張 妍,張舵舵,2,楊澤成,王 瑩,冷維春*
(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院,吉林 長(zhǎng)春130033;2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院;3.吉林大學(xué)第二醫(yī)院;4.內(nèi)蒙古包鋼第三職工醫(yī)院)
卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)腫瘤中死亡率最高的腫瘤,由于卵巢組織的解剖與內(nèi)分泌的復(fù)雜性使卵巢癌的早期診斷極為困難因此,尋找卵巢惡性腫瘤早期診斷指標(biāo)已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。間隙連接蛋白43(connexin 43,Cx43)為一種細(xì)胞間隙連接蛋白,多種腫瘤細(xì)胞中都有間隙連接蛋白43表達(dá)的下降與缺失[1]。同源磷酸酶-張力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)為第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因,位于10q23.3,轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為515kb mRNA,PTEN異常表達(dá)與一些腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為密切相關(guān),因此在許多腫瘤中出現(xiàn)其高突變率和功能缺失[2]。本實(shí)驗(yàn)研究采用免疫組化方法檢測(cè)卵巢上皮性腫瘤組織中間隙連接蛋白43與的同源磷酸酶-張力蛋白表達(dá)狀況,探討其與卵巢惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系 為卵巢惡性腫瘤的早期診治及其預(yù)后判斷提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
選取本院116例卵巢腫瘤患者手術(shù)切除的組織標(biāo)本,年齡在36-78歲之間,平均年齡48歲,其中正常組織20例、良性組織20例、交界性腫瘤20例、上皮性腫瘤組織56例(患者病例術(shù)前均未行其它治療,亦未合并其它系統(tǒng)惡性腫瘤)。根據(jù)FIGO標(biāo)準(zhǔn)將卵巢上皮性腫瘤標(biāo)本分類:臨床分期Ⅰ、Ⅱ期26例Ⅲ、Ⅳ期30例;組織病理學(xué)分級(jí)G1 16例G2 12例G3 28例;組織學(xué)類型卵巢漿液性囊腺癌25例與非漿液性囊腺癌31例。術(shù)后所有切片均經(jīng)病理學(xué)專家盲法認(rèn)定。
試劑兔抗人Cx43單抗與鼠抗人PTEN單抗免疫組化染色試劑組盒,購(gòu)自美國(guó)Sigma生物公司。非生物素檢測(cè)(No Biotin Polymer-HRP)試劑盒購(gòu)自cell signaling公司,免疫組化染色嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行。
染色結(jié)果判定參照文獻(xiàn)[6]方法觀察Cx43和PTEN蛋白的分布、陽(yáng)性強(qiáng)度與陽(yáng)性率。
用SPSS14.0for windows統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用χ2檢驗(yàn)作相關(guān)性分析,結(jié)果以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 間隙連接蛋白43在上皮性癌組織(陽(yáng)性率46.4%)與正常組織(陽(yáng)性率85%)比較差異有顯著性(P<0.05),在上皮性癌組織(陽(yáng)性率46.4%)與良性上皮性腫瘤組織(陽(yáng)性率80%)、交界性上皮性腫瘤組織(陽(yáng)性率65%)比較差異均有顯著性 (P<0.05),正常組織與良性腫瘤組比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)(Table.l)。

Table.1 Expression of Cx43in epithelialal ovarian tumor
2.2 同源磷酸酶-張力蛋白在上皮性癌組織(陽(yáng)性率51.8%)與正常組織(陽(yáng)性率90%)比較差異有顯著性(P<0.05),上皮性癌組織(陽(yáng)性率51.8%)與卵巢良性上皮性腫瘤組織(陽(yáng)性率90%)、交界性上皮性腫瘤組織(陽(yáng)性率70%)比較差異均有顯著性(P<0.05),正常組織與良性腫瘤組比較差異無(wú)顯著性(P>0.05)(Table.2)。

Table.2 Expression of PTEN in epithelialal ovarian tumor

圖1 Cx43-卵巢組織陽(yáng)性表達(dá)-10×40

圖2 PTEN-卵巢組織陽(yáng)性表達(dá)-10×40
Cx43在28例病理分級(jí)為G1-G2組中,陽(yáng)性23例(82.1%)與28例病理分級(jí)為G3組中,陽(yáng)性10例(35.7%),兩組比較差異有顯著性(P<0.05);在26例臨床分期Ⅰ、Ⅱ期組中,陽(yáng)性為25例(96.2%)與30例Ⅲ、Ⅳ組中,陽(yáng)性為14例(46.7%),兩組比較差異有顯著性(P<0.05);在卵巢上皮性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤組織類型無(wú)關(guān),卵巢漿液性囊腺癌與非漿液性卵巢囊腺癌比較,兩組差異無(wú)顯著性(P>0.05)。(Table.3)
PTEN蛋白在28例病理分級(jí)為Gl-G2組中,陽(yáng)性為22例(78.6%)與28例病理分級(jí)G3組中,陽(yáng)性為11例(39.3),兩組比較差異有顯著性(P<0.05);在26例臨床分期Ⅰ、Ⅱ期組(陽(yáng)性率為100%)和30例臨床分期Ⅲ、Ⅳ組(陽(yáng)性率43.3%),兩組比較差異有顯著性(P<0.05);在卵巢上皮性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤組織類型無(wú)關(guān),卵巢漿液性囊腺癌與非漿液性卵巢囊腺癌比較,兩組差異無(wú)顯著性(P>0.05)。(Table.4)

