抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對腦缺血再灌注大鼠的抗氧化作用

陳金 吳麗娥

·實驗研究·

抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對腦缺血再灌注大鼠的抗氧化作用

陳金 吳麗娥

目的 探討腫瘤壞死因子-α(TNF-α)單克隆抗體對腦缺血再灌注大鼠的抗氧化作用。方法 76只健康雌性SD大鼠, 隨機分為假手術組(4只)、抗體組(36只)和生理鹽水組(36只), 采用Zea Longa線栓法建立局灶性腦缺血再灌注模型, 測定大鼠血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。結果 TNF-α單克隆抗體在再灌注3、6 h后可降低血清中MDA含量, 提高SOD活性。結論 抗TNF-α單克隆抗體在一定時間內能提高腦缺血再灌注大鼠的抗氧化作用。

抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體；腦缺血再灌注損傷；丙二醛；超氧化物歧化酶

腦缺血再灌注損傷是指腦組織缺血一段時間, 當重新恢復血流后, 組織的損傷程度較缺血時進一步加重、功能進一步惡化的現象。TNF-α是較早釋放的, 具有多種生物效應的重要的炎性細胞因子, 在腦缺血再灌注損傷中具有重要作用并被廣為關注［1］。本研究觀察大鼠腦缺血再灌注損傷后抗氧化功能的變化, 為治療腦缺血再灌注損傷方法探索新思路。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雌性SD大鼠76只, 體重220～250 g；MDA和SOD試劑盒；抗大鼠TNF-α單克隆抗體。將大鼠隨機分三組,假手術組(4只)、抗體組(36只)和生理鹽水組(36只)。

1.2 方法 抗體組和生理鹽水組于再灌注0、3、6、12 h 4個時間點, 每時間點9只, 采用Zea Longa［2］線栓法建立大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型, 10%水合氯醛0.3 ml/100 g腹腔麻醉, 分離頸內、外動脈, 在頸內動脈離分叉處4 mm剪一切口, 栓線插入18 mm左右, 可感阻力, 把露在體外的栓線和外科縫合線剪掉, 縫和, 放入籠內。腦栓塞持續3 h, 緩慢把栓線拔出到頸內、外動脈分叉處, 實現大鼠腦缺血再灌注。凡動物蘇醒后出現霍納綜合征(Horner征)、提尾懸空時栓塞對側前肢屈曲內收或行走時向栓塞對側轉圈的大鼠為栓塞成功, 否則被剔除。假手術組：栓線插入頸內動脈段, 仍保持大腦中動脈血液的暢通。抗體組在4個時間點,按0.1 mg/kg給予頸總靜脈注射TNF-α抗體, 生理鹽水組給予等量生理鹽水。15 min取眼眥或眼眶后靜脈血1.0 ml, 按SOD、MDA檢測說明書進行檢測。

1.3 統計學方法 采用SPSS15.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 血清SOD含量變化 抗體組和生理鹽水組在再灌注后第3、6小時SOD比較, 差異具有統計學意義 (P＜0.05) ；在第0、12小時比較, 差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

2.2 血清MDΑ含量變化 抗體組和生理鹽水組在再灌注后第3、6小時MDA比較, 差異具有統計學意義(P＜0.05)；在第0、12小時比較, 差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表1 抗體組和生理鹽水組各時間點血清SOD含量比較( x-±s, U/ml)

表2 抗體組和生理鹽水組各時間點血清MDΑ含量比較( x-±s, nmol/ml)

3 小結

短暫的腦缺血后再灌注, 常可導致較腦缺血本身更為嚴重的損害, 急性炎性反應在腦缺血再灌注損傷中具有重要作用［3］。本研究發現, 在缺血再灌注3、6 h后, SOD含量抗體組較生理鹽水組升高, MDA含量較生理鹽水組降低, 二者與生理鹽水組比較差異均存在統計學意義(P＜0.05), 在0 h時可能是由于TNF-α抗體早期對SOD酶系統和MDA的氧化激活作用較弱, 在12 h時可能是由于TNF-α的濃度基本降低至發病前水平, 使用TNF-α抗體后, 并不能對內源性抑制系統起到抵抗作用；而且由于再灌注時間的延長, 腦損害變成不可逆性, 使用TNF-α抗體可能已經無作用。因此, 在腦梗死中期, 根據TNF-α含量, 使用TNF-α抗體后, SOD活性增高, MDA下降, 說明TNF-α抗體具有抗氧化能力,對細胞具有保護作用。但由于實驗條件限制, 潛在的副作用和作用機制尚需進一步的深入研究。

［1］ Αlkam T, Nitta Α, Mizoguchi H, et al.Restraining tumor necrosis factor-alpha bythalidomide prevents the amyloid beta-induced impairment of recognition memory in mice.Behav Brain Res, 2008, 189(1):100-106.

［2］ Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.Stroke, 1989, 20(1):84-91.

［3］ Van der Bijl ΑE, Emmer BJ, Breedveld FC, et al.Advanced magnetic resonance imaging of the brain in patients treated with TNF-alpha blocking agents.Clin Exp Rheumatol, 2007, 25(2):301-304.

Antioxidation effect by anti-tumor necrosis factor-α monoclonal antibody for cerebral ischemia- reperfusion rats

CHEN Jin, WU Li-e.
Department of Neurology, Inner Mongolia Autonomous Region People’s Hospital, Hohhot 010017, China

Objective To investigate antioxidation effect by tumor necrosis factor-α (TNF-α) monoclonal antibody for cerebral ischemia-reperfusion rats.Methods A total of 76 health male SD rats were randomly divided into sham operation group (4 cases), antibody group (36 ases), and normal saline group (36 cases).Model of focal cerebral ischemia-reperfusion rats was established by Zea Longa line plug method.Serum malondialdehyde (MDA) content and superoxide dismutase (SOD) activity were detected.Results 3 and 6 h of TNF-α monoclonal antibody reperfusion reduced serum MDA content and improvded SOD activity.Conclusion Anti-TNF-αmonoclonal antibody can improve antioxidation effect in cerebral ischemiareperfusion rats for a certain time.

Anti-tumor necrosis factor-α monoclonal antibody; Cerebral ischemia-reperfusion injury; Malondialdehyde; Superoxide dismutase

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.27.212

2015-05-08］

010017 內蒙古自治區人民醫院神經內科(陳金)；包頭醫學院第一附屬醫院神經內科(吳麗娥)