EB病毒血清學及DNA聯合檢測在嬰幼兒傳染性單核細胞增多癥臨床應用研究

孫志惠，劉 鵬

（天津市第五中心醫院1.兒內科；2.檢驗科，天津300450）

EB病毒血清學及DNA聯合檢測在嬰幼兒傳染性單核細胞增多癥臨床應用研究

孫志惠1，劉 鵬2

（天津市第五中心醫院1.兒內科；2.檢驗科，天津300450）

目的探討實時定量PCR技術對傳染性單核細胞增多癥嬰兒的診斷價值。方法 選取臨床表現為發熱的嬰兒442例，其中48例傳染性單核細胞增多癥患兒為觀察組，另選擇50例健康兒童為對照組，應用實時定量PCR技術（RT－qPCR）檢測外周血EB病毒DNA載體，對患兒進行外周血異型淋巴細胞及血清嗜異凝集反應，并對單個細胞EBV－DNA載量進行檢測，全面對比分析EBV－DNA診斷的診斷效果。結果 ①EBV－DNA陽性患兒中異型淋巴細胞＞10%患兒39例，占69.6%，血清嗜異凝集反應陽性患兒37例，占66.1%；EBV－DNA陰性患兒中異型淋巴細胞＞10%患者9例，占2.3%，血清嗜異凝集反應陽性患者7例，占1.8%，兩組患者異型淋巴細胞＞10%患者及血清嗜異凝集反應陽性患者占比例差異有統計學意義（P＜0.01）；②VCA－IgM陽性率最高，陽性率為87.5%（43／48），明顯高于對照組（P＜0.01）。結論 VCA－IgM與DNA聯合檢測能提高嬰幼兒傳染性單核細胞增多癥診斷準確性。

單核細胞增多癥；實時定量PCR技術；異型淋巴細胞；載量

（Chin J Lab Diagn，2015，19：1696）

傳染性單核細胞增多癥（IM）是一種由EB病毒引起的急性、亞急性單核－巨噬細胞急性增多性疾病［1］。該疾病好發于兒童，特別是嬰幼兒，臨床表現為發熱、淋巴結腫大、咽峽炎以及肝脾腫大，并伴有血液中異常的淋巴細胞增高。由于此疾病臨床表現缺乏特異性，加之許多嬰幼兒往往只表現為上呼吸道感染癥狀，故往往容易誤診［2］。目前臨床上對此類病患診斷主要靠實驗室手段對疑似傳染性單核細胞增多癥的嬰幼兒外周血進行EB病毒感染血清學檢查，但是由于嬰幼兒身體免疫系統發育尚未完善，此單一方式同樣也會造成漏診。本研究選取EB病毒血清學及DNA聯合檢測手段，以探討其診斷效果，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入標準：符合中華醫學會關于發熱、傳染性單核細胞增多癥的診斷標準［3］；年齡≤3歲；此前未經藥物治療；排除惡性腫瘤、先天畸形、嚴重臟器功能不全者；排除臨床資料不完整及不能配合研究者。

選取2012.7－2014.7在我院進行住院治療的發熱患兒442例，包括男241例，女201例，年齡3個月－3歲，平均（14.7±8.2）個月。其中經臨床及實驗室診斷最終確診為傳染性單核細胞增多癥患兒48例，占10.9%，包括男26例，女22例，年齡3個月－2.5歲，平均年齡（14.2±7.8）個月。其余診斷為：上呼吸道感染212例，占48%；（支氣管炎）肺炎107例，占24.2%；（肺炎）支氣管炎65例，占14.7%，其他共10例，包括支原體感染5例，腎小球腎炎3例，病毒性心肌炎2例。

另選取健康查體患兒50例作為對照組，其中男26例，女24例，年齡3個月－3歲，平均（15.2±8.7）個月。兩組患者性別、年齡差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

