靜脈注射人參皂苷Rb1在小鼠心臟組織分布

郝成欣

摘 要：該文采用靜脈注射給藥途徑，研究人參皂苷Rb1在小鼠心臟組織的分布。用等體積的水飽與正丁醇萃取小鼠心臟組織勻漿液，在經過減壓干燥之后使用甲醇進行溶解，采用高效液相色譜法，測得預處理的心臟樣品中的人參皂苷Rb1在心臟組織分布廣泛，滯留時間長，5 min達吸收高峰。720 min后逐漸自體內消除，對其發揮抗心肌缺血再灌注損傷，減弱血管內膜增生程度等藥效提供參考理論依據。

關鍵詞：靜脈注射 人參皂苷Rb1 心臟組織分布 高效液相色譜

中圖分類號：R7 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）02（c）-0252-02

人參皂苷Rb1是二醇系皂苷，其含量較為豐富，多年來學者們致力于研究其藥理作用，作用顯著且廣泛。此外，人參皂苷Rb1具有抗心肌缺血再灌注損傷，減弱血管內膜增生程度，促智，腦缺血損傷保護，神經損傷保護，抗肝臟熱缺血再灌注損傷，抗腫瘤，性功能促進等多種藥理活性[1-7]。

近年來，對靜脈注射人參皂苷Rb1在小鼠體內藥物代謝動力學研究文獻較少[8]。楊柳等[9]進行人參皂苷Rb1在大鼠尿中排泄的研究采用的是高效液相色譜-飛行時間串聯質譜。而Tsutomu Odani，Hisayuki Tanizawa，and Yoshio Takino（均為日該研究者）通過采用薄層色譜法監測了人參皂苷Rb1經靜脈注射以及口服兩種途徑在大鼠體內的分布，發現其胃腸道吸收率低。

該文將預處理后的小鼠心臟采用HPLC法測定其分布[10]，具有分離效能好，分析速度快，靈敏度及特異性高的優點，對人參皂苷Rb1發揮抗心肌缺血再灌注損傷等藥理作用提供參考依據，具有廣闊的前景。

1 資料與設備

1.1 試劑與藥品

甲醇，乙腈是由TEDIA COMPANY.INC公司生產的色譜純試劑；甲醇（分析純）為重慶沃裕科技有限公司提供；人參皂苷Rb1對照品（純度：98%）由上海經科化學科技有限公司提供。

1.2 儀器

SHZ-D（Ш）循環水式真空泵，Hettich Vniversal 16R低溫冷凍離心機，旋轉蒸發儀，Agilent 1100型分析-半制備液相，FA1204B電子分析天平。

1.3 動物

健康小鼠，體重35～40 g，吉林省白城市省所提供。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

CenturySILBDSC18柱，50 mm×2.1 mmI.D.，5 ?m粒徑；流動相：乙腈：水（28：72）；流速：1.00 mL/min；檢測波長：205 nm；柱溫：室溫。

2.2 給藥方案與樣品采集

選取健康小鼠18只，小鼠體重為35～40g，在做實驗之前并未使用任何藥物。選用普通的飼料進行喂養，同時，飲食和飲水自由。在吉林省白城市白城醫學高等專科學校藥理實驗室進行動物臨床實驗。注射用濃度為6 mg/mL的人參皂苷Rbl溶液，給藥以8 mg/kg的劑量靜脈注射，與給藥前﹙0 min﹚與給藥后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min，每次3只，處死動物，解剖心臟，組織浮血使用0.9%生理鹽水沖去，并用濾紙將吸其干，最后保存在–40 ℃冰箱。

2.3 樣品預處理

心臟組織勻漿和其處理方法如下。

先對心臟組織稱重，然后剪碎、研磨，按1 mL/200 mg組織重量用Gilson移液器加入生理鹽水勻漿。用等體積的水飽和正丁醇取勻漿液，萃取3次（水飽和正丁醇配置方法為正丁醇∶水=5：1混合），萃取液經85 ℃減壓干燥之后使用1 mL甲醇進行溶解，稀釋2～5倍后通過0.22 ?m微孔濾膜后進行HPLC檢測。

3 實驗結果

3.1 色譜條件確定

首先對于人參皂苷Rb1標準品，精密稱取1.00 mg，使用甲醇定容1 μL，此時濃度為100?g，然后經甲醇稀釋，使其濃度變為50?g，取該標準溶液20 mL通過0.22?m微孔濾膜，通過改變HPLC中流動相乙腈：水的比率對標準品適宜的出峰時間進行控制，從而最終確定色譜條件。該研究是采用HPLC的流動相∶乙腈∶水（28∶72）；流速∶1.00 mL/min；檢測波長∶205 nm。這里，人參皂苷Rb1標準品出峰時間是18.59 min，高度為2.1 mAU。（見表1）

3.2 對小鼠空白（0 min）心臟行HPLC檢測

研究發現，心臟組織中的成分分離都是在4.9 min以內，人參皂苷Rb1受到的干擾較小。（見表2）

3.3 將小鼠給藥后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min的心臟組織樣品進行HPLC檢測

每個時間點取小鼠3只，靜脈注射人參皂苷Rb1后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min按2.2的方法對小鼠的心臟組織做處理，各取樣20 ?mL過0.22 ?m微孔濾膜后進行HPLC檢測。將小鼠心臟組織中人參皂苷Rb1檢測曲線繪制成對比圖。最高為5 min心臟組織，此時吸收高度是6.1 mAU，曲線隨時間推移，驟然下降，30 min吸收高度為3.2 mAU。60 min、120 min、240min吸收高度分別為3.1 mAU、2.8 mAU、2.7 mAU。720 min后，曲線明顯下降，吸收高度為1.1 mAU（見圖1）。

3.4 討論

該研究對小鼠靜脈注射人參皂苷Rb1，由實驗得心臟組織樣品檢測曲線圖易知，在靜脈注射后的6個時間點，人參皂苷Rb1都有分離，5 min即達到高峰，之后明顯下降，30 min、60 min、120 min、240 min曲線基本保持水平狀態，720 min后已明顯下降，逐漸從體內消除。其心臟組織藥物濃度特點如下。

5 min心臟組織中Rb1濃度>30 min心臟組織中Rb1濃度>60 min心臟組織中Rb1濃度>120 min心臟組織中Rb1濃度〉240 min心臟組織中Rb1濃度>720 min心臟組織中Rb1濃度。

人參皂苷Rb1標準曲線是根據實驗確定的色譜條件制定的，其出峰時間約18.50 min左右，對小鼠靜脈注射人參皂苷Rb15 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min后處理的心臟組織樣品進行HPLC檢測，其在18 min左右也得到分離，對照標準曲線，表明該藥物在心臟組織中分布廣泛。

根據小鼠心臟組織中人參皂苷Rb1檢測曲線，小鼠靜脈注射后，藥物在心臟組織中分布迅速，濃度高，滯留時間比較長，對人參皂苷Rb1抗心肌缺血再灌注損傷、心肌細胞損傷保護、減弱血管內膜增生程度等藥效學研究提供參考理論依據，具有重要的意義。

參考文獻

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