結核感染T淋巴細胞斑點試驗在骨結核病診斷中的臨床應用價值

李建華，張文龍，鮑玉成，商振德，邱南海

（天津市海河醫院骨科，天津300350）

結核感染T淋巴細胞斑點試驗在骨結核病診斷中的臨床應用價值

李建華，張文龍，鮑玉成，商振德，邱南海

（天津市海河醫院骨科，天津300350）

結核病是目前全球最常見的傳染性疾病之一，結核分枝桿菌相關檢查在各種結核病確診過程中有著舉足輕重的作用。傳統診斷結核病主要依賴于結核菌涂片，經抗酸染色然后在顯微鏡下觀察，盡管該方法的特異性較強，但是其敏感性較低，且對某些類型結核病如骨結核、中樞神經系統結核來說標本采集難度較大［1－2］，從而使得該方法在臨床上的應用受到了極大的限制。隨著研究的深入，諸多新技術逐步用于結核病的診斷。本研究旨在探討結核感染T淋巴細胞斑點試驗（T－SPOT.TB）在骨結核病診斷中的臨床應用價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年6月－2014年12月我院收治的150例骨結核、15例類風濕性關節炎、22例布氏菌病、17例化膿性脊柱骨關節感染、18例骨性關節炎、23例骨腫瘤，所有患者均符合相應的診斷標準，并完善所有檢查，排除各種原發性或繼發性免疫功能缺陷患者。4組患者性別、年齡等一般資料相比差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 4組患者一般資料的比較

1.2 研究方法

1.2.1 PPD皮試 將0.1ml PPD（北京祥瑞生物制品有限公司生產，國藥準字S10960016，規格為每1ml含50IU結核菌素純蛋白衍化物）在研究對象左側或右側前臂內側給予皮內注射，注射48－72h后對反應面積進行測量。結果判斷［3］：硬結直徑≤5 mm提示（－），硬結直徑5－9mm提示（＋），硬結直徑10－19mm提示（＋＋），硬結直徑≥20mm或者有水泡甚至壞死時提示（＋＋＋）。

1.2.2 抗結核抗體檢測 采用酶聯免疫吸附試驗（ELSIA法），抽取研究對象靜脈血3ml，3 000rpm離心5min分離血清，取血清按試劑盒（成都永安制藥有限公司）說明進行抗結核抗體檢測。結果判斷：樣本的吸光值／臨界對照品的吸光度值＞1.2為陽性，＜1.0為陰性。

1.2.3 T－SPOT.TB 抽取研究對象靜脈血5ml，肝素抗凝，采用無菌Ficoll淋巴細胞分離液進行單個核淋巴細胞分離，淋巴細胞計數結束后進行TSPOT.TB，試劑盒由Oxford Immunotec Ltd生產。結果判斷：當陰性對照孔斑點數為0－5時（抗原A孔或抗原B孔斑點數－陰性對照孔斑點數）×4≥24為陽性，反之為陰性。當陰性對照孔斑點數≥6時，抗原A孔或抗原B孔斑點數≥2×陰性對照孔斑點數為陽性，反之為陰性。

1.3 統計學分析

采用SPSS19.0統計軟件進行數據分析，不同診斷方法SPN以及SPE的比較采用配對χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PPD皮試診斷骨結核的臨床價值分析 PPD皮試診斷骨結核的SEN、SPE、PPV、NPV、DA分別為59.33%、75.79%、79.46%、54.14%、65.71%，見表2。

表2 PPD皮試診斷骨結核的臨床價值分析

2.2 抗結核抗體檢測診斷骨結核的臨床價值分析抗結核抗體檢測診斷骨結核的SEN、SPE、PPV、NPV、DA分別為48.67%、86.32%、84.88%、51.57%、63.27%，見表3。

表3 抗結核抗體檢測診斷骨結核的臨床價值分析

2.3 T－SPOT.TB診斷骨結核的臨床價值分析 TSPOT.TB診斷骨結核的SEN、SPE、PPV、NPV、DA分別為84.67%、94.74%、96.21%、79.65%、88.57%，見表4。

表4 T－SPOT.TB診斷骨結核的臨床價值分析

2.4 三種方法診斷骨結核的性能比較 T－SPOT.TB診斷骨結核的SEN顯著高于PPD皮試、抗結核抗體（χ2值分別為8.3493、12.7992，P＜0.05）。TSPOT.TB診斷骨結核的SPE均顯著高于PPD皮試、抗結核抗體（χ2值分別為6.3745、5.8311，P＜0.05）。

