增液潤燥湯對干燥綜合征模型小鼠頜下腺IL-17表達的影響*

李紀高，李增變，靳東亮，周 全

(1.河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州450000； 2.鄭州市中醫(yī)院，河南 鄭州 450007； 3.新鄭市中醫(yī)院，河南 新鄭 451100)

·實驗研究·

增液潤燥湯對干燥綜合征模型小鼠頜下腺IL-17表達的影響*

李紀高1，李增變2，靳東亮3，周 全1

(1.河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州450000； 2.鄭州市中醫(yī)院，河南 鄭州 450007； 3.新鄭市中醫(yī)院，河南 新鄭 451100)

目的：觀察增液潤燥湯對干燥綜合征模型小鼠頜下腺IL-17表達的影響，探討該方治療干燥綜合征的作用機制。方法：采用弗氏完全佐劑及同種鼠頜下腺抗原聯(lián)合誘導干燥綜合征小鼠模型。以增液潤燥湯灌胃治療，并以白芍總苷膠囊灌胃作為對照。ELISA法檢測各組小鼠頜下腺IL-17的表達。結果：與正常對照組對比，模型對照組、白芍總苷組和增液潤燥湯低、中劑量組頜下腺IL-17表達升高，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，增液潤燥湯高劑量組頜下腺IL-17較之差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與模型對照組對比，增液潤燥湯低、中、高劑量組與白芍總苷組頜下腺IL-17表達降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與白芍總苷組對比，增液潤燥湯低、中劑量組頜下腺IL-17表達無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，增液潤燥湯高劑量組頜下腺IL-17表達較之差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論：增液潤燥湯能夠下調干燥綜合征模型小鼠頜下腺IL-17，此是其治療干燥綜合征的作用機制之一。

干燥綜合征;白介素-17;增液潤燥湯；藥效學；動物模型；小鼠

干燥綜合征(Sjogren'ssyndrome,SS)是一種以侵犯唾液腺和淚腺等外分泌腺為主的慢性炎癥性自身免疫病[1]，以明顯的口眼干燥為特征，可造成全身多臟器損害。增液潤燥湯基于中醫(yī)津液的代謝理論組方，治療干燥綜合征有較好的臨床療效。本課題觀察了增液潤燥湯對干燥綜合征模型小鼠頜下腺IL-17的影響，以探索本方治療SS的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動 物

SPF級BALb/c品系小鼠60只，雌性，體質量18～20g，購自河南省實驗動物中心，許可證號：SCXK(豫)2010-0002。

1.2 藥品、試劑與儀器

增液潤燥湯由北沙參15g、天冬15g、炙紫菀10g、知母10g、烏梅10g、桔梗15g、桃仁10g、制附子6g、炙甘草6g組成。藥物均用顆粒劑，由四川新綠色藥業(yè)有限公司生產，購自河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院。白芍總苷膠囊，寧波立華制藥有限公司產品，批號110512；百白破疫苗，武漢生物制品研究所有限責任公司產品，批號20130815-4。TU-1901紫外線可見分光光度計，北京普析新通用儀器有限責任公司產品；冷凍離心機，美國Kendro實驗室產品公司產品；T10BS25型組織勻漿機，德國IKA公司產品。

1.3 模型的建立與分組

①抗原的制備：取出同種鼠的頜下腺，剔除淋巴結，放入PBS緩沖液中，充分勻漿，10 000～14000g轉速、4 ℃條件下勻速離心5min，取上清液，采用5722分光光度計按考馬斯亮藍比色法測定蛋白抗原含量，將蛋白與弗氏完全佐劑乳化，最終得到質量分數(shù)為400mg/L的抗原溶液。②抗原的注射：SPF級BALb/c品系小鼠60只，隨機分成正常對照組、模型對照組、白芍總苷組和增液潤燥湯低、中、高劑量組，每組10只。第0，14天，除正常對照組外，每只小鼠兩側腹股溝皮下注射抗原溶液， 每側腹股溝50μL，即每只小鼠注射0.1mL抗原；首次免疫后第2，7天，除正常對照組外，每只小鼠各腹腔注射0.05mL白百破聯(lián)合疫苗。

