茶多酚對大鼠骨折早期愈合及TNF-α表達影響的實驗研究

嚴 斌

（深圳市坪山新區人民醫院外科，廣東 深圳 518118）

茶多酚對大鼠骨折早期愈合及TNF-α表達影響的實驗研究

嚴 斌

（深圳市坪山新區人民醫院外科，廣東 深圳 518118）

目的 探討茶多酚對大鼠骨折早期愈合及TNF-α 表達的影響，為茶多酚促進骨折愈合提供理論參考。方法 選取90只大鼠進行茶多酚造模，隨機分為兩組，模型組45例只給予造模，藥物組45例在造模后給予茶多酚干預，另外選取45只大鼠僅給予生理鹽水干預作為正常組，比較三組的骨折愈合情況及TNF-α的表達情況。結果 模型組與藥物組在整個實驗過程中，TNF-α結果均顯著高于正常組，有統計學差異（P＜0.05）。TNF-α檢測結果顯示，藥物組合模型組在第14天和第21天差異具有顯著性，尤其是第21天，差異具有非常顯著性（P＜0.05）。模型組與藥物組中組織中TNF-α的表達明顯高于正常組，有統計學意義（P＜0.05）。藥物組的TNF-α表達陽性率顯著低于模型組，有統計學意義（P＜0.05）。第3天，藥物組與模型組的骨痂厚度及成熟度無明顯差別，第7天開始，藥物組的骨痂厚度大于模型組，并且出現了新生血管，術后14 d出現骨折端出現肉芽組織，纖維性骨痂開始形成，顯著優于模型組。結論 茶多酚對大鼠骨折早期愈合具有積極的促進作用。

茶多酚；大鼠；骨折；早期愈合；TNF-α

骨折是骨科最常見的病種，臨床多采用手術的方式治療，術后如何通過藥物治療達到促進愈合的目的是廣大骨科工作者關注的重點。茶多酚是現在醫學研究的熱點，其臨床作用廣泛［1］，本研究采用動物實驗方法，研究了茶多酚對大鼠骨折愈合的影響作用，建立了茶多酚生物效應下的骨折愈合模型，應用HE染色法檢測了骨痂厚度與成熟度和免疫組化染色法檢測骨痂中腫瘤壞死因子（TNF-α）表達水平三個指標，來探討茶多酚對骨折愈合的早期影響。通過本項目研究，目的在于揭示茶多酚攝入機體對骨折早期愈合影響的規律，為茶多酚在骨科臨床推廣應用中提供理論依據。

1　資料與方法

1.1研究流程：①建立茶多酚生物效應作用下的骨折愈合模型；②采集標本，取材后標本固定，脫鈣，石蠟切片。③采用HE染色觀察大鼠早期骨折中的骨痂厚度及骨痂成熟度。④采用免疫檢測TNF-α的含量。⑤統計軟件對實驗數據進行統計分析。⑥分析茶多酚攝入機體對骨折早期愈合影響規律。

1.2.2方法：選取90只大鼠進行茶多酚造模，隨機分為兩組，模型組45例只給予骨折造模，給予等量生理鹽水皮下注射，藥物組45例在造模后給予茶多酚干預，另外選取45只大鼠給予生理鹽水干預作為正常組（不進行骨折造模），比較三組的骨折愈合情況及TNF-α的表達情況。

1.3技術路線

1.3.1第一階段：選擇實驗動物及分組。①SD大鼠要求：SPF級；雄性；7周齡、體質量（260±20）g。②適應性喂養1個月。③隨機分組。

1.3.2第二階段：建立茶多酚生物效應作用下的骨折愈合模型。①制造骨折前茶多酚生物效應（茶多酚皮下注射）3周，劑量為10 mg/（kg·d）。②造成骨折，繼續產生茶多酚生物效應，10 mg/（kg·d），建立不同時間點（7、14、21 d）的骨折愈合模型。

1.3.3第三階段：標本采集及標本處理。①不同時間點的標本采集及標本固定、脫鈣、包埋切片處理。②標本Elisa法檢測TNF-α的含量。③HE染色觀察骨痂厚度及成熟度情況、免疫組化切片觀察TNF-α表達強度。

