quality control for the Xiaoerweibao Chewable Tablets.

HPLC；Xiaoerweibao Chewable Tablets；ursolic acid

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0118-02

2014-09-30；

2015-06-02）