本研究經院倫理委員會批準，并均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 EBV－DNA載量檢測選取實時定量PCR技術（RT－qPCR），具體操作為：先抽取患兒靜脈血3ml置于枸櫞酸鈉抗凝管中，應用TaqMan熒光標記探針基因擴增技術進行檢測，探針序列為FPEBV5’－XC－CTCGGA－CAGCTCCTAAGAAGGCACC－Y－3’，26bp。引物序列為：PQEBVF5’－AAGCCCAA－CACTCCAC－CAC－3’，19bp；PQEBVR5’－CTGGTAGGACT－GGGCGAC－3’，18bp。PCR擴增條件：將各反應管放入PE5700PCR儀，按下列條件擴增：在93℃環境下進行預變性2min后，再在93℃環境變性45s后轉入55℃環境下變性60s，往復10個循環，最后在93℃環境變性30s后轉入55℃下變性45s，往復30個循環。試劑購自中山大學達安基因股份有限公司，具體操作按說明書進行。異常淋巴細胞比率指標檢測采用患兒手指血，用推片進行端氏染色，在高倍顯微鏡下計數異常淋巴細胞；血清嗜異凝集反應采取靜脈血2ml置于收集管中，采用嗜異性凝集試劑盒（美國ARLINGTONSCIENTIFIC，INC生產，產品編號：950－0423－00）進行血清嗜異凝集反應檢測，以1：160為界限定義陽性和陰性。

1.3 統計學方法 應用SPSS19.0統計軟件包進行統計分析，數值采用率或者百分比表示，率比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 EBV－DNA陽性患兒與陰性患兒異型淋巴細胞與血清嗜異凝集反應比較 EBV－DNA陽性患兒56例，其中異型淋巴細胞＞10%患兒39例，占69.6%，血清嗜異凝集反應陽性患兒37例，占66.1%；EBV－DNA陰性患兒386例，其中異型淋巴細胞＞10%患者9例，占2.3%，血清嗜異凝集反應陽性患者7例，占1.8%，兩組患者異型淋巴細胞＞10%患者及血清嗜異凝集反應陽性患者占比例差異有統計學意義（P＜0.01）。表1。

表1 EBV－DNA陽性患兒與陰性患兒異型淋巴細胞與血清嗜異凝集反應對比（例，%）

2.2 EBV四種抗體檢測結果 對抗EBV殼抗原抗體（VCA－IgM，VCA－IgG），抗EBV早期抗原抗體（EA－IgG）及抗EBV核抗原抗體（EBNA－I－IgG）檢測發現：VCA－IgM陽性率最高，陽性率為87.5%（43／48），明顯高于對照組（P＜0.01）。表2。

表2 兩組患者EBV四種抗體檢測結果對比（例）

3 討論

嬰幼兒傳染性單核細胞增多癥最常見的臨床癥狀為發熱，而引起患兒發熱的原因很多，最常見的多為病毒、細菌感染，故對傳染性單核細胞增多癥的診斷帶來極大的干擾［4］。除了典型的發熱、咽峽炎、頸部淋巴結腫大及肝脾大外，實驗室檢查對傳染性單核細胞增多癥的診斷十分重要。通常原發性EB病毒感染后患者VCA－IgM、VCA－IgG呈陽性，EBVNA－IgG呈陰性。研究顯示［5］，VCA－IgM對EB病毒感染具有診斷特異性，因此可作為EB病毒感染診斷依據。但也有研究顯示［6］，由于嬰幼兒體液免疫功能發育不完善，故上述指標體內水平較低，不易檢出。而利用EBV與DNA聯合檢測則可以避免單一檢測EBV受體液免疫功能影響的弊端，使檢測更加精準［7］。本研究顯示，EBV－DNA陽性的56例患兒中，異型淋巴細胞＞10%患兒39例，占69.6%，血清嗜異凝集反應陽性患兒37例，占66.1%；EBV－DNA陰性患兒386例中，異型淋巴細胞＞10%患者9例，占2.3%，血清嗜異凝集反應陽性患者7例，占1.8%，陽性患者中異常淋巴細胞及血清嗜異凝集反應陽性患兒占比例明顯高于陰性患兒，說明EBV－DNA檢測準確性較高，能夠作為臨床EBV診斷依據。

