乙型肝炎病毒核心抗原檢測的臨床評價

摘要：目的：探討乙型肝炎病毒核心抗原檢測方法及臨床應用。方法：收集34例門診及住院病例。結果34例血清標本HBsAg陽性21例（61.76%），HBsAg陰性13例（38.24%）。結論：為了有效預防乙型肝炎的傳播，有必要對HBcAg進行檢測，對了解病毒感染過程及病毒復制具有重要意義。

關鍵詞：乙型肝炎；HBcAg；檢測

【中圖分類號】R512.6+2 【文獻標識碼】A 【文章編號】1672-8602（2015）01-0131-01

0 引言

乙型病毒性肝炎是由HBV感染機體所引發的疾病。急、慢性乙型肝炎患者和乙肝病毒攜帶者是傳染源。傳染途徑主要有血液傳播、母嬰傳播、體液傳播。潛伏期為28～180 d。

1 資料與方法

1.1 標本收集

標本來源于本院34門診及住院患者。采集新鮮無抗凝或肝素鈉抗凝動脈血或靜脈血2～3ml，離心（1500～3000r/min）分離血清。

1.2 試劑

包被板96孔/塊，直接使用，室溫平衡后，按所需人份取板條量；濃縮洗滌液20ml/瓶，用前以新鮮蒸餾水或去離子水稀釋25倍后備用，若有結晶，應置室溫溶解后再稀釋備用；陽性對照血清、陰性對照血清各0.5ml/瓶，酶結合物6ml/瓶，底物A液、底物8液、終止液各6ml/瓶，均直接使用，用前必須恢復至室溫并完全搖勻，用后保存于2～8℃。

1.3 儀器

LD5-108型離心機；2510變頻振蕩器；恒溫水浴箱；EGATE-2310洗板機；MK3酶標儀；BEPⅢ全自動酶聯免疫分析儀。

1.4 檢驗方法

ELISA法檢測抗-HBc。設空白對照1孔，僅加lOOul洗滌液；設陰、陽性對照各2孔，質控l孔，分別加入50μl陰、陽性對照物、質控血清。樣品孔各加入50μl血清[1]。

1.5 結果判斷

臨界值（Cut-off）=陰性對照OD值×0.5。

采用S/C0值法判定結果，當S/C0值≤l為陽性，S/C0值>1為陰性（S為樣品OD值，C0為Cut-off值）。

2 結果

34例血清標本HBsAg陽性21例（61.76%），HBsAg陰性13例（38.24%）。

①HBsAg與抗-HBs：感染HBV后最早1～2周HBsAg可陽性，是HBV存在的間接指標；抗-HBs出現于HBsAg轉陰后，是一種保護性抗體。

②HBcAg與抗-HBc：HBcAg主要存在于受感染的肝細胞核內；血清抗-HBc可分兩種：IgM型和IgG型，前者出現較早，是近期感染的標志；后者出現較遲，可存在多年。低滴度抗-HBc是過去感染的標志，高滴度時提示HBV有活動性復制。

③HBeAg與抗-HBe：HBeAg一般僅見于HBsAG陽性血清，與DNAP和HBV-DNA密切相關，是HBV活動性復制和有傳染性的標志。前C區基因發生突變時，HBeAg可為陰性而HBV仍在活動復制。

③血清HBV-DNA測定：是HBV復制和傳染的直接標志。

3 討論

急性乙型肝炎與慢性乙肝肝炎的鑒別最主要是肝活檢病理組織檢查，但臨床上往往較難做到，不過有些現象可以提示為急性乙肝，如患者入院時癥狀較重，肝功能異常也較明顯，但HBV-DNA呈低載量或陰性，或者經治療后HBeAG甚至HBsAG很快轉陰者，多為急性乙肝。血清HBV陽性者不能獻血，嚴格篩查血液制品，防止經輸血及血制品傳播。加強宣傳教育，嚴格消毒醫療器械，杜絕共用未經消毒的刀具及注射器，防止多個性伴侶、同性戀等體液傳播。對無免疫人群尤其嬰幼兒等易感人群普遍進行乙肝疫苗接種，每次注射l0～20μg，按0、1、6個月方案接種3次，保護性抗體產生率達85%～95%。對于意外暴露的高危人群，如被HBV污染的針頭誤刺傷等可立即注射乙肝疫免球蛋白100～200 IU。對HBsAG及HBeAG陽性母親的新生兒，出生24 h內注射乙肝免疫球蛋白，隨后接種乙肝疫苗[2]。

HBsAg檢測采用競爭抑制法。用純化的基因工程重組乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）包被微孔反應板，血清標本中抗-HBc與酶標記的抗HBc共同競爭包被的HBcAg，通過溫育、洗滌分離未與HBcAg形成免疫復合物的酶標記抗-HBc，以四甲基聯苯胺（TMB）為底物顯色，判斷陰陽性。該項目運用酶免疫競爭抑制法，在原理上存在缺陷，故實驗中會引起檢測的靈敏度降低。

IgM型核心抗體為HBV感染早期產生的抗體，在HBeAG出現l～2周后開始升高，陽性提示乙型肝炎急性期，通常持續3～6個月，在恢復后期減弱或消失。

IgG型核心抗體繼IgM抗體之后出現，見于急性后期、慢性期、恢復期或既往感染，可持續數十年乃至終身。在急性肝炎恢復過程中，在表面抗體出現之前的數周或數月，HBsAG消退和Anti-HBs升高，二者均在方法學檢出水平以下，僅有核心抗體陽性時，稱為隱性HBV感染窗口期，提示疾病向恢復期演變。臨床意義可與e抗原陽性意義相疊加。

HBcAb檢測時需注意以下事項。

試劑盒應在2～8℃保存，使用前試劑各組分應平衡至室溫再開封啟用；開啟后應盡快用完，未用完的微孔板及時以自封袋封存。嚴格按照說明書操作，不同批號試劑組分請勿混用。使用前試劑應混勻。洗滌時各孔需注滿，防止孔口內有游離酶未能洗凈。試劑盒成分視為有傳染性物質，需按傳染病實驗室檢查規程操作。本實驗過程不能有污染，否則會影響實驗結果判斷。

綜上，HBcAb由HBcAg誘導產生，屬非中和抗體，為HBV現正感染或既往感染的標志，用于病期判斷和疾病流行病學研究。為了有效預防乙型肝炎的傳播，有必要對HBcAg進行檢測，對了解病毒感染過程及病毒復制具有重要意義[3]。

參考文獻

[1] 王彧 . 酶聯免疫法檢測乙型肝炎病毒PreS1抗原及抗體在乙型肝炎診斷中的應用 [J ].現代醫藥衛生 ，2014，13： 2002-2003.

[2] 莫蘭祥 . 450例已婚育齡人口乙型肝炎病毒感染血清學檢測調查分析 [J ].現代養生B ，2014，01： 121-121.

[3] 王穎 .乙型肝炎病毒前對S2抗原、核心抗體IgM及其五項指標聯合檢測的意義 [J ].醫藥與保健 ，2014，08： 139-139.