Table.3 Correlation of expression of Cx43to clinicopathologic factors in ovarian cancer

Table.4 Correlation of expression of PTEN to clinicopathologic factors in ovarian cancer
縫隙連接(gap junction,GJ)是細(xì)胞間的一種重要連接方式,通過(guò)縫隙連接(connexin)相互接觸形成的一個(gè)僅2-3nm的細(xì)胞間隙[3]。細(xì)胞通過(guò)縫隙連接進(jìn)行信息、能量和電信號(hào)的傳遞調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)。間隙連接蛋白43是人體中一種重要的縫隙連接蛋白,在卵巢顆粒細(xì)胞、心肌組織、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等多種組織都有表達(dá),參與機(jī)體的許多病理生理過(guò)程,其分布異常與多種疾病有密切關(guān)系,研究表明,在多種腫瘤細(xì)胞如乳腺癌、肝癌、宮頸癌組織中均有不同程度的間隙連接蛋白43表達(dá)下降或缺失,其表達(dá)水平與腫瘤的組織分化程度及預(yù)后密切相關(guān)[4,5]。本研究結(jié)果顯示間隙連接蛋白43在上皮性卵巢癌中的表達(dá)明顯低于正常組織﹑良性腫瘤(P<0.05),這與胡葉青等[6]的研究結(jié)果基本一致。間隙連接蛋白43在上皮性卵巢癌表達(dá)隨著卵巢上皮性腫瘤細(xì)胞分化程度的下降,其表達(dá)明顯降低,惡性程度越高,Cx43表達(dá)陽(yáng)性率下降越顯著,且與臨床分期有關(guān)在臨床分期為Ⅰ-Ⅱ期的表達(dá)陽(yáng)性率高于Ⅲ-Ⅳ期(P<0.05)即晚期卵巢上皮性癌,Cx43表達(dá)陽(yáng)性率下降更顯著。由此可以推論間隙連接蛋白43表達(dá)下降與機(jī)體對(duì)細(xì)胞的監(jiān)督、調(diào)控能力減弱相關(guān),Cx43失活與卵巢上皮性癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。
同源磷酸酶-張力蛋白為第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因,位于10q23.3,由9個(gè)外顯子和8個(gè)內(nèi)含子組成,轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為515kb mRNA[7]。其氨基酸序列符合蛋白酪氨酸磷酸酶催化區(qū)的核心序列,主要參與細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié),并在腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)、腫瘤轉(zhuǎn)移中具有重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)同源磷酸酶-張力蛋白可以阻斷了PKB/Akt信號(hào)通路發(fā)揮抑癌作用[8]。本研究結(jié)果表明,同源磷酸酶-張力蛋白在上皮性卵巢癌中的表達(dá)明顯低于正常組織﹑良性腫瘤,且與組織學(xué)分級(jí)和臨床分期有關(guān)(P<0.05),惡性程度越高,PTEN表達(dá)越低。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與國(guó)內(nèi)外大多數(shù)學(xué)者的研究結(jié)果一致。提示PTEN異常表達(dá)所產(chǎn)生的作用可能是構(gòu)成卵巢癌組織分化程度的分子基礎(chǔ)。說(shuō)明PTEN的缺失可能是卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制之一。
[1]Solan JL,Lampe PD.Connexin43phosphorylation:structural changes and biological effects[J].Biochem J,2009,419(2):261.
[2]Song MS,Carracedo A,Salmena L,et al.Nuclear PTEN regulates the APC-CDH1tumor-suppressive complex in a phosphatase-independent manner[J].Cell,2011,144:187.
[3]Simon KW,Roberts PC,Vespremi MJ.Regulation of beta-catenin and connexin-43expression:targets for sphingolipids in colon cancer prevention[J].Mol Nutr Food Res,2009,53(3):332.
[4]Murray SA,Davis K,F(xiàn)ishman LM,et al.Alpha connexin43 gapjunction are decreased in human adrenocortical tumors[J].J Clin EndocrinolMetab,2000,85(2):890.
[5]McLachlan E,Shao Q,Laird DW.Connexins and gap junctions inmammary gland development and breast cancer progression[J].Membr Biol,2007,218(1-3):107.
[6]胡葉青,劉元嬌.Cx43、Skp2在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)及臨床意義[J].癌癥,2005,24(1):104.
[7]Roy S,Yu Y,Padhye S.SB,et al.Difluorinated-Curcu-mim(CDF)Restores PTEN Expression in Colon Cancer Cells by Down-Regulating miR-21[J].PLos ONE,2013,8(7):e68 543.
[8]Perry JM,He XC,Sugimura R,et al.Cooperation between both wnt/b-catenin and PTEN/PI3K/Akt signa-ling promotes p-renewal and expansion[J].Genes DeV,2011,25:1928.