脂肪干細胞的免疫學性質探討

韋慧玲

脂肪干細胞的免疫學性質探討

韋慧玲

目的 探討脂肪干細胞免疫學性質。方法 健康志愿者6例,志愿者均與抽脂要求相符,作為研究組；將同期另選6例健康志愿者作為對照組。分別抽取兩組健康志愿者脂肪組織25 g,給予培養,并觀察目標細胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達的特點,同時對異體脂肪干細胞及淋巴細胞共同培養的增殖情況進行觀察。結果 脂肪干細胞沒有造血系統污染及內皮細胞污染問題,且對照組與研究組每毫升細胞液細胞數(CPM)比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。結論 脂肪干細胞有較小排斥反應,臨床應引起重視,加強培養及分離技術研究。

脂肪干細胞；免疫學性質

干細胞是具有自我增殖及更新能力的細胞, 依據不同分化階段可分為成體干細胞、胚胎干細胞兩類。與間質干細胞相對比, 脂肪干細胞(ADSCs)在體外更易擴增, 獲得容易, 且免疫原性低, 是臨床醫學及組織工程發展的重要突破。本探究分析脂肪干細胞免疫學性質, 現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 搜集本院2014年3月～2015年3月健康志愿者6例, 志愿者均與抽脂要求相符, 作為研究組；另選同期6例健康志愿者作為對照組。納入標準：均對本研究知情；均身體健康。研究組女3例, 年齡21～37歲, 平均年齡(28.46±3.36)歲；男3例, 年齡20～38歲, 平均年齡(29.65±3.34)歲。對照組女3例, 年齡22～38歲, 平均年齡(28.51±3.29)歲；男3例, 年齡21～38歲, 平均年齡(29.70±3.42)歲。兩組健康志愿者性別、年齡一般資料比較,差異無統計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 分別抽取兩組健康志愿者脂肪組織25 g, 將其放在離心管中, 后轉為培養皿中, 準備處理, 離心管與培養皿均為無菌；剔除組織中筋膜及血管, 使用無菌溶液反復進行沖洗；處理后, 用眼科剪對其進行分割, 大小約為1.5 mm3,直至分割成糊狀, 在37℃環境下, 選擇Ⅰ型膠原酶(0.1%)予以震蕩進行消化處理, 速度為120 r/min；采用LG-DMEM培養液和胎牛血清(10%)終止消化, 并離心10 min, 后獲得高濃度的間質組織細胞團, 對其進行處理, 選擇紅細胞裂解液,并去除紅細胞, 采用篩網(100 μm)進行過濾；將過濾液取出,使用鏈霉素100 g/L、青霉素100 U/ml、LG-DMEM培養液、胎牛血清進行重懸處理；處理后, 將其置于培養皿中, 直徑為100 mm, 接種, 設定濃度4×104/cm2；接種后, 在體積分數5%CO2培養箱中進行培養, 溫度設定為37℃, 且每隔2 d更換一次培養液；待細胞生長檢測80%～90%時, 按照比例1∶2進行傳代培養。

觀察目標細胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達的特點, 方法選擇流式細胞術。首先使用BSA-PBS溶液(0.5%)對脂肪干細胞標本進行洗滌, 離心10 min, 1000 r/min, 獲取單細胞懸液, 轉變細胞濃度1×109/L；其次對組織相容性抗原Ⅰ(MHCⅠ)、MHCⅡ、CD44、CD29、CD90、CD31、CD45、CD34進行熒光標記, 將標記后物質加入懸液, 將其和熒光標記的非特異性IgG同型進行對比分析, 在37℃環境下進行培養, 30 min后, 反復使用PBS進行處理, 使用多聚甲醛予以固定,用量30 g/L, 最后實施檢測, 儀器選擇流式細胞儀。

1.3 觀察指標 觀察細胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達的特點, 同時對異體脂肪干細胞及淋巴細胞共同培養的增殖情況進行觀察。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差(s)表示, 采用t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 脂肪干細胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達的特點 采用流式細胞術檢測脂肪干細胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達的特點, 陰性表達抗原：CD31(2.81±1.04)%, CD34(17.12±0.54)%, CD45(1.39±0.27)%。陽性表達抗原：CD29(91.22±1.03)%, CD44(90.83±2.37)%, CD90(94.02±0.69)%。由此得知, 脂肪干細胞無造血系統污染及內皮細胞污染問題。

2.2 淋巴細胞共同培養情況 對照組與研究組CPM比較,差異無統計學意義(P＞0.05), 表示脂肪干細胞對異體移植的排斥作用較小。見表2。

表1 兩組健康志愿者CPM比較(s, 個)

表1 兩組健康志愿者CPM比較(s, 個)

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3 討論

脂肪的組織基質內存在大量ADSCs, 作為成體干細胞,具有多向分化潛質, 在誘導條件適宜的情況下可分化成軟骨細胞、成骨細胞及脂肪細胞等, 且增殖能力較強。研究顯示, ADSCs不僅具有細胞多分化功能, 如軟骨、肌肉、成骨、神經、脂肪等, 而且其表面標志表達同BMSs(骨髓間充質干細胞)一致, 包括CD166、CD106、CD105、CD29等［1］。B7-1、HLA類抗原、B7-2、CD40L和CD40在BMSc不表達, 體外BMSc能對淋巴細胞的反應進行抑制, 而體內應用BMSc可使異體移植皮片成活時間延長, 故同種異體BMSc是目前組織工程主要細胞來源［2］。

體外培養時ADSCs對淋巴細胞增殖的抑制及刺激能力為ADSCs體外的免疫學性質, 試驗包括單向淋巴細胞增殖反應、雙向淋巴細胞增殖反應, 前者主要用以檢測刺激細胞ADSCs所致淋巴細胞的增殖程度, 數值用增殖后的數量表達,且數值和ADSCs免疫原性之間呈正相關；后者主要用來檢測雙方抑制淋巴細胞增殖的作用, 不對兩種細胞進行滅活,互相作為反應細胞及刺激細胞, 數值用增殖后兩種細胞的總數量表達。ADSCs體外試驗與多種可控因素相關, 在體內試驗中, ADSCs免疫學性質為復雜性免疫反應綜合作用的結果, 異基因抗原免疫反應與細胞因子、補體系統等密切相關。脂肪干細胞沒有造血系統污染及內皮細胞污染問題,對異體移植的排斥作用較小, 臨床應加強對細胞分離及培養的深入研究。

［1］ 韓長杰, 楊向群, 張傳森.脂肪干細胞的免疫學性質.中國組織工程研究與臨床康復, 2010, 14(27):5095-5098.

［2］ 孔志華, 袁玉林, 熊志, 等.脂肪干細胞的免疫學性質分析.現代診斷與治療, 2014, 25(22):5080-5082.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.30.079

2015-06-01］

450000 河南省鄭州市第七人民醫院檢驗科