不同體質量學齡兒童腸道菌屬分布特征分析

楊 華 (內蒙古包頭市一機醫院，內蒙古包頭014030)

0 引言

腸道菌數是一種Gram陰性桿菌，存在于人和動物的腸道中，機體免疫力下降時，容易發生腸道桿菌感染.腸道菌是人體中一種重要的調控元件，能夠幫助機體進行能量管理、代謝調控及免疫應答.隨著肥胖問題逐漸出現，兒童肥胖問題甚得關注.自1980年以來，全球肥胖發病率不斷上升，其中肥胖/超重的成年人比率增長了28%，兒童增長了47%［1］.導致肥胖的因素多是患者腸道菌屬分布存在問題.據相關研究發現，兒童肥胖與腸道菌群的分布存在著密切的聯系.為了進一步明確腸道菌分布情況與兒童肥胖的關系，本研究對124例不同體質量學齡兒童腸道菌屬分布特征進行研究和分析.

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取本地區2013-12/2014-12分層隨機抽樣出的124例不同體質量的兒童為研究對象，兒童年齡7～13(平均10.3)歲.按照體質量指數BMI分為正常組(n=62)和肥胖組(n=62).分別采集所有患者清晨空腹大便樣本，并在30 min之內置于-20℃的冰箱中冷凍保存.所有兒童均根據WHO［2］的肥胖判定標準，結合我國肥胖工作組標準選擇，排除患有內分泌、遺傳及代謝和中樞神經等疾病的兒童.

1.2 納入標準 肥胖組納入標準:兒童年齡在7～13歲，符合我國肥胖工作組標準判定，排除有多重內分泌及遺傳和神經系統疾病.收集大便樣本前2周內未服用抗生素，排除有應急狀態、腹痛、便秘等多種胃腸道癥狀的兒童.

1.3 測定方法 大便基因組DNA提取方法:所有大便樣本均統一使用電子天平秤取，取200 mg置于離心管中，以13，000 r/min的速度在離心機上做3 min離心，去除渣質，除去沉淀物后置于PBS緩沖液中再次進行離心.去除上清液直到澄清為止，將樣本放置到5 mL的離心管中并置于-20℃的冰箱保存備用.使用 Omega DNA Stool Mini Kit試劑盒［3］，提取大便基因組的DNA，并通過紫外分光光度法來檢驗DNA的純度.

16SrRNA鑒定方法:采用熒光定量聚合酶鏈反應檢測常見菌屬的數量，首先，提取大便DNA中的6種細菌做熒光定量聚合酶鏈反應，每個樣品要做3個平行復孔，并詳細記錄其Ct值.根據埃希菌屬、雙歧桿菌屬、擬桿菌屬及乳酸桿菌屬、梭菌屬、腸球菌屬的16SrRNA 的基因 V3-V6 序列，通過 Premier5.0［4］來設計相應的菌屬PCR引物，并由BLAST基因庫進行引物序列特異性對比，并計算Ct的值，最后經轉換后得出菌屬基因拷貝數.

1.4 統計學處理 采用SPSS20.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以±s表示，行 t檢驗，計數資料行χ2檢驗，P＜0.05表示差異具有統計學意義.

2 結果

2.1 兩組兒童6種腸道菌屬的分布特點 肥胖組兒童乳酸桿菌屬、梭菌屬及腸球菌屬基因拷貝數顯著高于正常組，差異具有統計學意義(P＜0.05);而兩組埃希菌屬、雙歧桿菌及擬桿菌數量相比，差異無統計學意義(P ＞0.05，表1).

表1 兩組兒童6種腸道菌屬的分布特點 (±s)

表1 兩組兒童6種腸道菌屬的分布特點 (±s)

aP ＜0.05 vs正常組.

組別 埃希菌屬 雙歧桿菌屬 擬桿菌屬 乳酸桿菌屬 梭菌屬 腸球菌屬正常組 7.03 ±0.687.11 ±0.456.79 ±0.317.45 ±0.125.58 ±0.716.53 ±0.62肥胖組 7.09 ±0.627.25 ±0.416.81 ±0.327.51 ±0.11a5.86 ±0.71a6.81 ±0.63a

2.2 不同性別間腸道菌屬分布特征 124例兒童中，男童77例，女童47例，雙歧桿菌屬在女童中的數量低于男童，差異具有統計學意義(P＜0.05，表2).

表2 不同性別間腸道菌屬分布特征 (±s)

表2 不同性別間腸道菌屬分布特征 (±s)

aP ＜0.05 vs男童.

組別 n 埃希菌屬 雙歧桿菌屬 擬桿菌屬 乳酸桿菌屬 梭菌屬 腸球菌屬男童 77 6.72 ±0.766.84 ±0.496.61 ±0.457.51 ±0.165 6.58 ±0.437.52 ±0.125.90 ±0.656.43 ±0.63.86 ±0.756.45 ±0.62女童 47 6.70 ±0.756.59 ±0.43a

3 討論

人體腸道內存在復雜的生物群落，細菌數量超過了1000種，其基因組信息被并稱為“腸道元基因組”，腸道菌屬關系著人機體的能量管理、代謝調控及免疫應答.多項研究證明，腸道菌屬不僅是宿主調節吸收營養元素的重要因素，更是影響宿主循環系統內毒素平衡情況以及宿主肥胖的關鍵［5］.目前，有關人腸道菌屬與肥胖體質之間聯系的研究逐漸受到更多人的認可，但因腸道菌屬群體數量龐大，對于其是否會引起肥胖的相關問題，目前研究還不成熟.本研究主要是對學齡兒童腸道內6種常見的重要菌屬分布特征進行分析，對不同體質量的兒童肥胖與腸道菌屬分布特征之間的聯系進行研究［6］.

研究結果顯示，肥胖組兒童的乳酸桿菌屬、梭菌屬及腸球菌屬下相對數量高于正常組兒童，差異具有統計學意義(P＜0.05);兩組間埃希菌屬、雙歧桿菌屬及擬桿菌屬比較，差異無統計學意義(P＞0.05).對兒童的性別、年齡等資料進行分層分析，發現雙歧桿菌屬在女童中的數量低于男童，差異具有統計學意義(P＜0.05);其余常見腸道菌與性別、年齡之間的關系比較，差異無統計學意義(P＞0.05).因此，學齡兒童腸道菌屬分布受兒童性別及年齡的影響較小，而不同體質量肥胖與乳酸桿菌屬、梭菌屬、腸球菌屬的分布特征有著密切的關系.

［1］劉 利，徐佩茹，李 敏，等.新疆伊犁地區不同體質量學齡兒童腸道菌屬分布特征分析［J］.中華實用兒科臨床雜志，2014，29(7):502-505.

［2］葛檣檣.腸道內和腸道外感染氣單胞菌的分布、基因分類和耐藥性分析［D］.浙江:溫州醫科大學，2013.

［3］高志光，高仁元，伍 雯，等.不同結腸部位腸道菌群分布特征與結直腸癌的相關性研究［C］.中華醫學會腸外腸內營養學分會第八屆全國腸外腸內營養學術大會論文集.2014.

［4］曹歆軼，林 萍，蔣 平，等.兒童孤獨癥譜系障礙胃腸道細菌學研究的系統綜述［J］.上海精神醫學，2013，25(6):342-352.

［5］鄭曉皎.腸道菌-宿主代謝物組的分析平臺的建立及應用［D］.上海:上海交通大學，2013.

［6］陳祥娥.Heparosan的提取分離及其對腸道菌作用的研究［D］.山東:山東大學，2012.