風(fēng)濕性心臟病患者外周血細(xì)胞因子和Treg細(xì)胞檢測的意義

華 杰

（應(yīng)城市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北孝感432400）

風(fēng)濕性心臟病患者外周血細(xì)胞因子和Treg細(xì)胞檢測的意義

華 杰

（應(yīng)城市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北孝感432400）

風(fēng)濕性心臟?。╮heumatic heart disease，RHD）為一種自身免疫性疾病，由A組乙型溶血性鏈球菌感染導(dǎo)致風(fēng)濕熱后遺癥，主要病理基礎(chǔ)為受累心臟瓣膜發(fā)生彌漫性纖維化，瓣口狹窄，或關(guān)閉不全，引發(fā)心臟血流動(dòng)力學(xué)紊亂，占心臟外科疾病約30%［1］。RHD患者體內(nèi)存在有對心肌、心內(nèi)外膜、血管平滑肌起反應(yīng)的抗體，發(fā)生鏈球菌感染時(shí)可激發(fā)機(jī)體發(fā)生自身免疫反應(yīng)，出現(xiàn)相應(yīng)病變。RHD患者免疫功能顯著低于正常人［2］。鏈球菌M蛋白為一種超抗原，可大量激活機(jī)體內(nèi)T細(xì)胞、自身反應(yīng)性T細(xì)胞，誘發(fā)RHD［3］。筆者回顧性分析32例RHD患者的臨床資料，以探討IL－10、TGF－β1等外周血細(xì)胞因子的血清濃度與CD4＋、CD25＋、Foxp3＋Treg水平在RHD發(fā)生發(fā)展中的意義，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年2月－2013年10月我院診治的RHD患者32例，男18例，女14例，年齡39－69歲，平均年齡（45.2±6.3）歲。所有患者均經(jīng)過超聲心動(dòng)圖與瓣膜術(shù)后病檢確診RHD，紐約心臟病學(xué)會(huì)心功能分級(jí)為Ⅱ－Ⅳ級(jí)，排除合并肝腎功能不全、冠心病、急慢性感染、惡性腫瘤、甲狀腺功能亢進(jìn)、糖尿病、近期使用免疫調(diào)節(jié)制劑、近期有風(fēng)濕活動(dòng)及其他自身免疫性疾病患者。合并單純二尖瓣狹窄患者13例，二尖瓣狹窄并關(guān)閉不全患者15例，二尖瓣及主動(dòng)脈瓣狹窄并關(guān)閉不全患者4例。選擇同期健康查體人員32例為對照組，兩組患者在年齡、性別、生活環(huán)境等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法 選擇美國BioLegend公司生產(chǎn)的Foxp3－APC單克隆抗體、熒光抗體鼠抗人CD4－FITC、CD25－PE，選擇美國R＆D公司生產(chǎn)的IL－10、TGF－β1的ELISA試劑盒。抽靜脈血10ml，經(jīng)肝素抗凝。5ml離心后取血清，采用ELISA法檢測IL－10、TGF－β1；5ml用淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），計(jì)數(shù)細(xì)胞后，將細(xì)胞濃度調(diào)整至1×106／ml。取細(xì)胞懸液100μl，加入20μl CD4－FITC、CD25－PE抗體，室溫避光反應(yīng)20min，離心棄上清，加入固定破膜液1ml，室溫孵育20min，加入20μl Foxp3－APC抗體，避光反應(yīng)30min，染色緩沖液洗滌離心，流式細(xì)胞儀檢測，以CD4設(shè)門分析CD4＋CD25＋Foxp3＋細(xì)胞亞群，每份計(jì)數(shù)為104個(gè)細(xì)胞，以CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細(xì)胞占CD4＋T淋病細(xì)胞比例表示結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x—±s）表示，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者IL－10、TGF－β1濃度比較 經(jīng)上述檢測分析，觀察組IL－10及TGF－β1濃度均顯著低于對照組（P＜0.01）。詳見表1。