1.3.4第四階段：資料匯總、綜合分析實驗數據。

2　結　果

2.1大鼠血清檢測TNF-α結果：結果顯示，模型組與藥物組在整個實驗過程中，TNF-α結果均顯著高于正常組，有統計學差異（P＜0.05）。TNF-α檢測結果顯示，藥物組合模型組在第14天和第21天差異具有顯著性，尤其是第21天，差異具有非常顯著性（P＜0.05）。具體結果見表1。

表1　大鼠血清TNF-α含量水平檢測結果［ng/mL，（）］

表1　大鼠血清TNF-α含量水平檢測結果［ng/mL，（）］

注：*與模型組相比，P＜0.05；#與正常組相比，P＜0.05

組別　第7天　第14天　第21天模型組（n=45）　10.2±2.35#　14.5±4.08#　14.2±3.56#藥物組（n=45）　9.06±2.68#　12.2±3.04#*　10.7±3.65#*正常組（n=45）　5.73±1.24　6.32±1.18　5.39±1.35

2.2大鼠切片的TNF-α表達結果：模型組與藥物組中組織中TNF-α的表達明顯高于正常組，有統計學意義（P＜0.05）。藥物組的TNF-α表達陽性率顯著低于模型組，有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2　大鼠組織中的TNF-α表達統計表

2.3骨痂厚度及成熟度：正常組不進行骨折造模，故不觀察此項目。第3天，藥物組與模型組的骨痂厚度及成熟度無明顯差別，第7天開始，藥物組的骨痂厚度大于模型組，并且出現了新生血管，術后14 d出現骨折端出現肉芽組織，纖維性骨痂開始形成，顯著優于模型組。

3　討　論

研究表明茶有眾多保健功效，因此作為一種健康飲品被中國乃至世界的人們所接受［2］。在臨床工作中很多骨折患者也有喝茶的嗜好，但喝茶骨折愈合究竟有何影響，由此而引發我們的興趣。經查閱資料發現，茶的主要成分是茶多酚，而目前國內很少研究探討茶多酚對于骨折愈合的影響，我們因此進入此領域想進一步探討茶多酚攝入機體對骨折愈合產生影響［3］。因此我們前期工作進行了大量的文獻調研。

本研究擬采用動物實驗方法，建立茶多酚生物效應下的骨折愈合動物模型，通過觀察骨痂厚度、成熟度和骨痂中TNF-α的角度研究茶多酚對大鼠骨折愈合影響，不僅有助于揭示茶多酚攝入機體對骨折早期愈合影響規律，并有助于人們對飲茶對骨折患者健康影響更深刻理解［4］，從而為尋找提供對骨折愈合影響途徑的物質有效的方法提供新的思路。

國內茶多酚對骨折愈合影響的研究現狀：目前只有少數相關的基礎性研究報道，研究內容主要集中在茶多酚對成骨分化作用影響及炎性因子影響研究［5］。認為茶多酚對促進成骨細胞分化作用及對炎性因子有抑制作用［6］。通過本研究，我們要解決的關鍵問題，控制大鼠的健康狀況同一水平及年齡對實驗產生的偏倚：把大鼠的健康狀況放為同一水平，控制健康狀況差異對骨折愈合的影響。SD大鼠的篩選為SPF級；雄性；7周齡、體質量（260±20）g，減小大齡大鼠骨折后愈合差的干擾。顯微鏡下觀察骨痂厚度測量及成熟度、TNF-α檢測的準確性，需要減少主觀誤差。造模時減少各種影響骨折愈合的外部干擾：包括骨折造模時局部軟組織的保護、避免術后感染等。骨折造模骨缺損時的控制力度及偏差，人為產生骨折的誤差需要控制［7］。通過本研究我們的目的是指導患者骨折后飲茶的功效，并且為下一步研究打好基礎，尋找有效提取茶多酚方法及合理利用［8］。本實驗研究分析茶多酚對骨折早期愈合的影響，為患者促進早期康復提供指導意見，并且為進一步研究骨折愈合因素提供依據。綜上所述，多酚具有十分復雜的生物效應，能夠通過多種途徑對細胞和組織產生作用，研究表明茶多酚促進成骨細胞的增殖分化、抑制炎性因子包括TNF-α的活性［9-10］。另一方面有的研究表明茶多酚可通過能保護內皮細胞，分泌血管內皮生長因子從而促進血管新生改善血運［11］。本研究結果再次證明了茶多酚對大鼠骨折早期愈合具有積極的促進作用。

［1］車曉明，陳亮，顧勇，等.茶多酚治療骨質疏松癥的研究進展［J］.中國骨質疏松雜志，2015，21（2）:235-237.

