自體骨髓間充質干細胞移植對腦出血患者神經功能及血漿Hcy的影響

王萬宏，王亞林，盧慶韜

（1.唐山市豐南區醫院 神經外科；2.唐山鐵路中心醫院 外科，河北 唐山063300）

腦出血是臨床神經科常見危急重癥，而且發病率、致死率、致殘率都非常高，腦出血發作時，輕者會存留后遺癥，病情嚴重會使患者喪命［1］。腦出血通常在冬春季節，患者活動或情緒激動時易發生，大部分患者在發病時都有劇烈頭痛和嘔吐癥狀，出現上述癥狀時，應及早采取預防措施，防止出現神經功能嚴重損害等并發癥［2，3］。隨著醫療水平進步，腦出血的死亡率逐漸下降趨勢，但發病后的后遺癥嚴重影響患者的生活，探尋防治腦出血后遺癥仍是當前研究的熱點。為了更好地探究自體骨髓間充質干細胞（MSCs）移植對腦出血患者神經功能及血漿Hcy的影響［4，5］，本研究選取我院近兩年腦出血患者90例，將資料收集后加以分析，現將結果總結如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年9月－2013年9月我院收治的腦出血患者90例為研究對象，分為對照組和實驗組，每組45例。對照組：男30例，女15例；年齡38歲－68歲，平均年齡為（57.1±5.9）歲，出血量10.6－69.5ml，平均（37.1±15.9）ml。實驗組：男29例，女16例，年齡39歲－69歲，平均（56.1±6.7）歲，出血量9.6－70.5ml，平均（39.1±14.9）。兩組患者在性別、年齡、出血量等方面差異均無統計學意義，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 常規干預

根據對照組患者情況選取保守或手術干預，首先用甘露醇等脫水藥物降低顱內壓，然后給予降壓藥控制血壓平穩，促進腦細胞代謝和預防感染，防止出現神經功能損傷障礙并發癥；對于符合手術指征患者，立即做好術前準備，行微創鉆孔引流手術。

1.3 MSCs移植

1.3.1 骨髓采集 在百層級手術室，局部麻醉下行骨髓穿刺術，以30號骨髓穿刺針于髂后上棘進行穿刺，20ml干燥無菌注射器抽取120－180ml骨髓，轉移至細胞培養液中，立即轉移至細胞培養室。術中密切觀察患者狀況，必要時停止手術。術后送患者入重癥監護室［6］。

1.3.2 MSCs的分離與培養 采集抗凝骨髓120－180ml；采血袋壁及輸液管消毒后，將試劑A、B加至骨髓液靜置；吸取上層液至離心管，離心10min棄上清，將適量C液加入離心管，制成細胞懸液后離心；將細胞層移至另一離心管，加入適量A液，離心5min后棄上清，離心5min；吸取少量細胞懸液于計數板，顯微鏡下計數。將密度為1.0×107/ml細胞接種于培養瓶，置細胞培養箱培養4d，棄懸浮死細胞，加細胞培養液；每3d換液1次，細胞生長融合滿意后加消化液，置培養箱消化1min后取出，觀察細胞，加入中和胰蛋白酶以防過度消化。完全培養液反復吹打，離心棄上清，調整細胞數為5×105/ml，移至培養瓶中，5－7d后傳代，制成單細胞懸液。

1.3.3 MSCs的移植 患者躺于平板床上，同骨髓穿刺體位。選擇3－4腰椎棘突間隙，消毒、鋪巾，以2%利多卡因局部浸潤麻醉至椎間韌帶，穿刺針以垂直背部方向刺入約5 cm，針尖抵抗感消失后緩慢拔出針芯，見腦脊液流出為穿刺成功，將MSCs細胞懸液5ml緩慢注入蛛網膜下腔，插回針芯后拔穿刺針，覆蓋、固定后去枕平臥6h。

1.4 觀察指標

采用神經功能缺損程度（NIHSS）和日常生活能力評分（Barthel）分別評價患者的生活能力和神經功能。血漿Hcy檢測：采血前禁食12h，次日早晨采靜脈血，采用美國貝克曼公司CX4型全自動分析儀檢測各組患者血漿Hcy水平。

1.5 統計學處理

采用SPSS17.0軟件進行統計分析，數據均為計量資料，以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者Barthel和NIHSS評分比較

實驗組患者Barthel值（53.70±9.10）明顯高于對照組（39.78±9.20）；NIHSS值明顯低于對照組；差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者Barthel和NIHSS評分比較（±s，n＝45）

