HPLC測定清潔驗證中殘留物硝酸益康唑的含量

蔡亞蘭 洪麗萍 黃加秀 宗艷艷 朱佳麗 段鵬

HPLC測定清潔驗證中殘留物硝酸益康唑的含量

蔡亞蘭 洪麗萍 黃加秀 宗艷艷 朱佳麗 段鵬

目的 建立清潔驗證中硝酸益康唑含量測定的高效液相色譜法(HPLC)。方法 檢測波長：235 nm；柱溫：30℃；流動相：乙酸銨溶液(2%)-乙腈-甲醇(38：30：32)；擦拭溶劑：乙醇。結果 硝酸益康唑在5.80～232.07 μg/ml范圍內線性關系良好, r=1.0000。平均回收率為99%, RSD為0.3%(n=6)。結論 本方法簡便、快速、準確, 可以用于硝酸益康唑清潔驗證中殘留物硝酸益康唑的定量分析。

高效液相色譜法；清潔驗證；殘留物；硝酸益康唑

硝酸益康唑適用于皮膚念珠菌病的治療, 亦可用于治療體癬、股癬、足癬、花斑癬等, 其制劑硝酸益康唑乳膏是本公司生產的暢銷品種, 由于其皮膚念珠菌病治療中的顯著療效而受到患者的一致好評。本文參考藥典方法［1］和HPLC對主活性成分硝酸益康唑的定量分析進行了研究和驗證, 結果表明HPLC法簡便快速, 準確, 可以用于硝酸益康唑的定量分析。

根據擦拭取樣的殘留量=設備中的總殘留限度/設備總內表面積計算得出硝酸益康唑的殘留量LD值為2.248 μg/cm2,試驗中模擬設備材質的平板面積為100 cm2, 取樣回收率為100%, 換算為理論取樣量為224.8 μg, 于10 ml量瓶中以流動相溶解并稀釋至刻度, 得到濃度約為22.48 μg/ml的溶液, 作者以此濃度開展相關研究和驗證。

1 儀器與試藥

美國Agilent1200高效液相色譜儀, 瑞士Mettler Toledo XS205電子天平, 昆山KQ-500DE超聲波儀等。

硝酸益康唑對照品(批號為：100214-200903)購于中國藥品生物制品檢定所, 試劑均為分析純, 水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱；流速：2.0 ml/min；檢測波長：235 nm；柱溫：30℃；進樣體積：20 μl；流動相：乙酸銨溶液(2%)-乙腈-甲醇(38：30：32)；擦拭溶劑：乙醇。

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取硝酸益康唑對照品適量,加流動相溶解制成每1 ml含224.90 μg的對照品貯備液。

2.3 線性關系試驗 分別精密吸取上述對照品貯備液適量,用流動相稀釋制成濃度分別為：5.62、11.24、22.49 、56.22、112.45、224.90 μg/ml的溶液, 分別以0.45 μm×25 mm內徑過濾器過濾至2 ml HPLC小瓶內, 取上述溶液各20 μl, 分別注入液相色譜儀, 記錄色譜圖, 建立校正曲線, 硝酸益康唑濃度和其峰面積的相關系數r=1.0000。

結果表明, 硝酸益康唑在5.80～232.07 μg/ml范圍內, 硝酸益康唑對照品溶液濃度和其峰面積具有良好的線性關系。

2.4 檢測限(LOD)和定量限(LOQ) 檢測限對應的信噪比為3：1；定量限對應的信噪比為10：1, HPLC法測定硝酸益康唑的LOD為6.96 ng, LOQ為23.21 ng。

2.5 重復性試驗 取濃度為225.8 μg /ml的硝酸益康唑對照品溶液, 以0.45 μm×25 mm內徑過濾器過濾至2 ml HPLC小瓶內, 取此溶液20 μl, 重復5次注入液相色譜儀, 記錄色譜圖,計算5次所得硝酸益康唑峰面積的RSD值為0.8%, 表明該方法重復性良好。

2. 6 穩(wěn)定性試驗 取濃度為225.8 μg /ml的硝酸益康唑對照品溶液, 以0.45 μm×25 mm內徑過濾器過濾至2 ml HPLC小瓶內, 將此溶液置于室溫下放置0、2、4、6、8、12、16、24、32、40、48、56、64、72 h后分別精密量取20 μl注入色譜儀, 記錄色譜圖, 測定14次峰面積的RSD值為0.6%, 表明供試品溶液在72 h內穩(wěn)定。

2. 7 重復性試驗 取批號為13070111的樣品, 按照“2.9”項下方法制備6份供試液, 結果硝酸益康唑含量均值為100.40%, RSD為0.3%。

2. 8 加樣回收率試驗 采用加樣回收法。計算得平均回收率為99.11%, RSD為0.3%, 結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果(n=6)

3 討論

上述試驗的驗證結果表明, HPLC法測定清潔驗證中的殘留物硝酸益康唑的含量可行, 該方法可用于硝酸益康唑的定量分析。

分別選取不同種類的溶劑作為擦拭溶劑, 結果選擇乙醇為擦拭溶劑較適宜, 因為乙醇為揮發(fā)性溶劑, 可以將殘留物硝酸益康唑擦拭完全的同時還有效減少溶劑殘留。

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典(二部). 北京：化學工業(yè)出版社.2010.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.01.177

2014-07-23］

225321 揚子江藥業(yè)集團有限公司質量管理部質量檢測中心

蔡亞蘭