［2］劉慶斌，劉曉波，王樹君，等.低氟青磚茶預防飲茶型氟中毒效果觀察［J］.中國地方病學雜志，2012，31（5）:41-43.

［3］陳可，謝麗華，賴玉鏈，等.喝茶與漢族絕經后婦女骨密度關系的臨床研究［J］.中國骨質疏松雜志，2011，17（7）:609-612.

［4］謝麗華，陳可，李生強，等.茶多酚EGCG對人骨髓基質干細胞成骨分化基因表達的影響［J］.中醫藥導報，2012，18（6）:3-5.

［5］李程程，于光前.飲茶型氟中毒和磚茶中抗氧化物質拮抗作用研究進展［J］.中國地方病學雜志，2012，31（3）:188-385.

［6］尚琦松，黃擘，盛文輝.炎性因子TNF-α及IL-18與椎間盤退變的相關性研究［J］.中國矯形外科雜志，2009，17（5）:385-387.

［7］劉慶斌，劉曉波，于冰，等.不同不同含氟量低氟磚茶預防飲茶型氟中毒效果評價［J］.中國地方病防治雜志，2012，4（7）:551-553.

［8］戴冠東，劉國輝，劉東云.尼古丁對大鼠骨折愈合過程中骨痂含量變化及成熟度的影響［J］.中國醫師雜志，2013，3（3）:300-302.

［9］陳萍，何多龍，魏生英，等.青海省8-12歲兒童飲茶型氟中毒現況調查［J］.中華地方病學雜志，2014，8（1）:53-55.

［10］李強，趙建民，張元智，等.腰椎退變黃韌帶中炎性細胞因子的表達［J］.中國脊柱脊髓雜志，2011，21（1）:63-66

［11］劉連，徐園園，許諾，等.氟對大鼠肝自由基、氧化應激和超微結構影響［J］.中國公共衛生，2009，25（9）:1114-1116.

Experimental Study on Early Healing and TNF-alpha Expression and Effects of Tea Polyphenols on Rat Fracture

YAN Bin
（Department of Surgery， Shenzhen Pingshan New District People's Hospital， Shenzhen 518118， China）

Objective To investigate the effect of early healing and TNF-α expression of tea polyphenols on rat fracture， tea polyphenols and provide a theoretical reference for promoting fracture healing. Methods A total of 90 rats were made model of tea polyphenols， were randomly divided into two groups，the model group 45 patients were treated only by modeling， 45 cases gave her tea polyphenols intervention in the model group， the other 45 rats were selected as normal saline intervention group， the expression of three groups of fracture healing and TNF-alpha. Results In the model group and drug group during the whole experiment， the results of TNF-alpha were significantly higher than those in normal group， there was statistically significant difference （P＜0.05）. TNF-α test results showed that the model group， drug combination had significant differences in 14 days and 21 days， especially the 21 days， the difference was significant （P＜0.05）. Expression of TNF-α in model group and drug group organization in significantly higher than the normal group， with statistical significance （P＜0.05）. The positive expression rate of TNF-alpha in drug group was lower than the model group， there was statistical significance （P＜0.05）. The third day， the callus thickness drug group and model group and maturity had no significant difference， the start of the seventh day， the callus thickness of drug group was higher than that of the model group， and the emergence of new blood vessels， 14 days postoperative fracture appearance of granulation tissue and fibrous callus formation， significantly better than the model group. Conclusion Tea Polyphenols on rat fracture healing has a positive role in promoting.

Tea polyphenols； Rat； Fracture； Healing； TNF-α

R-33

B

1671-8194（2015）17-0005-02