心臟移植排斥反應患者血清IL－6檢測的意義

王 平，涂同濤，臧思思，丁 寧，孫 余，楊 露，胡麗華＊

（1.華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院檢驗科，湖北武漢430022；2.華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院輸血科）

心臟移植排斥反應患者血清IL－6檢測的意義

王 平1，涂同濤2，臧思思1，丁 寧1，孫 余1，楊 露1，胡麗華1＊

（1.華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院檢驗科，湖北武漢430022；2.華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院輸血科）

目的研究心臟移植術后患者血清中IL－6的變化及其在疾病發展過程中的意義。方法 分別在移植前及術后第1、3、7、14、30天抽取患者靜脈血，采用雙抗體夾心ELISA法檢測血清中IL－6濃度，并監測患者血清中FK506藥物濃度。結果 心臟移植患者血清中IL－6在術前與健康對照組人群無顯著性差異（P＞0.05），并在術后第一天明顯升高（P＜0.05），并于第3天開始降低，在術后第7天基本回復術前水平；移植急性排斥組患者血清中IL－6濃度顯著高于術前水平，在未發生排斥反應時，移植穩定組患者血清中IL－6與術前無明顯差異；移植急性排斥反應患者血清中FK506濃度與IL－6濃度呈現顯著地負相關性（P＜0.05）。結論 IL－6在移植急性排斥反應病情的發展中起著重要作用，監測受者血清中IL－6水平可預測急性排斥反應發生的風險。

心臟移植；白細胞介素－6；FK506

（Chin J Lab Diagn，2015，19：1673）

近年來，心臟移植已經成為心臟功能衰竭終末期最為重要的治療手段，但是移植術后最常發生的免疫排斥反應仍然是影響患者生存及移植物存活的重要因素。如何早期診斷排斥反應，是臨床醫生面臨的重要問題。到目前為止，心肌內膜活檢（EMB）仍是心臟移植排斥反應診斷的金標準。但是，進行EMB是一種創傷性的檢查方法，不能及時、全面地診斷是否發生排斥反應。因此尋找無創、簡便、快捷、全面、可靠、為臨床提供可靠的動態連續觀測指標的方法具有重要意義。在本研究中，我們通過檢測心臟移植患者血清中IL－6在手術前后的變化，來評估其在移植排斥反應的發展及預后中的意義。

1 材料和方法

1.1 研究對象

心臟移植組為本院2014年10月－2015年3月接受異體心臟移植患者36例，男25例，女11例；年齡22－70歲，平均43歲；排除再次移植及術后1個月內發生明顯病毒、細菌等病原體感染者（PCT、CRP、WBC等指標正常）。選取年齡、性別與患者相匹配的健康對照者36例，男24例，女12例；22－60歲，平均40歲，均來自健康查體者，各項檢查指標均正常。所有患者接受同種異體心臟移植術后第一天開始使用他克莫司（FK506）、馬替麥考酚酯（MMF）和皮質激素三聯免疫抑制方案。根據患者術后是否出現不明原因的低熱、乏力、食欲不振、關節痛、早搏、期前收縮等癥狀，將患者分為移植穩定組（29例）和移植急性排斥反應組（7例），其中移植急性排斥反應組病例均經心肌內膜活檢符合心臟移植排斥病理表現；兩組患者在年齡、性別比、原發疾病、冷熱缺血時間、免疫抑制方案等方面均無統計學差異。

1.2 試劑與儀器

EXL800酶標儀（美國Bil－Tek公司生產），人IL－6ELISA試劑盒（深圳欣博盛生物科技有限公司），全自動免疫化學分析儀（美國雅培ARCHITECTi1600SR）。

1.3 方法

分別收集患者術前及術后第1、3、7、14、30天EDTA抗凝血2ml和無抗凝劑血3ml，分離后放置于－80℃凍結保存。采用酶聯免疫法（ELISA）測定IL－6，按試劑盒說明書進行操作。采用高相液相色譜－質譜法監測血清Fk506濃度。

1.4 統計方法

實驗數據用SPSS 18.0軟件進行分析，結果采用均數±標準差（x—±s）表示，組間整體分布比較采用秩和非參數檢驗，兩變量間相關性分析采用Spearman秩相關檢驗，以雙側檢驗P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 心臟移植受者手術前后血清IL－6水平的變化

心臟移植患者術前與健康對照組血清中IL－6水平無顯著性差異（P＞0.05）；與術前比較，心臟移植術后第1天患者血清中IL－6水平顯著升高（z＝－4.16，P＜0.05），術后第3天患者血清中IL－6低于術前水平（z＝2.816，P＜0.05），術后第7天基本回復至術前水平。見表1。

表1 心臟移植患者手術前后IL－6的動態變化

表1 心臟移植患者手術前后IL－6的動態變化

與術前比較＊P＞0.05，＊＊P＜0.05

（健康對照組）術前術后1天術后3天術后7天術后14天術后30天IL－6（pg／ml）9.22±1.79 8.91±1.44 25.95±20.97＊＊6.08±2.72＊＊8.24±4.29＊8.87±4.15＊8.55±3.34＊

2.2 移植急性排斥組發生排斥反應時IL－6水平比較

移植排斥組患者發生排斥反應時，血清中IL－6水平明顯高于移植穩定組（z＝－3.084，P＜0.05）及術前（z＝－3.0，P＜0.05）。見表2。

2.3 心臟移植患者術后FK506藥物水平與IL－6相關性分析

我們檢測術后患者血清中藥物濃度，并將FK506水平與血清中IL－6水平進行相關性分析，發現患者血清中FK506濃度與IL－6水平呈明顯的負相關（r＝－0.66，P＜0.05），見圖1。

