端粒酶、人類表皮生長因子受體2和c-myc基因在宮頸病變中的表達及與高危型人乳頭瘤病毒感染的相關性

齊麗敏，王雪，孫波，張學玲，馮曄，公春蘭，王麗君，張清濤

(1.滄州醫(yī)學高等專科學校助產(chǎn)教研室，滄州 061001 2.河北滄州市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科)

·論著·

端粒酶、人類表皮生長因子受體2和c-myc基因在宮頸病變中的表達及與高危型人乳頭瘤病毒感染的相關性

齊麗敏1，王雪1，孫波2，張學玲2，馮曄1，公春蘭1，王麗君1，張清濤1

(1.滄州醫(yī)學高等專科學校助產(chǎn)教研室，滄州 061001 2.河北滄州市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科)

目的 研究端粒酶基因(hTERC)、人類表皮生長因子受體2(HER-2)基因和c-myc基因在不同程度宮頸病變的表達情況及與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染的相關性。方法 選取236例就診或篩查患者，行TCT、HPV、hTERC、HER-2和c-myc基因檢測。對任一陽性患者行陰道鏡下多點活檢，進行病理檢測。結果 ①236例中有108例進行宮頸活檢，在正常/慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ及浸潤性子宮頸癌中hTERC陽性表達率分別為16.0%、39.5%、64.5%、100.0%；HER-2陽性表達率分別為4.0%、20.9%、45.2%、100.0%；c-myc陽性表達率分別為8.0%、30.2%、54.8%、100.0%；HPV陽性率分別為40.0%、67.4%、80.6%、100.0%。②不同病理結果之間hTERC、HER-2和c-myc陽性率比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，隨著病理結果的嚴重程度，hTERC、HER-2和c-myc的陽性率逐漸增加(P<0.01)。③隨著宮頸病變程度的加深，HPV感染者中hTERC、HER-2和c-myc基因的陽性擴增率也增高(P<0.05)。結論 hTERC、HER-2、c-myc基因的陽性表達率與宮頸病變程度、高危型HPV感染密切相關，在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用。

宮頸腫瘤; 人乳頭瘤病毒; 基因,myc; 基因,erbB-2

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤，它的發(fā)生發(fā)展雖然已被證實與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染有關，但是宮頸癌發(fā)病率比HPV在人群中的感染率要低得多，意味著除了HPV感染外還有其他的機制在宮頸癌發(fā)生與進展中發(fā)揮著作用。隨著對分子水平上研究的不斷深入，越來越多的報道發(fā)現(xiàn)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展可能與一些基因異常相關。本研究采用熒光原位雜交(FISH)技術檢測人端粒酶基因(hTERC)、HER-2基因和c-myc基因在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的異常擴增情況及與HPV感染相關性進行初步研究。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取滄州市人民醫(yī)院2013年9月至2014年5月婦科門診就診及機會性篩查患者236例，年齡25～65歲,平均年齡(43.3±6.5)歲。排除已經(jīng)陰道鏡活檢確診的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)者和已治療過的患者。對所有患者行新柏氏液基細胞學(TCT)、HPV、hTERC、HER-2和c-myc基因檢測。對任一陽性患者行陰道鏡下多點活檢，進行病理檢測。其中正常/慢性宮頸炎25例，CINⅠ 43例，CINⅡ 18例，CINⅢ 13例，宮頸癌9例，所有患者均無陰道鏡活檢史和治療。

1.2 方法

1.2.1 TCT檢測 使用專用取樣刷采集宮頸脫落細胞，將可以分離的采集器刷頭置于細胞保存液之中，4 ℃冰箱保存，采用新柏式2000全自動制片機進行程序化處理。按照2001年國際癌癥協(xié)會(NCI)推薦的TBS分級標準進行閱片。

1.2.2 HPV檢測 使用專用宮頸脫落細胞采集器在宮頸外口順時針旋轉(zhuǎn)3～5圈，將刷子置入3 mL宮頸細胞保存液中，放入4 ℃冰箱保存。檢測23種HPV基因型，包括18種高危型16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83和5種低危型6、11、42、43、81。所有操作過程和結果判讀嚴格按照亞能生物技術有限公司提供試劑盒說明進行。

1.2.3 FISH檢測 本實驗使用的探針購自廣州安必平科技有限公司。嚴格按照試劑盒說明進行操作。用OLYMPUS B×51 熒光顯微鏡在DAPI/FITC/TRITC三色濾光鏡激發(fā)下觀察脫落細胞熒光雜交信號，用Video2.0 Test公司提供的FISH分析軟件進行圖像分析。陽性判斷標準: 單個間期細胞核中綠色信號≥2個，紅色信號>2個，則表示hTERC、HER-2基因有擴增，因無對照探針，單個間期細胞核中紅色信號>2個則表示c-myc基因有擴增。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS18.0 軟件處理數(shù)據(jù)，組間率的比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同病理結果中hTERC、HER-2和c-myc表達情況 hTERC、HER-2和c-myc陽性率在不同病理結果之間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。隨著病理結果的嚴重程度，hTERC、HER-2和c-myc的擴增陽性率逐漸增加(P<0.01)，見表1。

表1 不同病理結果中FISH檢測hTERC、HER-2和c-myc的陽性表達[例(%)]

2.2 高危型HPV感染與hTERC、HER-2和c-myc基因擴增的相關性 108例不同病理結果中HPV感染率分別為40.0%、67.4%、80.6%和100.0%，隨著病理分級嚴重程度HPV感染率逐漸增高(P<0.05)，見表2。在73例HPV陽性患者中hTERC、HER-2和c-myc基因異常擴增在HPV感染組與非感染組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，可見，三種基因的擴增主要發(fā)生在HPV感染陽性患者中，見表3。

