腫瘤壞死因子-308G/A多態性與慢性乙型肝炎的相關性分析

曾莉蓉，魏新素(恩施土家族苗族自治州民族醫院，湖北恩施445099；新疆生產建設兵團第一師醫院)

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腫瘤壞死因子-308G/A多態性與慢性乙型肝炎的相關性分析

曾莉蓉1，魏新素2(1恩施土家族苗族自治州民族醫院，湖北恩施445099；2新疆生產建設兵團第一師醫院)

摘要：目的探討中國人群腫瘤壞死因子-α(TNF-α)啟動子區域-308G/A多態性與慢性乙型肝炎(CHB)發生的關系。方法 以腫瘤壞死因子、多態性、乙型肝炎、慢性乙型感染等為主題詞，計算機檢索檢索萬方、維普、中國知網、VIP、MEDILINE、Cochrance Library、Spinger、Embase等數據庫，時間自建庫以來至2013年3月15日，收集中國人群TNF-α啟動區-308G/A位點多態性與CHB相關的病例對照研究。評價納入研究文獻的質量后提取有效數據，采用RevMan軟件進行Meta分析，采用Statas 10軟件進行漏斗圖和Egger′s檢驗。結果 共納入研究6項，CHB組632例，健康對照組443例。Meta分析結果顯示具有G等位基因的人群CHB危險與具有A等位基因的人群相比有顯著差異(OR=1.54,95%CI為1.18～2.01，P=0.001)。基因型GG與(GA+AA)無顯著性差異(OR=1.72，95%CI為0.80～3.67，P=0.16)。結論 TNF-α啟動子區域-308G/A多態性與CHB發生存在相關性，TNF-α啟動子-308位點A等位基因可以保護健康者不受HBV感染。

關鍵詞：病毒感染；乙型肝炎；腫瘤壞死因子；Meta分析

腫瘤壞死因子(TNF)由巨噬細胞、單核細胞、中性粒細胞、T細胞和NK細胞刺激后產生。同時TNF可刺激細胞因子的分泌，增加黏附分子的表達，刺激中性粒細胞，具有介導多向性炎癥反應、調節免疫等生物學作用[1]。TNF-α位于人類主要組織相容性復合體III類基因區，研究[2]發現，TNF-α基因啟動子區某些位點的單個核苷酸多態性可從轉錄水平影響TNF的產生。關于TNF-α位點SNP與慢性乙型肝炎(CHB)易感性方面是研究的熱點，但TNF-α基因的SNP在不同種族、不同地區間分布差異較大，研究的結果不一致甚至相反。本研究對中國人群TNF-α啟動子區域-308位點G/A多態性與CHB的病例對照研究進行Meta分析，評價我國人群中TNF-α基因遺傳突變與CHB易感性是否相關，為今后的研究提供參考。

1資料與方法

1.1文獻檢索方法以腫瘤壞死因子、多態性、乙型肝炎、慢性乙型感染等為主題詞，計算機檢索萬方數據庫、維普、中國知網全文數據庫(CNKI)、VIP、中國重要會議論文全文數據庫和中國學位論文全文數據庫。以tumor necrosis factor/TNF, polymorphism, HBV/chronic hepatitis B為主題詞，檢索MEDILINE、Cochrance Library、Spinger、Embase等英文數據庫以中國人群為研究對象的文獻。收集國內外公開發表的關于人群腫瘤壞死因子-308G/A基因多態性與慢性乙型肝炎關系的文獻。對納入文獻中的參考文獻進行手工檢索，檢索時間從建庫至2013年3月。由兩名研究者采用統一的數據提取表，對納入的文獻進行文獻篩選和資料提取，在數據提取中如有不一致的情況，與第三位研究者一起參照原文討論后協助解決。而后交叉核對，必要時聯系原文獻作者，確定實驗的具體實施過程。

1.2納入與排除標準收集有關中國人群TNF-α-308G/A多態性與CHB關系的病例對照研究資料，以CHB為研究病例，以正常健康人為對照(control)，通過分子生物學方法檢測TNF-α-308G/A位點基因型的分布和等位基因頻率，分析TNF-α-308G/A多態性與CHB的關系的文獻。納入標準：①公開發表的TNF-α基因-308位點G/A多態性與中國人群慢性乙型肝炎相關性的病例-對照研究。語種限于中/英文。②研究對象為中國人，包括港澳臺地區，民族不限。③ 研究數據齊全，有基因型在病例組和對照組分布頻數，研究方法相似，統計方法應用恰當，數據質量可靠。④獨立的研究，同一組資料重復報道者，取資料最完整、樣本量較大的文獻。⑤對照組基因型分布符合遺傳平衡定律(Hrdy-Weinberg, H-W-E)。排除標準：①研究內容不包括TNF-α-308G/A位點的研究。②統計方法不當，數量少、質量差、未提供充足原始數據的文獻。③其他不符合Cohrance系統評價標準的文獻。

1.3數據提取由兩名研究者采用統一的數據提取表，對納入的文獻進行文獻篩選和資料提取，在數據提取中如有不一致的情況，與第三位研究者一起參照原文討論后協助解決。而后交叉核對，必要時聯系原文獻作者，確定實驗的具體實施過程。

1.4統計學方法采用RevMan5.0軟件進行Meta分析。對基因型分布行H-W-E遺傳平衡檢驗。使用χ2檢驗對研究的結果進行異質性檢驗，根據異質性檢驗結果，若研究間無統計學異質性采用固定效應模型(Peto Mntel-Haenszel，M-H)進行合并分析；反之，則采用校正后的(Dersimonian-Laird，D-L)隨機效應模型進行數據分析。計算OR值及95%CI，采用雙側檢驗。采用 Stata10.1軟件進行發表偏倚檢測。P≤0.05為差異具有統計學意義。

