Cx43、PTEN在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)及臨床意義

張 妍，張舵舵，2，楊澤成，王 瑩，冷維春＊

（1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春130033；2.吉林大學(xué)第一醫(yī)院；3.吉林大學(xué)第二醫(yī)院；4.內(nèi)蒙古包鋼第三職工醫(yī)院）

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)腫瘤中死亡率最高的腫瘤，由于卵巢組織的解剖與內(nèi)分泌的復(fù)雜性使卵巢癌的早期診斷極為困難因此，尋找卵巢惡性腫瘤早期診斷指標(biāo)已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。間隙連接蛋白43（connexin 43，Cx43）為一種細(xì)胞間隙連接蛋白，多種腫瘤細(xì)胞中都有間隙連接蛋白43表達(dá)的下降與缺失［1］。同源磷酸酶－張力蛋白（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）為第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因，位于10q23.3，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為515kb mRNA，PTEN異常表達(dá)與一些腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為密切相關(guān)，因此在許多腫瘤中出現(xiàn)其高突變率和功能缺失［2］。本實(shí)驗(yàn)研究采用免疫組化方法檢測(cè)卵巢上皮性腫瘤組織中間隙連接蛋白43與的同源磷酸酶－張力蛋白表達(dá)狀況，探討其與卵巢惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系 為卵巢惡性腫瘤的早期診治及其預(yù)后判斷提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本

選取本院116例卵巢腫瘤患者手術(shù)切除的組織標(biāo)本，年齡在36－78歲之間，平均年齡48歲，其中正常組織20例、良性組織20例、交界性腫瘤20例、上皮性腫瘤組織56例（患者病例術(shù)前均未行其它治療，亦未合并其它系統(tǒng)惡性腫瘤）。根據(jù)FIGO標(biāo)準(zhǔn)將卵巢上皮性腫瘤標(biāo)本分類：臨床分期Ⅰ、Ⅱ期26例Ⅲ、Ⅳ期30例；組織病理學(xué)分級(jí)G1 16例G2 12例G3 28例；組織學(xué)類型卵巢漿液性囊腺癌25例與非漿液性囊腺癌31例。術(shù)后所有切片均經(jīng)病理學(xué)專家盲法認(rèn)定。

1.2 免疫組織化學(xué)法

試劑兔抗人Cx43單抗與鼠抗人PTEN單抗免疫組化染色試劑組盒，購(gòu)自美國(guó)Sigma生物公司。非生物素檢測(cè)（No Biotin Polymer－HRP）試劑盒購(gòu)自cell signaling公司，免疫組化染色嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定及分析

染色結(jié)果判定參照文獻(xiàn)［6］方法觀察Cx43和PTEN蛋白的分布、陽(yáng)性強(qiáng)度與陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS14.0for windows統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用χ2檢驗(yàn)作相關(guān)性分析，結(jié)果以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 間隙連接蛋白43在上皮性癌組織（陽(yáng)性率46.4%）與正常組織（陽(yáng)性率85%）比較差異有顯著性（P＜0.05），在上皮性癌組織（陽(yáng)性率46.4%）與良性上皮性腫瘤組織（陽(yáng)性率80%）、交界性上皮性腫瘤組織（陽(yáng)性率65%）比較差異均有顯著性 （P＜0.05），正常組織與良性腫瘤組比較差異無(wú)顯著性（P＞0.05）（Table.l）。

Table.1 Expression of Cx43in epithelialal ovarian tumor

2.2 同源磷酸酶－張力蛋白在上皮性癌組織（陽(yáng)性率51.8%）與正常組織（陽(yáng)性率90%）比較差異有顯著性（P＜0.05），上皮性癌組織（陽(yáng)性率51.8%）與卵巢良性上皮性腫瘤組織（陽(yáng)性率90%）、交界性上皮性腫瘤組織（陽(yáng)性率70%）比較差異均有顯著性（P＜0.05），正常組織與良性腫瘤組比較差異無(wú)顯著性（P＞0.05）（Table.2）。

Table.2 Expression of PTEN in epithelialal ovarian tumor

圖1 Cx43－卵巢組織陽(yáng)性表達(dá)－10×40

圖2 PTEN－卵巢組織陽(yáng)性表達(dá)－10×40

2.3 Cx43蛋白的表達(dá)與臨床參數(shù)間的關(guān)系

Cx43在28例病理分級(jí)為G1－G2組中，陽(yáng)性23例（82.1%）與28例病理分級(jí)為G3組中，陽(yáng)性10例（35.7%），兩組比較差異有顯著性（P＜0.05）；在26例臨床分期Ⅰ、Ⅱ期組中，陽(yáng)性為25例（96.2%）與30例Ⅲ、Ⅳ組中，陽(yáng)性為14例（46.7%），兩組比較差異有顯著性（P＜0.05）；在卵巢上皮性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤組織類型無(wú)關(guān)，卵巢漿液性囊腺癌與非漿液性卵巢囊腺癌比較，兩組差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。（Table.3）

