手工微柱凝膠免疫檢驗法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的價值初探

摘要：目的：探索手工微柱凝膠免疫檢驗法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的價值。方法：收集本院2013年3月～2014年3月不同科室、病種、性別的患者的血液樣本700例，均一分為二，成為1400例血液樣本，分別用手工微柱凝膠法和試管法進(jìn)行ABO、RhD血型抗原鑒定，比較反應(yīng)結(jié)果及反應(yīng)強度。結(jié)果：手工微柱凝膠法和試管法相比，檢測結(jié)果準(zhǔn)確性上無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），反應(yīng)強度上手工微柱凝膠法明顯優(yōu)于試管法。結(jié)論：手工微柱凝膠法用于檢測ABO、RhD血型抗原鑒定，較傳統(tǒng)的試管法有一定優(yōu)勢，值得臨床推廣。

關(guān)鍵詞：微柱凝膠法；試管法；血型鑒定

【中圖分類號】R457.1+1 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1672-8602（2015）01-0070-01

為保證臨床輸血的安全性，需要進(jìn)行ABO和RhD血型鑒定試驗。檢測結(jié)果準(zhǔn)確與否，直接關(guān)系到受血者的生命安全。目前臨床上較傳統(tǒng)的檢測方法是試管法，此法結(jié)果準(zhǔn)確，但也存在操作難以規(guī)范、結(jié)果不易長期保存等缺點[1]。1994年，美國食藥監(jiān)局（FDA）批準(zhǔn)微柱凝膠試驗（MGT）作為紅細(xì)胞抗體檢測及ABO和RhD血型鑒定的選用方法[2]，目前已在國外大量應(yīng)用。而在國內(nèi)，微柱凝膠法也逐漸被各大醫(yī)院和血站使用，其優(yōu)點是易于自動化、標(biāo)準(zhǔn)化，反應(yīng)結(jié)果保存時間長。現(xiàn)將我院收集到的血液樣本分別進(jìn)行微柱凝膠法和試管法檢測，比較其優(yōu)劣。

1 資料和方法

1.1 樣本

收集2013年3月～2014年3月間各臨床科室送到檢驗科的血液樣本700例，均一分為二，成為1400例血液樣本，分為A、B兩組，做好標(biāo)記，樣本間無病種、性別差異。

1.2 試劑和儀器

A、B單克隆標(biāo)準(zhǔn)血清：購于南京華欣藥業(yè)生物工程有限公司；抗D單克隆抗血清：來源于加拿大進(jìn)口分包裝；微柱凝膠免疫檢測卡：購于長春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司；BYL03—Ⅰ型血型血清多用離心機：購于長春博彥科學(xué)儀器有限責(zé)任公司。檢測試劑均在有效期內(nèi)并嚴(yán)格按照試劑及儀器說明書操作。

1.3 方法

A組：首先觀察微柱凝膠卡外觀，若有干膠、雜質(zhì)、氣泡則不可使用，檢查無誤后，將卡平衡至室溫（18-25℃），再用卡式離心機1000r/min離心3min；然后制備紅細(xì)胞懸液，取樣本血液2ml，用EDTA抗凝，在室溫下2000rpm離心2min，分離血漿，取10μl紅細(xì)胞，用生理鹽水配成0.8%的紅細(xì)胞懸液；接著斯開微柱凝膠卡上端的錫箔紙，在A、B、RhD孔中分別加入紅細(xì)胞懸液50μl，卡放到卡式離心機中離心5min，之后觀察記錄結(jié)果。

B組：按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[3]操作。

1.4 結(jié)果判定

A組：陽性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集，產(chǎn)生的復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中；陰性結(jié)果：紅細(xì)胞沒有與相應(yīng)抗體發(fā)生反應(yīng)，沉在微柱凝膠的尖底部；反應(yīng)強度：紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體產(chǎn)生的復(fù)合物位于凝膠表面為強陽性，位于膠中為弱陽性。

B組：陽性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原與抗體凝集；陰性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原與抗體未發(fā)生反應(yīng)。反應(yīng)強度：紅細(xì)胞抗原與抗體凝集出一個大塊或多個較大塊復(fù)合物為強陽性，出現(xiàn)無數(shù)小塊或細(xì)小顆粒凝集為弱陽性，不出現(xiàn)凝集為陰性。

強陽率=強陽性數(shù)/（強陽性數(shù)+弱陽性數(shù)）×100%

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS17.0軟件處理實驗數(shù)據(jù)，計量資料使用x±s表示，采用t檢驗；計數(shù)資料使用χ2檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血液樣本ABO血型鑒定結(jié)果比較

