口服補液鹽泡騰片中5—羥甲基糠醛含量檢測

時菲菲 汪燕 張鐸 張亮

摘 要： 本研究采用高效液相色譜法，測定口服補液鹽泡騰片中有關物質5-羥甲基糠醛含量，以乙腈-水（1：20，V/V）為流動相，使用Luna C18柱為色譜柱，檢測波長為284 nm，采用本法檢測5-羥甲基糠醛精密度、穩定性良好，平均回收率為98.396%（n=3）、RSD為0.77%，最低檢測限為1.5ng/mL。5-羥甲基糠醛含量測定方法操作簡便、結果準確可靠，可用于口服補液鹽泡騰片的質量控制。

關鍵詞： 高效液相色譜法 5-羥甲基糠醛 口服補液鹽泡騰片

5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural，5-HMF）又稱5-羥甲基-2-糠醛，為葡萄糖等單糖的降解產物[1]，廣泛存在于含有糖類物質的食品和藥品中。有文獻[2]-[4]報道，5-HMF可能引起血栓性靜脈炎、致突變、促進皮膚癌等不良反應。在口服補液鹽泡騰片的處方中含有大量葡萄糖，制備中經過烘干過程，葡萄糖易分解產生5-羥甲基糠醛。《中國藥典》2015年版二部[5]規定1%葡萄糖溶液中5-HMF的檢查是在284nm處測定溶液的吸光度，其值應<0.32，當其吸光度為0.32時，5-HMF濃度約為2.5ug/mL。本文建立了5-HMF的HPLC檢測方法并對口服補液鹽泡騰片中5-HMF含量進行了檢測。

1.儀器與試藥

1.1儀器

LC-10ATvp（VP）高效液相色譜儀（日本島津）；色譜柱（Luna C18）；JB/T 5374-1991電子天平[梅特勒—托利多儀器（上海）有限公司]。

1.2試藥

口服補液鹽泡騰片（自制）；5-羥甲基糠醛對照品（中國藥品生物制品檢定所，標準品）；乙腈（色譜純）。

2.實驗方法

2.1色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Luna C18（4.6mm×150mm，5μm）柱；流動相：乙腈-水（1：20，V/V）；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：284nm；進樣量：20uL。在此色譜條件下，取5-羥甲基糠醛對照品溶液、供試品溶液及陰性對照液各20uL注入色譜儀，記錄色譜圖，由圖1可見陰性對照無干擾。

圖1 系統適用性試驗色譜圖

A.對照品；B.供試品；C.陰性對照品

Fig 1 HPLC chromatogram of 5-HMF

A reference；B sample；C blank

2.2標準曲線的制備

標準溶液的制備：取5-羥甲基糠醛對照品12mg，置于1000mL容量瓶中，加流動相溶解并定容，搖勻。取標準溶液0.2mL、0.35mL、0.7mL、1.2mL、3.0mL，分別置100mL容量瓶中，加流動相定容并搖勻，5-羥甲基糠醛濃度分別為0.026ug/mL、0.042ug/mL、0.084ug/mL、0.144ug/mL、0.36ug/mL。準確量取上述五種濃度5-羥甲基糠醛溶液20ul注入液相色譜儀。以峰面積與濃度進行線性擬合，得線性方程Y=126720X-178.26，r=0.9995線性范圍：0.026～0.36ug/mL。

2.3精密度試驗

配制濃度為0.042ug/mL、0.12ug/mL、0.16ug/mL的三種5-羥甲基糠醛標準品溶液，每種濃度溶液分別連續進樣3次，每次準確量取20ul注入高效液相色譜儀，計算RSD分別為1.08%、0.17%、0.89%。

2.4穩定性試驗

取線性測定中濃度為0.1856ug/mL樣品，分別于0，1，2，4，6h進樣，每次準確量取20ul注入高效液相色譜儀，計算RSD為1.68%，說明本品在6h內穩定。

2.5回收率試驗

稱取0.5g口服補液鹽泡騰片樣品三份，分別溶解于三個100mL容量瓶中，再分別加入0.0232mg/mL的5-羥甲基糠醛0.24mL、0.48mL、0.8mL，定容，搖勻。每份溶液分別進樣三次，記錄色譜圖，取三次進樣平均值，以峰面積由回歸方程計算出回收率。結果見表1：

表1 回收率試驗結果

Tab 1 Results of recovery tests

2.6最低檢測限試驗

準確稱取5-羥甲基糠醛對照品1.5mg置于100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為儲備液。取儲備液1.0mL置于100mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。再由以上溶液中量取1.0mL置于100mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，進樣測定。在信噪比為3的情況下，其檢出限為1.5ng/mL。

3.樣品中5-羥甲基糠醛含量測定

取口服補液鹽泡騰片樣品三批各1.85g，分別置于100mL容量瓶中，用純凈水溶解并定容。所配儲備液相當于1%葡萄糖溶液。精密量取20uL注入液相色譜儀，進樣2次并記錄色譜圖，以峰面積由回歸方程計算5-羥甲基糠醛含量。結果如表2：

表2 樣品中5-HMF測定結果

Tab 2 Results of the sample determination（n=2）

4.討論

利用HPLC法可以準確5-HMF含量，峰面積和含量之間存在良好的線性關系，測定結果具有較高準確度，5-HMF回收率達98.396%。本法不僅適用于口服補液鹽泡騰片中5-HMF含量的測定，而且可作為其他情況下5-HMF檢測的依據，具有較強的現實意義。

參考文獻：

[1]吳立軍.天然藥物化學[M].4版.北京：人民衛生出版社，2004：73-74.

[2]Cook AP，Macleod TM.Appleton JD，et al.Reversed-phase high-performance liquid chromatographic method for the quantification of 5-hydroxymethyl furfural as the major degradation product of glucose in infusion fluids [J].J Chromatogr A，1989，467：395-401.

[3]Surh Y，Tannenbaum SR.Activation of the Maillard reaction product 5-Hydroxymethyl furfural to strong mutagens via allylic sulfonation and chlorination [J].Chem Res Toxico，l 1994，7（3）：313-318.

[4]Miyakawa Y，Nishi Y，Kato K，et al.Initiating activity of eight pyrolysates of carbohyates in a two - stage mouse skin tum origenesis model[J].Carcinogenesis，1991，12（7）：1169-1173.

[5]國家藥典委員會中華人民共和國藥典[S].2015年版，二部.附錄22.