3 討論

結核病是一種感染結核分枝桿菌的傳染性疾病，主要經呼吸道吸入病原菌而感染，因此臨床上以肺結核最為常見。值得注意的是，結核分枝桿菌感染肺以后可以隨著血液傳播至全身各個組織、器官，進而導致機體其他組織、器官發生結核菌感染，如骨結核、腎結核、腸結核等等。

如前所述，結核分枝桿菌相關檢查在各種結核病確診過程中有著舉足輕重的作用。目前臨床上檢測結核分枝桿菌的主要方法有結核菌涂片、結核菌培養、PPD皮試、抗結核抗體檢測等。與結核菌涂片一樣，結核菌培養診斷結核病的主要優點就是SPE強，但是其不足之處除SEN不甚理想、某些類型結核病患者標本采集困難以外，還存在營養要求高、檢測周期長等問題［4，5］，因此在本研究并未選用這兩種方法作為研究方法。

PPD皮試在目前臨床上主要用于結核病的輔助診斷及流行病學調查、卡介苗接種效果觀察等。與其他方法相比，PPD皮試的主要優點就是對標本采集無要求，只要注射部位無損傷即可，但是該方法的不足之處較多，如檢測結果受患者免疫功能狀態影響，結核感染早期、血行播散型肺結核等重癥結核等情況結果呈陰性［6］，這些因素導致PPD皮試診斷結核病的SEN、SPE均不甚理想。隨著研究的深入，抗結核抗體檢測逐步應用于臨床，該方法只需要采集患者血清標本即可進行測定，適用于各種類型結核病的診斷，因此臨床應用范圍得到顯著擴大。盡管如此，由于交叉免疫反應、隱性結核菌感染、機體體液免疫缺陷、特異性抗體與結核抗原形成免疫復合物、試劑質量等因素的存在［7－8］，導致抗結核抗體檢測診斷結核病的SEN、SPE仍然有進一步提升的空間。

T－SPOT.TB是目前臨床上診斷結核病的新方法之一，其主要原理就是應用酶聯免疫斑點技術對患者體內是否產生結核效應T淋巴細胞進行檢測，從而對患者是否感染結核桿菌進行判斷［9］。在實際操作過程中，盡管該方法的操作稍顯復雜，但是本研究顯示其診斷骨結核的SEN、SPE均顯著高于PPD皮試、抗結核抗體（均P＜0.05）。分析其原因，TSPOT.TB具有不受患者免疫狀態影響，并且只對結核分枝桿菌敏感，與其他類型分枝桿菌無交叉反應等特點［10］，從而使得該方法SEN、SPE得到大幅度提高。綜上所述，T－SPOT.TB診斷骨結核的可靠方法，值得臨床推廣應用。

［1］米 琳.結核菌培養陽性患者303例蛋白芯片技術與涂片染色的對比研究［J］.山西醫藥雜志，2011，40（19）：1040.

［2］常占平，李艷靜.靜脈注射鹽酸氨溴索排痰對涂片陰性肺結核患者的診斷價值［J］.中國綜合臨床，2013，29（5）：515.

［3］李衛彬，侯 琰，程新征.結核菌素試驗的臨床應用進展［J］.臨床肺科雜志，2014，19（4）：737.

［4］郭新枝，陳 裕，于永敏，等.支氣管肺泡灌洗液BACTECMGIT960結核菌快速培養的臨床研究［J］.北京醫學，2013，35（3）：221.

［5］郭新枝，陳 裕，于永敏，等.痰液BACTEC－MGIT960快速結核菌培養對菌陰肺結核的臨床診斷價值［J］.中國藥物與臨床，2013，13（2）：201.

［6］林存智，杜建新，王芳芳，等.不同人群結核菌素試驗強陽性篩查及異煙肼預防效果五年隨訪研究［J］.中華臨床感染病雜志，2014，7（5）：420.

［7］范 俊，秦世炳，賈紅彥，等.結核感染T細胞酶聯免疫斑點試驗與結核抗體檢測在骨關節結核輔助診斷中的價值［J］.中國防癆雜志，2014，36（10）：884.

［8］唐新華，李 觀.結核抗體、C反應蛋白在結核病合并艾滋病中的檢測及臨床意義［J］.實用臨床醫藥雜志，2014，18（11）：43.

［9］成金英，鮑萬國，汪 楊，等.T－SPOT.TB在發熱患者中的應用價值［J］.中華傳染病雜志，2014，32（8）：484.

［10］王海英，王仕昌，趙 靜，等.結核感染T淋巴細胞斑點試驗技術在學校結核密切接觸者中篩查潛伏結核感染的應用［J］.中華檢驗醫學雜志，2009，32（9）：1030.

李建華（1981－），女，碩士，主治醫師，研究方向：骨關節疾病、骨關節結核。

2015－03－09）

1007－4287（2015）10－1770－03