PAI—1和TLR4基因多態(tài)性與膿毒癥的關(guān)系

摘要：目的：分析與探討PAI（纖溶酶原激活抑制因子）-1和TLR4（Toll樣受體4）基因多態(tài)性與膿毒癥的關(guān)系。方法：選取60例2013年1月～2014年8月在我院接受治療的膿毒癥患者，根據(jù)MODS（多臟器功能障礙綜合征）的診斷標(biāo)準(zhǔn)分成MODS組和非MODS組，采用聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)合限制性片段長度多態(tài)性方法（PCR-RFLP）分析各組中PAI-1和TLR4單個核苷酸多態(tài)性，比較MODS組和非MODS組，比較死亡組和存活組中PAI-1基因型和等位基因頻率分布的差異。對比PAI-1和TLR4基因多態(tài)性與膿毒癥的關(guān)系。結(jié)果：MODS組患者中，4G/5G多態(tài)性與膿毒癥轉(zhuǎn)歸和易感性呈正相關(guān)性，且兩者具有明顯差異性，P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：研究表明，PAI-14G/5G多態(tài)性和膿毒癥呈正相關(guān)性，PAI-1與TLR4基因多態(tài)性和膿毒癥發(fā)生發(fā)展中存在相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：膿毒癥，TLR4基因多態(tài)性，PAI-1，相關(guān)性

【中圖分類號】R632.5 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】1672-8602（2015）01-0149-02

膿毒癥嚴(yán)重感染是全球性的威脅和挑戰(zhàn)，患病率約為人口的3‰，全球總病例數(shù)約為1800萬/年。約30%的外科ICU患者發(fā)生嚴(yán)重感染，并導(dǎo)致多器官功能障礙甚至衰竭，嚴(yán)重感染是外科大手術(shù)患者的主要死亡原因之一，因此手術(shù)后嚴(yán)重感染的預(yù)防及有效救治是從事感染工作者和臨床醫(yī)生的重要使命[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取60例2013年1月～2014年8月在我院接受治療的膿毒癥患者，根據(jù)MODS的診斷標(biāo)準(zhǔn)分成MODS組和非MODS組，其中MODS組患者中，MODS組患者中，男患者為18例，女患者為12例，年齡為25歲～66歲，平均年齡在（36.5±5.1）歲，非MODS組中，男患者為15例，女患者為15例，年齡為26歲～63歲，平均年齡在（36.1±4.9）歲，兩組研究對象性別、年齡等一般資料差異性不明顯，P>0.05，具有可比性。

1.2 研究方法

靜脈抽取兩組研究對象2ml血液，通過2%EDTA（乙二胺四乙酸二鈉）實施抗凝，并在凍存于-80e中以作備用。提取DNA時，通過2%EDTA抗凝1ml靜脈血，采用酚-氯仿取出研究對象的DNA，通過紫外分光光度儀進行定量，不斷擴增DNA片段，采用聚合酶鏈，依照其反應(yīng)（PCR）特異性對PAI-1基因序列進行擴增。最后，多態(tài)性分析PAI-1基因序列，通過5Ubsll限制性內(nèi)切酶酶切5L1 PCR產(chǎn)物，以此對基因序列進行標(biāo)識，酶切99bp（5G）片段為22bp片段與99bp（5G）片段，采用濃度為16%的聚丙烯酰胺凝膠電泳，將電壓設(shè)置為180V，于凝膠成像儀下對溴化乙錠染色后的結(jié)果進行觀察，最終確定基因類型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用軟件SPSS15.0進行統(tǒng)計學(xué)處理，（ ）表示計量資料，t檢驗，采用APACHII評分評價兩組研究對象陽性率，P<0.05表示差異性比較明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

研究結(jié)果顯示，PAI-14G/5G多態(tài)性和膿毒癥發(fā)生與發(fā)展存在相關(guān)性， PAI-14G/5G基因型分布中，兩組對象結(jié)果具有明顯差異性，P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。MODS患者PAI-14G/5G基因型攜帶率為0.44，而患者5G等位基因攜帶率為0.65。非MODS研究對象的PAI-14G/5G基因型攜帶率、5G等位基因攜帶率分別為0.25、0.50。此外，MODS組存活和死亡患者中的PAI-14G/5G基因也具有多態(tài)性，P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表1、2。

3 討論

PAI是單鏈糖蛋白的一種，為氨酸蛋白酶抑制物家族范疇，其具有52000的相對分子量質(zhì)量，PAI-1成熟后的氨基酸有379個。通常由血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生PAI-1，此外巨核細胞、血小板也可以合成PAI-1。患者體內(nèi)產(chǎn)生的PAI-1與血液循環(huán)或者細胞間質(zhì)相融合，其中很多都在血小板顆粒中存儲。PAI-1的主要作用在于通過結(jié)合纖溶酶原激活物，使其及時失活，降低纖維蛋白降解導(dǎo)致聚集纖維蛋白的概率，存在抗纖溶性，對人體中凝血系統(tǒng)和纖溶系統(tǒng)的動態(tài)平衡進行有效調(diào)節(jié)，在膿毒癥、SIRS發(fā)生發(fā)展中，凝血、纖溶系統(tǒng)紊亂發(fā)揮著重要作用。很多研究表明[2]，膿毒癥患者機體中的PAI-1活性、水平和患者預(yù)后關(guān)系極為密切，PAI-1基因啟動子區(qū)多愛性采用轉(zhuǎn)換PAI-1轉(zhuǎn)錄速率的方式，對PAI-1活性產(chǎn)生影響。TLR4是人體細胞表面的Toll樣蛋白，是LPS主要受體。LR4啟動細菌及其產(chǎn)物對免疫細胞的跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。

此外，PAI-1基因啟動子區(qū)由于缺少單核苷酸而引發(fā)的4G/5G多態(tài)性，而且4G/5G多態(tài)性會導(dǎo)致PAI-1基因表達水平與轉(zhuǎn)錄速率的改變，對PAI-1活性產(chǎn)生影響。但是，最近相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)[3]，PAI-l基因多態(tài)性與膿毒癥疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后無關(guān)。所以，PAI-l基因多態(tài)性與膿毒癥易感性及預(yù)后的關(guān)系值得進一步研究。本研究結(jié)果顯示，MODS組患者中，4G/5G多態(tài)性與膿毒癥轉(zhuǎn)歸和易感性呈正相關(guān)性，且兩者具有明顯差異性，P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

綜上所述，PAI-14G/5G多態(tài)性和膿毒癥呈正相關(guān)性，PAI-1與TLR4基因多態(tài)性和膿毒癥發(fā)生發(fā)展中存在相關(guān)性。依照PAI-14G/5G變化提示，有助于做好膿毒癥預(yù)后工作，值得臨床應(yīng)用與推廣。

參考文獻

[1] 倪俊學(xué)，王亞軍，李平，付紅敏，馬燕，萬健.膿毒癥患兒血漿膽固醇、白細胞介素-6水平變化與病情危重度的關(guān)系[J].實用兒科臨床雜志，2012，07（18）：41-42.

[2] 饒小平，朱綠綺.動態(tài)監(jiān)測血乳酸對評估小兒膿毒癥的臨床意義[J].南昌大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2011，14（12）：76-77.

[3] Kumpf O，Giamarellos-Bourboulis EJ， Koch A， et al. Influence of genetic variations in TLR4 and TIRAP/Mal on the course of sepsis and pneumonia and cytokine release： an observational study in three cohorts.Crit Care，2010，14（3）：1-10.