1400例血液樣本中，共有5例出現(xiàn)誤判，其中微柱凝膠法組出現(xiàn)1例，原因是樣本紅細(xì)胞破碎，出現(xiàn)假陽性，將B型錯誤鑒定為AB型，之后經(jīng)過重新采血鑒定結(jié)果和試管法相符合；試管法組出現(xiàn)4例錯誤，原因是患者A抗原低，出現(xiàn)假陰性，其中2例將A型誤判為O型，另外2例將AB型誤判為B型。兩組間鑒定結(jié)果的符合率為100%，無顯著性差異（P>0.05），詳見表1。

2.2 兩組血液樣本ABO血型鑒定反應(yīng)強度結(jié)果比較

試驗結(jié)果顯示，微柱凝膠組700例血液樣本中出現(xiàn)1例假陽性，其余699例中強陽性430例，陰性269例，強陽率為100%；試管法組700例血液樣本中，除去假陰性4例，則出現(xiàn)強陽性335例，弱陽性90例，陰性271例，強陽率為78.8%。兩組相比，微柱凝膠法的反應(yīng)強度明顯優(yōu)于試管法，組間有顯著性差異（P<0.05）。詳見表2。

2.3 兩組血液樣本抗D結(jié)果比較

試驗結(jié)果顯示，微柱凝膠法組檢測出抗D強陽性699例，陰性1例，強陽率100%，而試管法組強陽性612例，弱陽性87例，陰性1例，強陽率87.5%，兩者相比符合率沒有顯著差異，但微柱凝膠法的反應(yīng)強度較試管法組有顯著優(yōu)勢（P>0.05），詳見表3。

3 討論

血型在臨床上有重要意義，輸血前，必須對血型進(jìn)行檢驗，并要進(jìn)行交叉配血試驗。Rh血型是僅次于ABO血型的重要血型系統(tǒng)，受到廣大醫(yī)務(wù)工作者重視，是現(xiàn)在血型檢測的必檢項目，據(jù)相關(guān)研究顯示，Rh系統(tǒng)中最重要的是D抗原，其抗原性最強，是導(dǎo)致新生兒溶血的常見因素。

傳統(tǒng)的測定ABO及RhD血型的方法是試管法，該法測定的準(zhǔn)確性高，是血型測定的金標(biāo)準(zhǔn)，但是操作難以規(guī)范化、自動化，敏感性差，結(jié)果不易保存。

隨著醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)的發(fā)展，微柱凝膠技術(shù)被廣泛用于輸血領(lǐng)域，主要有血型鑒定、抗體篩查、交叉配血、IgG抗A、IgG抗B滴度檢測等，其核心為凝膠分子篩，即板卡微柱中充滿特制的凝膠介質(zhì)，當(dāng)紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集后，被凝膠上層阻隔，不能通過凝膠篩孔，而未發(fā)生凝集現(xiàn)象的紅細(xì)胞，可順利到達(dá)凝膠底部聚集，從而通過肉眼觀察即可判斷檢驗結(jié)果。微柱凝膠卡從左往右第一至三孔依次含有抗A、抗B、抗D抗體，用來正定型鑒定血型，第四孔用來空白對照，第五、六孔用于反定型鑒定血型。微柱凝膠法易于操作，所需樣本量少于試管法五倍，尤其適用于新生兒、大面積燒傷等不易抽血的患者；反應(yīng)強度高，結(jié)果易于觀察，并可以拍照長期保存圖譜[4]，但是若血液樣本中的紅細(xì)胞破碎或被污染，則會引起假陽性；若紅細(xì)胞濃度過高或離心不徹底，則可能引起假陰性或假陽性[5]。

本文分別用手工微柱凝膠法和傳統(tǒng)試管法進(jìn)行ABO和RhD血型的鑒定，結(jié)果顯示，兩種方法在測定的準(zhǔn)確性上沒有差異，均準(zhǔn)確可信，而反應(yīng)強度上，手工微柱凝膠法明顯優(yōu)于試管法，尤其在進(jìn)行RhD血型時，手工微柱凝膠法比試管法更適合。但是手工微柱凝膠法對血液樣本要求更高，需要檢驗人員嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，同時保證微柱凝膠卡的質(zhì)量[6]。隨著檢驗醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，相信手工微柱凝膠法測定ABO血型和RhD血型一定會被廣泛應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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[5] 王小平.微柱凝膠法應(yīng)用于血型鑒定[J].廣州醫(yī)藥，2007，19（2）：60-61.

[6] 楊惠元，鄔靜雯，宋娟.微柱凝膠法血型鑒定的臨床價值[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013，34：96～97.