2結果

2.1納入研究的基線特征通過中英文數據庫檢索到文獻36篇，排除綜述、研究位點不包括-308、研究對象不符、中英文重復發表及數據不全的文獻，篩選出7篇符合標準的文獻。經遺傳平衡檢驗，1篇文獻研究對象不符合H-W-E分布，最終納入6篇研究文獻[3～8]。CHB的診斷標準依據中以2005年 5月中華醫學會肝病學分會、中華醫學會感染病學分會關于慢性乙型肝炎防治指南標準執行的有1篇，以2000年中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯合修訂的病毒性肝炎診斷標準4篇，以第5次全國傳染病與寄生蟲病學術會討論修訂的“病毒性肝炎防治方案”試行標準1篇。以體檢者乙肝標記物均陰性為對照組2篇[3, 8]，以健康者或體檢者乙肝標記物未說明的文獻3篇[4,5,7]，體檢者乙肝標記物HBsAb(+)、HBcAb(+)或HBcAb(+)為健康對照組的文獻1篇。3篇文獻基因多態性的檢測方法采用限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)、2篇文獻采用序列特異性引物PCR(PCR-SSP或AS-PCR)，1篇文獻采用斑點雜交。納入的6組病例對照研究中累積CHB病例632例，對照組443例。

2.2Meta分析結果各研究結果之間無顯著異質性(χ2=10.14，P=0.07)，故采用固定效應模型分析。以G等位基因為非暴露因素，A等位基因為暴露因素，Meta分析結果顯示，具有G等位基因的人群慢性乙型肝炎的危險與具有A等位基因的人群相比有差異(OR=1.54，95%CI為1.18～2.01，P=0.001)，AA純合子基因型發現較少，故將(GA+AA)合并，異質性檢驗結果表明，各研究結果之間有顯著異質性(χ2=18.97，P=0.002)，故采用隨機效應模型進行分析。基因型GG與GA+AA(OR=1.72，95%CI為0.80～3.67，P=0.16)無顯著性差異。

2.3發表偏倚評價和敏感性分析以各合并OR值除以標準誤，與標準誤倒數(精確度)做Egger′s回歸分析，結果等位基因G與A、基因型GG 與GA+AA間無顯著性差異(P>0.05)，但漏斗圖顯示為非對稱的，說明各個研究結果之間有發表偏倚。采用逐一排除法對各個研究進行敏感性分析，排除1篇文獻[7]后，消除發表偏倚。合并的OR未見明顯改變，說明此次Meta分析結果較可靠。

3討論

人的TNF-α基因位于染色體 6p21.3，屬于TNF超家族，能編碼多種功能的促炎細胞因子，主要由巨噬細胞分泌，參與調節機體的多種生物學過程，如細胞增殖、分化、凋亡、脂質代謝等。TNF-α表達水平除與機體本身免疫系統的活化水平有關外，其啟動子區基因多態性也可能影響轉錄活性而使表達水平出現差異[2]。研究[9, 10]表明，TNF-α-308位點G/A的多態性與多種疾病有關。

TNF-α的多態性與HBV感染一直是近年來研究的熱點。本研究共納入6個病例對照研究，累積CHB病例 632例，對照組 443例。此次Meta分析結果表明，TNF-α-308位點G/A多態性與CHB感染明顯相關。

關于TNF-α-308位點G/A多態性與CHB易感相關性的研究，國外內學者得出的結論不盡相同[11, 12]。產生差異的原因可能是多方面的：種族人群之間疾病的異質性、樣本量的大小、研究對象的選擇和遺傳模型、年齡性別構成、設計方案、是否具有HBV感染家族史等。納入文獻的研究方法上，均采用了合適的分子生物學方法對基因型進行分析，但個體研究存在差異性，采用PCR-RFLP的大部分個體研究中也存在是否對產物進行測序進行驗證的差異。在對Meta分析的總體結果進行分析時，這些混雜因素也是需要考慮的。從本研究納入文獻分析結果看，未發現明顯可以分層分析的因素，且納入研究不多，所以未進一步進行亞組分析。本研究在文獻收集、整理和分析過程中制定并實施了嚴格的標準，Egger′s回歸分析提示不存在一定的發表偏倚，可漏斗圖顯示不對稱性，采用逐一排除法進行敏感性分析，結果顯示不影響本研究所得出的結論。

目前TNF-α的多態性與HBV感染的Meta分析研究較多。如Zheng等[13]對健康者(包括自發性清除)和CHB進行Meta分析發現，-308A等位基因是CHB感染的保護因素，特別是內蒙古人。Xia等[14]將研究對象限定為CHB和自發性清除者，對其進行Meta分析，發現TNF-α-308A具有抗病毒機制。我們將研究對象限定為中國人群CHB和健康體檢者，雖然研究樣本量小，但具有更高的特異性，會使結果更可靠。結果發現TNF-α-308位點A可以保護健康者不受HBV 感染。TNF-α-308A等位基因對病毒的清除功能很可能和提高TNF-α轉錄激活和產生有關。

總之，本研究通過對中國人群TNF-α-308位點與CHB易感性進行Meta分析，結果表明TNF-α-308位點多態性與CHB易感性明顯相關。由于納入研究的例數有限，結果尚需在中國人群中進行嚴格設計、最大程度控制混雜因素、大樣本、同質性的病例對照或前瞻性研究加以驗證，同時也要充分考慮基因與基因、基因與環境等相互作用的影響，以便更好地闡明TNF-α多態性與CHB的關系。

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(收稿日期：2014-09-11)

中圖分類號：R512.62

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)03-0055-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.03.021