熒光素-Fenton體系熒光法測定中草藥抗氧化活性

趙二勞*, 王迎進, 賈 楠， 趙三虎, 范建鳳

(忻州師范學院化學系，山西忻州 034000)

自由基理論認為，生物機體疾病的發生發展與衰老是一個復雜的生物過程，它與自由基導致的機體細胞氧化損傷密切相關[1]。·OH是目前已知的機體內活性氧中對生物體毒性最強、危害最大的一種自由基[2]。它可以通過電子轉移等反應，使機體內蛋白質、氨基酸、糖類、脂類和核酸等氧化損傷，引起機體組織細胞壞死或突變，導致機體衰老或發生腫瘤等諸多疾病[3 - 4]。因此，尋求自由基清除劑成為生命科學領域研究的熱點之一[5]，而中草藥的天然、豐富及低毒更受人們的青睞。

本文利用Fenton體系產生·OH，它能迅速氧化熒光素使其熒光猝滅，加入抗氧化劑使與熒光素作用的·OH量減少，導致體系熒光猝滅程度降低，據此建立了熒光法篩選抗氧化劑的新體系。應用該方法測定了金銀花、黃芪、甘草、葛根、菊花、黃柏、蒲公英、夏枯草和山楂9種中草藥提取物的抗氧化活性，方法簡便、可靠和實用。

1 實驗部分

1.1 主要儀器、試劑與材料

RF-5301 PC熒光分光光度計(日本，島津公司)；KQ-400KDE型高功率數控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；FE20實驗室pH計(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)。

熒光素溶液：3.25 × 10-2mmol/L；FeSO4溶液：2.64 mmol/L；H2O2：0.024%；抗壞血酸溶液：1.94 mmol/L；硫脲溶液：4.10 mmol/L；NH3-NH4CI緩沖溶液：pH=10.5。實驗試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

所用中草藥均購于當地藥店。

1.2 實驗方法

1.2.1激發波長與發射波長的確定在10 mL比色管中，依次加入0.3 mL NH3-NH4CI緩沖溶液(pH=10.5)，0.5 mL 濃度為3.25×10-2mmol/L熒光素溶液，2.0 mL濃度為 2.64 mmol/L FeSO4溶液，2.0 mL濃度為0.024%H2O2，二次蒸餾水定容至刻度，搖勻。……