患兒感染EB病毒后，體內首先形成的抗體為抗EBV殼抗原IgM抗體，然后是IgG類抗體。研究發現［8］，在EB病毒感染的早期，患者體內便可出現VCA－IgM，并在體內迅速升高，然后逐漸下降；EA－IgG和VCA－IgG通常也在病毒感染時便出現，但是其在體內增長較VCA－IgM緩慢，通常要在3－5周才會達到高峰［9］；EBNA－IgG出現較為緩慢，通常在VCA－IgG和VCA－IgG高峰過后才會出現，但是其能夠在體內保持終身不消失。一般來說對EBNA－IgG的檢測最具有代表意義，但是由于其出現緩慢，臨床上往往在感染早期只檢測VCA－IgM作為診斷依據［10］。本研究對四種抗體進行檢測發現，VCA－IgM陽性率最高，達到87.5%，且明顯高于正常對照組，分析原因可能與檢測時機有關。一般患兒在出現發熱時候便立即到醫院進行，此時正值VCAIgM高峰，故檢測出VCA－IgM陽性較多。但是僅僅檢測VCA－IgM不足以做為診斷EB感染的依據，因為有研究發現，部分免疫力低下的患兒抗體檢測可為陰性［11］。另外，一些別的病毒例如巨細胞病毒、微小病毒以及弓形蟲感染等，同樣會出現VCA－IgM升高的情況。故應當對疑似患兒應用VCA－IgM與EBV－DNA聯合聯測，從而提高診斷敏感性，減少不必要的誤診、漏診發生。

綜上所述，EB病毒血清學及DNA聯合檢測能夠提高嬰幼兒傳染性單核細胞增多癥診斷準確性，值得臨床推廣應用。

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Clinical application study of EB virus serology and DNA combined detection in infants with infectious mononucleosis

SUN Zhi－hui，LIU Peng.
（1 Pediatrics Department；2 Laboratories，the Fifth Center Hospital of Tianjin City，Tianjin300450，China）

ObjectiveTo investigate the value of virus serology and DNA combined detection in infants with infectious mononucleosis.Methods 442cases baby with fever were selected，Among the 48cases of infectious mononucleosis in children as the observation group，Another 50healthy children as control group，Application of real time quantitative PCR（RT－qPCR）EB in peripheral blood virus DNA detection technology of external carrier，The children were given peripheral blood heterotypic lymphocyte and serum heterophile agglutination reaction，And on the single cell EBVDNA load testing，comprehensive comparative analysis of diagnostic effects of EBV－DNA diagnosis.Results The EBVDNA positive patients were atypical lymphocyte in 39＞10%patients，accounted for 69.6%，Serum heterophile agglutination reaction was positive in 37cases，accounted for 66.1%；EBV－DNA negative children with atypical lymphocyte in 9patients with＞10%，accounted for 2.3%，7patients with positive serum eosinophil ISO agglutination reaction，accounted for 1.8%，there were statistical significance between patients with atypical lymphocytes in patients with＞10% and serum eosinophil percentage patients with positive abnormal agglutination reaction in two groups（P＜0.01）；The highest positive rate of VCA－IgM，The positive rate was 87.5%（43／48），Significantly higher than control group（P＜0.01）.Conclusion The combined detection of VCA－IgM and DNA can improve the diagnostic accuracy of infant infectious mononucleosis.

mononucleosis；real－time quantitative PCR；atypical lymphocytes；load

R512.7

A

孫志惠（1975－），女，本科，主治醫師，研究方向：兒科感染性疾病。

2014－12－05）

1007－4287（2015）10－1696－03