3 討論

3.1 hTERC、HER-2和c-myc基因在不同宮頸病變中的異常擴增情況 國外的研究發(fā)現(xiàn)，人類hTERC基因的擴增可阻止細胞凋亡，因而可導致腫瘤產(chǎn)生[1-2]。隨著對hTERC基因在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的深入了解，hTERC可作為宮頸癌篩查的重要指標已經(jīng)得到了大量的實驗驗證[3-4]。本研究結果中，hTERC基因在CIN組和宮頸癌組擴增明顯高于慢性宮頸炎組，且CIN各組與宮頸癌組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，提示hTERC基因異常擴增與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有著重要的聯(lián)系，結果與Liu等[5]報道一致。

表2 不同病理結果HPV感染情況及HPV陽性與hTERC、HER-2和c-myc基因擴增情況[例(%)]

表3 HPV感染陽性或陰性時hTERC、HER-2和c-myc基因擴增的情況

在正常情況下，HER-2 基因處于非激活狀態(tài)。當機體受某些因素影響后，其即活化成為具有轉(zhuǎn)化活性的細胞癌基因，過度表達則可導致細胞過度增殖和表型向惡性轉(zhuǎn)化。HER-2的激活、擴增及其表達產(chǎn)物在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著極其重要的作用[6]；HER-2被確認為一種新的腫瘤標記物在宮頸癌的研究中報道不多。從本實驗研究結果來看，HER-2在宮頸癌中的陽性表達比慢性炎癥和CIN中明顯增高(P<0.05)，提示HER-2基因的表達在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用，研究結果與有關研究[7-8]的報道一致。

c-myc是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因，是人類腫瘤中最常見的高表達的癌基因之一，在細胞的增殖、分化、基因的不穩(wěn)定性及細胞的惡性轉(zhuǎn)化中起著重要的調(diào)節(jié)作用[9]。自發(fā)現(xiàn)以來備受人們重視，然而在宮頸癌的研究報道中較少見，且對c-myc用來作為宮頸癌篩查還存在爭議[10]。本研究結果顯示，c-myc基因的陽性表達率隨病理學分級嚴重程度而增高(P<0.05)，提示c-myc可能參與了宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展，與Sokolova[11]報道一致。

3.2 hTERC、HER-2和c-myc基因異常擴增與HPV感染的相關性 端粒酶的激活是高危型HPV感染宮頸組織后CIN向?qū)m頸浸潤癌發(fā)展過程中比較關鍵的步驟之一，HPV E6蛋白上調(diào)內(nèi)源性人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶水平而激活端粒酶是限速步驟。而hTERT是原癌基因c-myc的下游靶基因，c-myc基因可直接結合到多種細胞hTERT基因的核心啟動子5'端的E-box上，使細胞獲得無限增殖能力，故認為高危型HPV感染可能和c-myc起到協(xié)同致癌作用。HER-2高表達是通過HPV E6調(diào)節(jié)的，推測HER-2基因轉(zhuǎn)錄或翻譯后的調(diào)控可能在宮頸癌發(fā)生中起一定的作用。本研究顯示，hTERC、HER-2及c-myc擴增率在HPV陽性者中顯著高于HPV陰性者，hTERC、HER-2及c-myc擴增與HPV感染相關，與以往研究結果一致[12-13]。

綜上所述，hTERC、HER-2及c-myc基因的異常表達可能參與了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程，改變了細胞內(nèi)的基因調(diào)控作用，從而使細胞更易于向惡性表型轉(zhuǎn)化，促進了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。

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The correlation between the hTERC,HER-2 ,c-myc gene expression in cervical lesion and HPV infection

Qi Limin*,Wang Xue,Sun Bo,Zhang Xueling,Feng Ye,Gong Chunlan,Wang Lijun,Zhang Qingtao

(*Staff room of Midwifery,Cangzhou Medical College Cangzhou,061001,China)

Objective To investigate the expression of hTERC, HER-2 and c-myc gene in the different cervical lesions and analyze the correaltion between the hTERC,HER-2 and c-myc gene expression and HPV infection.Methods A total of 236 outpatients were randomly selected from September 2013 to May 2014 at Gynecology in people hospital of Cangzhou city.The detection of TCT,HPV,hTERC,HER-2 and c-myc were conducted,and every patient with positive result was underwent colposcopic examination and histological evaluation.Results ①108 cases according to the cervical biopsy， the positive rate of hTERC were 16.0%,39.5%,64.5% and 100% respectively,the positive rates of HER-2 were 4.0%,20.9%,45.2%,100.0%，respectively,and the positive rates of c-myc gene test were 8.00%,30.2%,54.8%,100.0%，respectively ,and high risk HPV infection rate were 40.0%,67.4%,80.6%,100.0% respectively in the CINⅠ,CINⅡ-Ⅲ and cervical cancer in normal/chronic inflammation.②The positive rate of hTERC,HER-2 and c-myc were statistically differences among the different pathologic results (P<0.05),With the increase of pathological grade，the positive rates of hTERC,HER-2 and c-myc were also increased(P<0.01).③With the deepening of cervical lesions,the positive rate of hTERC,HER-2 and c-myc was also increased in the HPV-infected persons(P<0.05).Conclusion The positive expression rate of hTERC,HER-2 and c-myc gene are closely correlated with severity of cervical lesions and high-risk HPV infection,which may play an important role in the development of cervical cancer.

Uterine cervical neoplasms; Human papillomavirus; Genes,myc ; Genes,erbB-2

滄州市科學技術局計劃項目(141302003)

齊麗敏，主治醫(yī)師，講師，Email:mymyqiqi@163.com

R737.33

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2015.02.017

2014-11-12)