婦科陰道分泌物不同涂片檢驗方法比較分析

潘秀芳，黎 濱，卓 芬

（海南省農墾三亞醫院 干細胞實驗室，海南 三亞572000）

臨床上一般采用生理鹽水法對陰道分泌物進行涂片檢驗，但這種方法檢出率低，因此，有學者主張用檢出率較高且同樣具有便捷、簡單的革蘭染色法代替生理鹽水法進行涂片染色。本文針對革蘭染色法和生理鹽水法用于陰道分泌物涂片檢驗的效果進行了觀察和分析。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2012年6月至2013年12月我院婦科門診患者的陰道分泌物1000例作為研究資料，患者的年齡為19－61歲，平均年齡為（35.2±13.6）歲。

1.2 檢測方法

將采集的陰道分泌物標本分為兩份后直接涂在玻片上，其中，一份滴入2滴濃度為0.9%生理鹽水，與分泌物混合均勻后在高倍鏡下檢查，另外一份待干后進行革蘭染色，染液主要成份為結晶紫、碘液、脫色液、沙黃。在顯微鏡下先用低倍鏡觀察是否存在滴蟲，然后用油鏡觀察滴蟲的鞭毛及胞體特征，同時對分泌物中的霉菌、腎型相對雙球菌、纖毛菌、加德納球桿菌等致病菌進行檢查。鏡檢由兩位專業臨床檢驗醫師分別進行，結果不一致時，請另一位高年資檢驗醫師最終確定結果。

1.3 數據處理方法

本組所有數據均應用SPSS 18.0統計軟件包建立數據庫并進行統計學分析，兩種方法對病原微生物檢出率的比較應用卡方檢驗進行處理，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種涂片檢驗方法對各類病原微生物檢出率的比較

應用革蘭染色法進行涂片檢驗，共有392例標本檢出病原微生物，總檢出率為39.2%，其中混合感染標本為294例，檢出率為29.4%；應用生理鹽水法進行涂片檢驗，共有138例標本檢出病原微生物，總檢出率為13.8%，共中混合感染標本為106例，檢出率為10.6%。應用革蘭染色法進行涂片檢驗的總檢出率、混合感染檢出率及各類主要病原體的檢出率均高于應用生理鹽水法，兩者之間的差異有統計學意義（χ2＝14.904－294.894，P＜0.05），見表1。

表1 兩種涂片檢驗方法對各類病原微生物檢出率的比較（n，%）

2.2 兩種涂片檢驗方法對不同清潔度陰道分泌物中病原微生物檢出率的比較

在清潔度為Ⅰ－Ⅱ度的陰道分泌物中，應用革蘭染色法和生理鹽水法進行涂片檢驗的檢出率分別為21.5%（100/466）和10.7%（50/466），在清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的陰道分泌物中，應用革蘭染色法和生理鹽水法進行涂片檢驗的檢出率分別為54.7%（292/534）和16.5%（88/534），兩種涂片檢驗方法的檢出率的差異均有統計學意義（χ2＝19.864、180.079，P＜0.05），見表2。在應用革蘭染色法進行涂片檢驗檢出病原微生物的陰道分泌物標本中，清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的標本占74.5%（292/392），清潔度為Ⅰ－Ⅱ度的標本占25.5%（100/392），在應用生理鹽水法進行涂片檢驗檢出病原微生物的陰道分泌物標本中，清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的標本占63.8%（88/138），清潔度為Ⅰ－Ⅱ度的標本占36.2%（50/138），兩者構成比的差異有統計學意義（χ2＝5.782，P＜0.05），見表2。