表2 移植排斥組IL－6的變化

圖1 FK506與IL－6的相關性分析

3 討論

IL－6作為一種多功能的前炎癥細胞因子，具有廣泛的生物學功能，在機體的免疫調節、炎癥反應、造血調控等過程中均發揮重要作用，能刺激多種細胞生長、促進細胞分化和Ig分泌、加速干細胞急性期蛋白合成等［1］。其過度表達與心臟移植急性排斥反應的發生和發展密切相關［2－5］，進一步研究IL－6的生物學效應，可能對心臟移植急性排斥反應的早期診治提供更廣闊的空間。

本研究結果顯示：心臟移植患者血清IL－6水平在術后第1天顯著升高，隨后由于免疫抑制劑的大劑量使用，受者的免疫系統被抑制，術后第3天血清中IL－6水平明顯低于術前水平（P＜0.05），之后IL－6逐漸回復術前水平并基本穩定。而急性移植排斥反應組患者血清中IL－6水平明顯高于術前及移植穩定組，這與文獻報道相符合［2，6，7］，提示IL－6在心臟移植急性排斥反應的發生和發展中發揮重要的作用。

實驗中我們還發現：當心臟移植患者血清中FK506血藥濃度降低時，藥物對機體免疫功能的抑制強度減弱，血清中IL－6水平會逐步升高，患者發生排斥反應的風險會增大；隨著血清藥物濃度的提高，IL－6水平會相應降低，病人急性排斥反應的臨床癥狀也會緩解。已有動物實驗證實通過給心臟移植后的小鼠輸注IL－6mAb中和體內IL－6，結果顯示可顯著抑制小鼠急性排斥反應的發生，移植物存活時間明顯延長；組織病理學結果顯示抗IL－6mAb輸注可減輕抑制物結構的破壞，移植物中浸潤的淋巴細胞明顯減少［8，9］。因此，監測同種異體心臟移植受者血清中IL－6水平可預測急性排斥反應發生的風險，抑制受者體內的IL－6的表達可能是一種有效的治療移植排斥反應的措施。

雖然大量動物研究表明IL－6在心臟移植排斥反應的診治中發揮重要作用，但在臨床研究中卻很少見，接下來，我們將收集大量的臨床病例，進一步研究IL－6在心臟移植排斥中的作用機理，為臨床上預防心臟移植急性排斥反應的發生和治療提供有效的依據。

［1］黃華明，陳愛軍.白細胞介素6的研究現狀［J］.醫學雜志，2010，26（14）：2658.

［2］李敬來，蕭明第.IL－6mRNA在排異反應中的動態表達及其與移植心臟生存時間的相關性研究［J］.上海醫學，2002，25（1）：5.

［3］李向東.器官移植排斥反應監測新進展［J］.檢驗醫學，2006，21（5）：547.

［4］Diaz JA，Booth AJ，Lu G，et al.Critical role for IL－6in hypertrophy and fibrosis in chronic cardiac allograft rejection［J］.Am J Transplant，2009，9（8）：1773.

［5］Liang Y，Christopher K，Finn PW，et al.Graft produced interleukin－6function as a danger signal and promotes rejection after transplantation［J］.Transplantation，2007，84：771.

［6］Zhao XM，Yeoh TK，Hiebert M，et al.The expre－ssion of acidic fibroblast growth factor（heparin－binding growth factor－1）and cytokine genes in human cardiac allografts and T cells［J］.Transplantation，1993，56：1177.

［7］Normann SJ，Peck AB，Staples ED，et al.Experimental and clinical allogeneic heart transplant rejedtion：correlations between histology and immune reactivity detected by cytokine messenger RNA［J］.J Heart Lung Transplant，1996，15：778.

［8］Booth AJ，Grabauskiene S，Wood SC，et al.IL－6Promotes Cardiac Graft Rejection Mediated By CD4＋Cells［J］.J Immunol，2011，187（11）：5764.

［9］雷 鈞，何 凡，吳 敏，等.抗白介素6單克隆抗體治療延長小鼠同種心臟移植物存活的實驗研究［J］.華中科技大學學報（醫學版），2010，39（2）：197.

Significance and serum levels of Interleukin－6in patients with acute rejection of heart transplantation

WANG Ping，TU Tong－tao，ZANG Si－si，et al.
（Department of Clinical Laboratory，Union Hospital，Tongji Medical college，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430022，China）

ObjectiveTo study the change and clinical significance of serum IL－6in patients with heart transplantation.Methods Serum IL－6was detected before and post transplantation on day 1，3，7，14，30with ELISA.The level of Serum FK506was measured on and off.Results There were no significant difference existed in the levels of serum IL－6in pre－transplantation patients compared to those of control group respectively（p＞0.05）.After operation，the levels of serum IL－6on day 1in patients were significantly higher，and dropper to the nadir on day 3，then rose to pre－operative values on day 7.These results indicated that the level of FK506was negatively correlated with the level of serum IL－6.Conclusion IL－6may play an important role in the development of post－transplanted rejection of patients，and could be an useful markers to monitor the level of immunosuppressant after cardiac transplantation.

heart transplantation；IL－6；FK506

R654.2

A

2014－09－22）

1007－4287（2015）10－1673－03

湖北省衛生廳采供血管理資助項目（CGX2012－3）

＊通訊作者