1.4 給藥方法

自造模第1天開始，正常對照組、模型對照組給予蒸餾水(20μL/g)灌胃，白芍總苷組給予白芍總苷(234μg/g)灌胃，增液潤燥湯低、中、高劑量組依次給予增液潤燥湯4,8,12mg/g灌胃，1d1次，直至第60天。

1.5 檢測指標

第61天摘眼球法處死小鼠，進行相關處理。將凍存于-70 ℃的小鼠頜下腺組織取出,加入預冷的生理鹽水,在冰浴中勻漿,離心,取上清液,測定頜下腺IL-17。操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.6 統(tǒng)計學方法

2 結 果

與正常對照組對比，模型對照組、白芍總苷組和增液潤燥湯低、中劑量組小鼠頜下腺IL-17表達升高，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，增液潤燥湯高劑量組頜下腺IL-17較之差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與模型對照組對比，增液潤燥湯低、中、高劑量組與白芍總苷組頜下腺IL-17表達降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與白芍總苷組對比，增液潤燥湯低、中劑量組頜下腺IL-17表達無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，增液潤燥湯高劑量組頜下腺IL-17表達較之差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組小鼠頜下腺IL-17表達對比

注：與正常對照組對比，* P>0.05，** P<0.05；與模型對照組對比，## P<0.05；與白芍總苷組對比，△ P>0.05，△△ P<0.05。

3 討 論

《素問·陰陽應象大論》中 “燥盛則干”的理論與干燥綜合征口干、眼干的臨床表現(xiàn)相吻合，多數(shù)醫(yī)家將干燥綜合征歸屬于中醫(yī)“燥證”范疇。《素問玄機原病式·燥》“諸澀枯涸，干勁皴揭，皆屬于燥”的病機，說明干燥癥狀的出現(xiàn)，總在于津液的失衡失潤，或由津液的虧損耗奪，或由津液敷布受阻，最終津液代謝失調而致。《素問·經脈別論》提出了津液的代謝過程，“飲入于胃，游溢精氣，上輸于脾，脾氣散精，上歸于肺，通調水道，下輸膀胱，水精四布，五經并行。”說明津液的代謝過程與脾胃肺腎經脈相關。另外，若瘀血痹阻經脈，影響津液的輸布，致津液相對不足，使局部組織缺乏津液潤澤，也可出現(xiàn)干燥癥狀。在現(xiàn)代醫(yī)學中，浸潤SS患者淚腺和唾液腺的T淋巴細胞一直是研究的熱點。目前對SS發(fā)病機制的研究多圍繞T淋巴細胞產生的炎性因子進行。大量的臨床研究及動物實驗表明：SS的發(fā)病與IL-17表達顯著增高有關，SS患者血清IL-17水平明顯高于對照組[2]。鑒于此，治療該病時，針對IL-17的治療方案在阻止腺體損害方面可能有效。

增液潤燥湯以養(yǎng)陰生津為主，輔以宣肺、清胃、健脾、溫腎、活血等治法。方中北沙參、知母養(yǎng)肺之陰，益胃生津；天冬入肺、腎經，清肺潤燥，滋腎陰；紫菀、桔梗入肺經，長于開肺郁，宣肺氣；桃仁活血化瘀，疏通津液運行之通道；烏梅酸甘化陰，生津止渴；制附子溫腎陽，以助氣化；炙甘草調和諸藥。諸藥合用，津液生化有源，輸布正常，故能取得很好的療效。

本實驗結果顯示：高劑量增液潤燥湯能明顯抑制頜下腺IL-17的表達，且作用優(yōu)于低、中劑量及白芍總苷膠囊。提示：增液潤燥湯可能通過下調頜下腺IL-17表達來發(fā)揮抗炎作用，此可能是其治療干燥綜合征的作用機制之一。

[1]張繆佳.風濕性疾病診斷流程與治療策略[M].1版.北京:科學出版社,2007:163.

[2]朱建東,王忠全,張品南.干燥綜合征患者Th17與調節(jié)性T細胞免疫失衡的觀察[J].放射免疫學雜志,2012,25(3):301-303.

(編輯 陶 珠)

《中醫(yī)研究》雜志摘要的寫法及注意點

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1001-6910(2015)02-0058-02

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B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.02.28

周全，副主任醫(yī)師，doctorzq@sina.com

河南省基礎與前沿技術研究計劃項目(132300410077)

2014-09-25；

2014-11-24