表2 兩種涂片檢驗方法對不同清潔度陰道分泌物中病原微生物檢出率的比較

3 討論

細菌、霉菌、滴蟲等所致陰道炎的陰道分泌物性狀和臨床表現基本相同，因此，在進行病原體診斷時必須要進行陰道分泌物的涂片檢查，這樣可直接反映宮頸及陰道的感染程度及病原微生物的種類，從而達到減少抗生素濫用、正確指導用藥、提高臨床診斷效率的目的［1］。生理鹽水法是臨床上常規的陰道分泌物涂片方法，具有操作簡單的優點，而在實際應用過程中，陰道分泌物標本中經常會出現陰道上皮細胞核及細胞膜卷曲、有形成分重疊掩蓋、涂片背景不潔等現象，這使得生理鹽水法對念珠菌的檢出率偏低，在纖毛菌、淋球菌、加特納球桿菌和其它條件致病菌的檢驗中具有更大的局限性［2］。而且雖然生理鹽水法可觀察到陰道分泌物中是否存在滴蟲和霉菌，但滴蟲一般只在25－42℃的環境下活動，而霉菌則一般依附于上皮細胞之上，因此，送檢溫度、送檢時間、標本成份等因素均可影響生理鹽水法對霉菌和滴蟲的檢出率［3］。革蘭染色法則可在一份標本中同時進行多項目檢查，在一張涂片中可同時作滴蟲、霉菌、白細胞，陰道清潔度等多項檢查，特別是對淋球菌，加德納菌和其他條件致病菌的檢測效率要高于生理鹽水法［4］，而且同樣具有成本低、操作簡易、時間快速的特點。革蘭染色法對于滴蟲的檢查不受環境溫度的限制，而霉菌經革蘭氏染色后的形態也十分清楚，不僅避免了標本污染而且對于有價值的標本還可以進行保存和學術交流，這也克服了生理鹽水法無法保存標本、需要重復取樣的劣勢［5］，因此，在婦科陰道分泌物的涂片檢驗中，革蘭染色法的顯著作用已被廣大臨床工作者所認可和重視。值得指出的是，生理鹽水法同樣具有操作簡便、檢出結果迅速的優點，因而在臨床上還具有一定的應用價值，近年來，檢驗醫師開始嘗試應用多功能染色液快速染色等新型方法來提高檢驗效率，而且也有研究證實了應用這種快速染色方法檢查陰道分泌物的常規檢測準確率高且檢測項目多，有望取代生理鹽水法［6］，但其可靠性仍然有待于進一步的研究予以證實。此外，10%KOH法對于檢驗假絲酵母菌病等陰道真菌感染也有較高的應用價值，一般來說，其檢驗效率要高于革蘭染色和生理鹽水法，但是也有的研究證實，真菌培養法、革蘭染色法、10%KOH法在檢驗陰道真菌感染學方面的差異較小［7］，這一結果也需要大量的臨床研究予以討論和證實。總之，臨床檢驗醫師應根據檢驗需求合理選用檢驗方法，以求達到提高檢驗效率、及時辨明致病病原體的目的。

本研究結果顯示，應用革蘭染色法進行涂片檢驗的總檢出率、混合感染檢出率及各類主要病原微生物的檢出率均顯著高于應用生理鹽水法進行涂片檢驗（χ2＝14.904－294.894，P＜0.05），這說明應用革蘭染色法進行涂片檢驗在陰道分泌物各類病原微生物檢測中的效率顯著高于應用生理鹽水法，值得注意的是兩種方法均檢出了一定數量的混合感染標本，其中雙重感染的標本數量較多，此外還有一部分標本為三重感染、四重感染，這提示了在進行臨床檢查時要對標本中的病原微生物進行認真核，以減少漏報現象，確保檢查結果的準確性對于指導臨床醫生用藥、提高抗感染藥物使用效率具有十分重要的意義；在不同清潔度陰道分泌物中，應用革蘭染色法進行涂片檢驗的檢出率均顯著高于應用生理鹽水法（χ2＝19.864、180.079，P＜0.05），而且在應用革蘭染色法進行涂片檢驗檢出病原微生物的陰道分泌物標本中，清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的標本比例較高（χ2＝5.782，P＜0.05），說明應用革蘭染色法進行涂片檢驗在不同清潔度的陰道分泌物中的檢測效率均較高，特別是在清潔度較差的標本中病原微生物的檢出比例較高。在臨床上，不僅要注重針對清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的不正常陰道分泌物的檢測，而且也要提高對清潔度為Ⅰ度的正常陰道分泌物中病原體的檢出率，避免漏檢的出現，值得提出的是，在本研究的樣本中，有242例清潔度為Ⅲ－Ⅳ度的陰道分泌物標本中未檢出病原微生物，這部分患者可能為非特異性陰道炎，對于此類患者，臨床醫生應給予高度的重視，應考慮從糖尿病、糞瘺、尿瘺等長期刺激方面查找病因，并繼續進行針對支原體、衣原體、人乳頭瘤病毒等特殊病原微生物的檢測，以提高治療的效率，并加強對該類患者的相關婦科衛生教育。

［1］Avijgan M，Mahboubi M，Moheb Nasab M，et al.Synergistic activity between Echinophora platyloba DC ethanolic extract and azole drugs against clinical isolates of Candida albicans from women suffering chronic recurrent vaginitis［J］.J Mycol Med，2014，24（2）：112.

［2］Thoma ME，Gray RH，Kiwanuka N，et al.The short－term variability of bacterial vaginosis diagnosed by Nugent Gram stain criteria among sexually active women in Rakai，Uganda［J］.Sex Transm Dis，2011，38（2）：111.

［3］Menard JP，Mazouni C，Fenollar F，et al.Diagnostic accuracy of quantitative real－time PCR assay versus clinical and Gram stain i－dentification of bacterial vaginosis［J］.Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2010，29（12）：1547.

［4］Esim Buyukbayrak E，Kars B，Karsidag AY，et al.Diagnosis of vulvovaginitis：comparison of clinical and microbiological diagnosis［J］.Arch Gynecol Obstet，2010，282（5）：515.

［5］Sungkar A，Purwosunu Y，Aziz MF，et al.Influence of early selfdiagnosis and treatment of bacterial vaginosis on preterm birth rate［J］.Int J Gynaecol Obstet，2012，117（3）：264.

［6］姜學慧.兩種陰道分泌物常規檢查方法的探討與分析［J］.中國醫學創新，2013，10（3）：91.

［7］溫德勝.對比分析不同檢驗方法對外陰陰道假絲酵母菌病的檢驗效果［J］.中國醫藥指南，2013，11（27）：356.