柱前衍生液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定珍珠粉中氨基酸

郭 華， 朱智甲*,2， 周曉雅， 吳 文

(1.東華大學(xué)化學(xué)化工與生物工程學(xué)院，上海 201620；2.東華大學(xué)生態(tài)紡織品教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201620)

氨基酸結(jié)構(gòu)簡單且類似，但大多數(shù)氨基酸分子沒有熒光和生色基團(tuán)，難以直接區(qū)分和檢測，因此柱前或柱后衍生化是提高和改善氨基酸檢測靈敏度的有效途徑。常用的衍生化試劑有：鄰苯二甲醛(OPA)、9-芴基甲氧基羰酰氯、異硫氰酸苯酯和丹酰氯等。其中，OPA與氨基酸衍生化反應(yīng)步驟簡單、反應(yīng)迅速(<30 s)、衍生物可用多種檢測器檢測,因而被廣泛應(yīng)用[1,2]。

目前,報道的氨基酸分析方法主要有：毛細(xì)管電泳法[3，4]、離子交換色譜法[5，6]、柱前衍生-氣相色譜法[7，8]、氣-質(zhì)聯(lián)用法[9]和液相色譜法[10，11]。這些方法靈敏度和重現(xiàn)性不夠理想，而且基體干擾大，而液-質(zhì)聯(lián)用法報道較少[12]。本文以O(shè)PA為柱前衍生化試劑、利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)檢測，建立了分析氨基酸的新方法，并用于珍珠粉中氨基酸檢測，有效克服了樣品基體的影響。該方法樣品前處理簡單、選擇性好、靈敏度高、分析速度快、具有較好的應(yīng)用價值。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

Varian 310三重四極桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國，瓦里安公司)，配有Varian Prostar210高效液相色譜儀、Varian 410自動進(jìn)樣器、Varian workstation數(shù)據(jù)處理軟件與電噴霧離子源(ESI)。

氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品：精氨酸(Arg)、酪氨酸(Tyr)、蛋氨酸(Met)、纈氨酸(Val)、苯丙氨酸(Phe)、天冬氨酸(Asp)和亮氨酸(Leu)均為Sigma產(chǎn)品。氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100 μg/mL)：準(zhǔn)確稱取一定量氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品，用pH=10.5緩沖溶液配成25 mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。各級氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液由儲備液用緩沖溶液逐級稀釋即可。衍生試劑的配制：準(zhǔn)確稱取0.0200 g OPA于10 mL容量瓶中,用1 mL甲醇溶解,加入20 μL巰基丙酸，用甲醇定容，震蕩均勻后，儲藏于4 ℃冰箱中待用。……