IL－10觀察組組別n TGF－β1 32 25.6±4.5 7.3±2.9對照組32 32.6±4.4 13.2±2.6 T 6.29 8.56 P 0.000.00

2.2 兩組患者Treg細(xì)胞比較 經(jīng)上述檢測及對比分析，觀察組CD4＋CD25＋細(xì)胞／淋巴細(xì)胞比值及CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg／CD4＋T細(xì)胞比值均顯著高于對照組（P＜0.01）。詳見表2。

表2 兩組患者Treg細(xì)胞比較

表2 兩組患者Treg細(xì)胞比較

細(xì)胞觀察組32例組別例數(shù)CD4＋CD25＋細(xì)胞／淋巴細(xì)胞CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg／CD4＋T 5.8±0.6 2.9±0.3對照組32例2.7±0.8 1.4±0.3 T 17.53 20.00 P 0.0000.000

3 討論

風(fēng)濕性心臟病為一種自身免疫性疾病導(dǎo)致的結(jié)果，與多種細(xì)胞因子共同作用有關(guān)。IL－10是一種抗炎因子，由多種細(xì)胞分泌，具有抑制多種炎癥因子與自身抗體合成的作用［4］。本研究中觀察組IL－10顯著低于對照組（P＜0.05）。提示當(dāng)心臟的瓣膜出現(xiàn)自身免疫炎癥時(shí)，因機(jī)體內(nèi)抗炎因子IL－10含量降低使炎性因子持續(xù)存在，瓣膜局部長期受炎性因子的侵蝕出現(xiàn)病變，形成心臟瓣膜病。TGF－β主要有TGF－β1、TGF－β2、TGF－β3三種類型。各種淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞及血小板可分泌合成TGF－β1，有研究發(fā)現(xiàn)RHD伴心衰患者心肌中TGF－β1表達(dá)顯著增強(qiáng)，與左室大小密切相關(guān)［5］。在離體受損瓣膜中內(nèi)皮基質(zhì)細(xì)胞、浸潤的成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)有TGF－β增加，對纖維化、鈣化、膠原沉積具有促進(jìn)作用［6］。本研究表明觀察組患者體內(nèi)TGF－β1顯著低于對照組（P＜0.01）。提示RHD與血清中TGF－β1含量關(guān)系不大，但心臟瓣膜炎癥時(shí)，因局部淋巴細(xì)胞浸潤，TGF－β1表達(dá)增加的淋巴細(xì)胞可通過局部旁分泌TGF－β1，到達(dá)局部心肌、瓣膜組織中，因此僅表現(xiàn)為局部TGF－β1升高導(dǎo)致瓣膜發(fā)生病變。

Treg細(xì)胞對自身免疫性疾病的發(fā)生具有抑制作用，當(dāng)CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細(xì)胞減少時(shí)，機(jī)體的細(xì)胞免疫功能低下，體液免疫功能增強(qiáng)，此時(shí)B細(xì)胞被活化，機(jī)體產(chǎn)生大量抗體出現(xiàn)自身損害，即發(fā)生自身免疫性疾?。?］。同時(shí)因致病因子的不斷擴(kuò)散、長期持續(xù)存在，使疾病不斷反復(fù)發(fā)作［8］。有研究證實(shí)［9］類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白塞病、原發(fā)性干燥綜合征等風(fēng)濕性疾病患者體內(nèi)Treg細(xì)胞比例均比健康人低［10］。本研究中進(jìn)一步證實(shí)了RHD患者體內(nèi)Treg細(xì)胞顯著低于健康人（P＜0.05）。提示機(jī)體更易發(fā)生自身免疫性疾病，RHD患者病程較長，且易反復(fù)，可能與Treg細(xì)胞減少與致病因子擴(kuò)散且長期存在有關(guān)。患者心臟瓣膜受自身抗體的長期攻擊，持續(xù)的免疫炎性反應(yīng)使瓣膜增厚、攣縮，最終出現(xiàn)心臟瓣膜性疾?。?1］。TGF－β可刺激T細(xì)胞產(chǎn)生大量Treg，TGF－β1降低［12］，T細(xì)胞產(chǎn)生Treg細(xì)胞減少，RHD患者體內(nèi)CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg也相應(yīng)減少。同時(shí)Treg細(xì)胞主要通過分泌IL－10、TGF－β1發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，RHD患者體內(nèi)CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細(xì)胞減少，同時(shí)血清中IL－10、TGF－β1濃度也相應(yīng)減低。說明RHD患者免疫異常與IL－10、TGF－β1的降低及Treg細(xì)胞的減少均有關(guān)。