表1 兩組患者Barthel和NIHSS評分比較（±s，n＝45）

注：與對照組比較 ，＊P0.05

Barthel NIHSS組別 n 干預前 干預后實驗組 45 28.84±8.25 53.70±9.10＊ 23.84±5.25 17.70±1.10干預前 干預后＊對照組 45 29.85±8.24 39.78±9.20 23.85±5.24 22.78±1.02

2.2 自體MSCs移植對腦出血患者血漿Hcy的影響

對照組患者血漿Hcy干預后1－7d稍有降低，但差異無統計學意義（P＞0.05）；實驗組患者干預后4、7d血漿 Hcy明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 自體MSCs移植對腦出血患者血漿Hcy的影響（n＝45，μmol/L）

3 討論

近幾年來，隨著人們生活水平的提高，高血壓病患者越來越多，其最嚴重的并發癥就是腦出血。腦出血又被稱為腦溢血，非外傷性腦實質內的自發性出血，主要由于血壓升高，小動脈硬化血管破裂引起［7］。腦出血后形成的血腫易壓迫周圍腦組織，腦組織缺血缺氧，患者出現呼吸困難等癥狀，嚴重威脅患者的生命。腦出血后大多數患者都有不同程度的神經功能損傷，如失語、身體失去平衡、大小便障礙等［8］。

根據近年的臨床研究，MSCs移植通過降低腦出血患者血清S100β、GFAP水平，促進腦出血患者神經細胞損傷的修復［9］。大多數的腦出血患者都存在腦組織和神經功能損傷，對于出血患者修復腦組織是促進患者恢復正常生活最重要的一步。通過MSCs移植，能夠提高患者動脈血氧分壓，血氧的彌散范圍加大，促使缺血區損傷細胞功能逐漸恢復；腦血管收縮，腦內血流量減少，改善了腦水腫和腦缺氧癥狀，顱內壓降低，患者頭痛嘔吐癥狀緩解；骨髓間充質一些非造血干細胞，也能有效促進神經功能恢復。通過自體移植，避免出現免疫排斥反應，而且取材方便，腦組織缺氧狀態改善，損傷神經功能明顯恢復［10］。本研究結果顯示：①實驗組患者的Barthel值明顯高于對照組，神經功能缺損程度（NIHSS）（17.70±4.10）明顯低于對照組。②對照組患者血漿Hcy干預后1－7d稍有降低，但差異無統計學意義；實驗組患者干預后4、7d血漿Hcy明顯低于對照組。提示MSCs移植能改善神經功能，可能與其降低腦出血患者血漿Hcy水平有關，機制可能為：MSCs通過降低血漿Hcy水平，減少氧自由基生成，發揮對小血管內皮細胞的保護作用；削弱了低密度脂蛋白的氧化，減少泡沫細胞的產生，從而發揮一定的神經保護作用。

綜上所述，對于腦出血患者，采用MSCs移植，患者的神經功能逐漸恢復，自理生活能力明顯提高，但其與血漿Hcy的關系仍需進一步深入研究。

［1］祝春燕，周 濤.辛伐他汀對腦出血患者神經功能恢復的作用［J］.腦與神經疾病雜志，，2014，22（1）：54.

［2］越麗霞，鄺又新，李作凌.自體骨髓間充質干細胞移植治療顱腦創傷后神經功能障礙的護理［J］.中國實用神經疾病雜志，2014，17（20）：125.

［3］胡澤斌，王立生，崔春萍，等.干細胞臨床應用安全性評估報告［J］.中國醫藥生物技術，2013，8（5）：349.

［4］肖以磊，朱建新，李忠民，等.兩種不同途徑移植自體骨髓間充質干細胞治療早期脊髓損傷療效觀察［J］.中國醫師進修雜志，2012，35（14）：24.

［5］陳鳳榮，賀永雄.自體骨髓間充質干細胞移植治療頸脊髓損傷患者的圍手術期護理［J］.中國現代護理雜志，2013，19（31）：3896.

［6］詹三華，張魯峰，姚衛民，等.自體骨髓間充質干細胞移植治療腦梗死后遺癥30例［J］.中國老年學雜志，2012，32（21）：4821.

［7］李計成，李曉明，戴如飛，等.自體骨髓間充質干細胞移植治療腦出血的療效觀察［J］.中國實用神經疾病雜志，2012，15（20）：8.

［8］Fukunaga A，Uchida K，Hare K，et al.Whether autologous bone marrow mesenchymal stem cell transplantation is safe，feasible，and effective to the treatment of intracerebral hemorrhage：A 32－case analysis［J］.Joumal of Clinical Rehabilitative Tissue Engmeedng Research，2010，14（6）：1097.

［9］王萬宏，王亞林，盧慶韜.自體骨髓間充質干細胞移植對腦出血患者血清S100β、GFAP的影響［J］.中國實驗診斷學雜志，2014，18（12）：2011.