2.4 PTEN蛋白的表達(dá)與臨床參數(shù)間的關(guān)系

PTEN蛋白在28例病理分級(jí)為Gl－G2組中，陽(yáng)性為22例（78.6%）與28例病理分級(jí)G3組中，陽(yáng)性為11例（39.3），兩組比較差異有顯著性（P＜0.05）；在26例臨床分期Ⅰ、Ⅱ期組（陽(yáng)性率為100%）和30例臨床分期Ⅲ、Ⅳ組（陽(yáng)性率43.3%），兩組比較差異有顯著性（P＜0.05）；在卵巢上皮性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤組織類型無(wú)關(guān)，卵巢漿液性囊腺癌與非漿液性卵巢囊腺癌比較，兩組差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。（Table.4）

Table.3 Correlation of expression of Cx43to clinicopathologic factors in ovarian cancer

Table.4 Correlation of expression of PTEN to clinicopathologic factors in ovarian cancer

3 討論

3.1 Cx43在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)及意義

縫隙連接（gap junction，GJ）是細(xì)胞間的一種重要連接方式，通過(guò)縫隙連接（connexin）相互接觸形成的一個(gè)僅2－3nm的細(xì)胞間隙［3］。細(xì)胞通過(guò)縫隙連接進(jìn)行信息、能量和電信號(hào)的傳遞調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)。間隙連接蛋白43是人體中一種重要的縫隙連接蛋白，在卵巢顆粒細(xì)胞、心肌組織、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等多種組織都有表達(dá)，參與機(jī)體的許多病理生理過(guò)程，其分布異常與多種疾病有密切關(guān)系，研究表明，在多種腫瘤細(xì)胞如乳腺癌、肝癌、宮頸癌組織中均有不同程度的間隙連接蛋白43表達(dá)下降或缺失，其表達(dá)水平與腫瘤的組織分化程度及預(yù)后密切相關(guān)［4，5］。本研究結(jié)果顯示間隙連接蛋白43在上皮性卵巢癌中的表達(dá)明顯低于正常組織﹑良性腫瘤（P＜0.05），這與胡葉青等［6］的研究結(jié)果基本一致。間隙連接蛋白43在上皮性卵巢癌表達(dá)隨著卵巢上皮性腫瘤細(xì)胞分化程度的下降，其表達(dá)明顯降低，惡性程度越高，Cx43表達(dá)陽(yáng)性率下降越顯著，且與臨床分期有關(guān)在臨床分期為Ⅰ－Ⅱ期的表達(dá)陽(yáng)性率高于Ⅲ－Ⅳ期（P＜0.05）即晚期卵巢上皮性癌，Cx43表達(dá)陽(yáng)性率下降更顯著。由此可以推論間隙連接蛋白43表達(dá)下降與機(jī)體對(duì)細(xì)胞的監(jiān)督、調(diào)控能力減弱相關(guān)，Cx43失活與卵巢上皮性癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。

3.2 PTEN在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)及意義

同源磷酸酶－張力蛋白為第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因，位于10q23.3，由9個(gè)外顯子和8個(gè)內(nèi)含子組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為515kb mRNA［7］。其氨基酸序列符合蛋白酪氨酸磷酸酶催化區(qū)的核心序列，主要參與細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)，并在腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)、腫瘤轉(zhuǎn)移中具有重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)同源磷酸酶－張力蛋白可以阻斷了PKB/Akt信號(hào)通路發(fā)揮抑癌作用［8］。本研究結(jié)果表明，同源磷酸酶－張力蛋白在上皮性卵巢癌中的表達(dá)明顯低于正常組織﹑良性腫瘤，且與組織學(xué)分級(jí)和臨床分期有關(guān)（P＜0.05），惡性程度越高，PTEN表達(dá)越低。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與國(guó)內(nèi)外大多數(shù)學(xué)者的研究結(jié)果一致。提示PTEN異常表達(dá)所產(chǎn)生的作用可能是構(gòu)成卵巢癌組織分化程度的分子基礎(chǔ)。說(shuō)明PTEN的缺失可能是卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制之一。

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