綜上所述，IL－10、TGF－β1等外周血細(xì)胞因子血清濃度及CD4＋、CD25＋、Foxp3＋Treg等調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的檢測能夠反映RHD患者的免疫功能，對于患者病情的評(píng)估及預(yù)后的評(píng)價(jià)均具有重要意義。

［1］范文茂，徐新，袁書國，等.MicroRNA－223及MMP－9在風(fēng)濕性心瓣膜病合并心房顫動(dòng)患者中的表達(dá)及臨床意義［J］.嶺南心血管病雜志，2014，20（2）：158.

［2］劉文洲，周華富，孫 宇，等.超級(jí)化激活環(huán)核苷酸調(diào)控通道基因家族－2在風(fēng)濕性心臟病二尖瓣狹窄伴心房顫動(dòng)患者右心耳組織中的表達(dá)［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2014，31（03）：649.

［3］張加強(qiáng)，張 衛(wèi).右美托咪定對風(fēng)濕性心臟病合并肺高壓患者行瓣膜置換術(shù)時(shí)血流動(dòng)力學(xué)的影響［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2014，34（06）：469.

［4］韓榮霞，蔡 霞，唐勝建.病毒IL－10的研究進(jìn)展［J］.國際免疫學(xué)雜志，2008，31（3）：226.

［5］羅又橋，方海寧，譚 偉，等.風(fēng)濕性心臟病二尖瓣置換術(shù)后三尖瓣返流的再手術(shù)治療［J］.中國綜合臨床，2014，30（01）：82.

［6］Moura LM，Rocha－Gon?alves F，Zamorano JL，et al.New cardiovascular biomarkers：clinical implications in patients with valvular heart disease［J］.Expert Rev Cardiovasc Ther，2008，6（7）：945.

［7］鄭紅霞，于健寧，陶筱娟，等.原發(fā)性干燥綜合征患者外周血CD4＋CD25＋high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)及意義［J］.浙江實(shí)用醫(yī)學(xué)，2010，2（3）：15：3.

［8］趙 元，周新民，廖曉波，等，風(fēng)濕性心臟病患者致心力衰竭心肌組織中IL－10、TGF－β1和NF－kB／p65的表達(dá)及意義［J］.心肺血管病雜志，2009，2（5）：332.

［9］劉 健，萬 磊，馮云霞，等.四種風(fēng)濕病患者血小板參數(shù)變化及外周血BTLA、Treg觀察［J］.中國免疫學(xué)雜志，2014，30（4）：508.

［10］Hammad AM，Youssef HM，El－Arman MM.Transforming growth factor beta 1in children with systemic lupus erythematosus：apossible relation with clinical presentation of lupus nephritis.Lupus，2006，15（9）：608.

［11］莫 莉，許禮發(fā).風(fēng)濕性心臟病患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與IL－10、TGF－β1的關(guān)系及意義［J］.中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2012，6（10）：2776.

［12］Gigante M，Ranieri E.TGF－beta promotes immune suppression by inhibiting Treg cell apoptosis［J］.Immunotherapy，2010，2（5）：608.

2014－07－22）

1007－4287（2015）10－1752－02