PCV2Rep蛋白N－糖基化位點突變對病毒復制的影響

徐勝男，時建立，彭 喆，徐紹建，吳曉燕，叢曉燕，杜以軍，吳家強，李 ?。?，王金寶＊

（1.青島農業大學動物科技學院，山東青島266109；2.山東省畜禽疫病防治與繁育重點實驗室，山東濟南250100；3.山東省農業科學院畜牧獸醫研究所，山東濟南250100）

豬圓環病毒（Porcine circovirus，PCV）是1974年由德國學者Tischer等首次從豬腎傳代細胞（PK15）中分離得到，1982年被命名為豬圓環病毒［1］。豬圓環病毒分為兩個血清型，即PCV1和PCV2。其中，只有PCV2具有致病性，能引起斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（Post weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS），皮炎和腎病綜合征（Porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS），增生性壞死性間質性肺炎（Proliferative and necrotizing pneumonia，PNP）等疾?。?］，給養豬業造成嚴重的經濟損失。目前該病毒已成為國內外研究的熱點，但其致病機制目前尚未完全清楚。

豬圓環病毒2型主要由與病毒復制相關的Rep蛋白，與免疫原性相關的Cap蛋白及ORF3編碼的與細胞凋亡相關的非結構蛋白3種蛋白組成［3］，其中Rep蛋白含有3個N－糖基化位點，即23～25aa（NPS）、256～258aa（NQT）和286～288aa（NAI）［4］。糖基化作為一種主要的翻譯后修飾對蛋白質功能有著重要影響，病毒蛋白的糖基化在病毒的生命周期中起著重要的作用。目前有PCV2Cap蛋白N－糖基化位點突變對PCV2核酸疫苗免疫原性影響的報道［5］，但Rep蛋白N－糖基化位點突變在病毒復制及致病性中的作用如何未見報道。

Fenaux等［6］報道，雙拷貝PCV2DNA克隆的感染性明顯強于單拷貝PCV2DNA克隆，拯救病毒的增殖滴度接近其親本病毒。因此，本研究擬在前期實驗室構建好的單拷貝PCV2感染性克?。?］的基礎上，獲得三個單點突變的雙拷貝PCV2全長感染性克隆。在體外拯救突變病毒的基礎上，進行接種PK－15細胞，研究突變病毒的復制性，以明確Rep蛋白N－糖基化位點突變對病毒復制的影響，為進一步闡明PCV2的復制及致病機制提供參考?！?br>