大豆異黃酮對蛋雞免疫性能的影響

大豆異黃酮（Soy isoflavones，ISO）主要存在于豆科植物中，其中在大豆中含量最高，其主要成分是黃豆苷元、染料木素和大豆黃素。ISO 在動物生產中，對動物生長性能、免疫性能、生殖性能都有一定的影響[1-4]，是一種新型的飼料添加劑。ISO 作為植物雌激素精確地對免疫系統的影響還不是很清楚。先前對染料木素的研究比較多，但是ISO 除了染料木素還包含了許多生物活性物質[5]，鑒于染料木素對動物免疫性能的影響未必能代表大豆中所有復雜成分的作用，因此需要對ISO 進行更多的研究，以便對其調節細胞免疫和體液免疫有更全面的了解。本試驗主要研究大豆異黃酮對蛋雞免疫器官指數、細胞免疫和體液免疫的影響，為深入探討大豆異黃酮對蛋雞免疫性能的作用機制提供依據，且為其作為飼料添加劑在動物生產中應用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料 大豆異黃酮提取物，購自湖南九匯有限公司；海藍褐蛋雞，購自鄭州牧專孵化場；一抗：IgG、IgM，購自北京博奧森生物技術開發有限公司；鼠抗雞PE-CD4+、PE-CD8+、FITC-CD3+單克隆抗體，購自Southern Biotech 公司。

1.2 方法 選取60 只1 日齡健康的蛋雞，隨機平均分為2 組：試驗組（T 組）日糧中添加大豆異黃酮提取物20 mg/kg，對照組（C 組）飼喂基礎日糧，分別于7、14、21、28、35 日齡隨機抽取T 組和C 組蛋雞各5只，稱重后分別心臟采血，把血液分裝于兩支EP 管中，一支抗凝血制備淋巴細胞懸液，用流式細胞術測定其中CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細胞亞群百分率，一支離心分離血清冷凍保存，用間接ELISA 法測定其中IgG、IgM含量。分別取氣管液、腸液、膽汁冷凍保存，用間接ELISA 法測定其中IgG、IgM 含量；分別取胸腺、脾臟、腔上囊稱重，脾臟研磨制成淋巴細胞懸液，用流式細胞術測定其CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細胞亞群百分率。

2 結果

2.1 大豆異黃酮對蛋雞免疫器官指數的影響 與對照組相比，從7～35 日齡，試驗組的腔上囊指數、胸腺指數、脾臟指數均有不同程度的增加，但無統計學差異性。表明大豆異黃酮可以促進免疫器官發育，這對于蛋雞機體免疫功能有積極意義。

2.2 大豆異黃酮對蛋雞細胞免疫的影響 蛋雞添加大豆異黃酮后7～35 d，試驗組外周血、脾臟T 淋巴細胞亞群CD3+、CD4+百分率和CD4+/CD8+的比值高于對照組，差異均不顯著。外周血T 淋巴細胞亞群CD8+百分率的變化除在14 d 高于對照組外，在7、21、28、35 d 比對照組有所下降，但差異不顯著；脾臟T 淋巴細胞亞群CD8+百分率的變化除在7、14、21 d 高于對照組外，在28 d、35 d 比對照組有所下降，但差異不顯著（見表1）。

表1 外周血和脾臟CD3+，CD4+，CD8+T淋巴細胞亞群百分率和CD4+/CD8+比值的測定/% （n=5）

2.3 大豆異黃酮對蛋雞體液免疫的影響 蛋雞日糧中添加大豆異黃酮后7～35 d，氣管液中IgG含量高于對照組，以28 d 差異顯著（P＜0.05）；腸液中IgG 含量明顯高于對照組，14 d、28 d 差異顯著（P＜0.05），血清和膽汁中免疫球蛋白IgG，相對含量高于對照組，但無統計學差異顯著性（見表2）。

蛋雞日糧中添加大豆異黃酮后7～35 d，氣管液中IgM 含量明顯高于對照組，并且在7、14、28、35 d 差異顯著（P＜0.05），腸液和膽汁中IgM 含量明顯高于對照組，都在7 d 差異顯著（P＜0.05）。血清中IgM 相對含量高于對照組，但無統計學差異顯著性（見表2）。

3 討論

一般認為在一定范圍之內，免疫器官重量下降為免疫抑制所致，而免疫器官重量增加則為免疫功能增強的表現[6]，免疫器官重量與指數一定程度上可以反映免疫器官內淋巴細胞與巨噬細胞等免疫活性細胞的數量，可作為輔助性免疫檢測手段，了解體內淋巴細胞總體抗體水平。本試驗結果表明，與對照組相比，從7～35 日齡，試驗組的腔上囊指數、胸腺指數、脾臟指數均有不同程度的增加，但無統計學差異性。表明大豆異黃酮能夠促進免疫器官發育，這對于蛋雞機體免疫功能有積極意義。這與高峰等[7]研究結果是一致的，高峰等研究表明，大豆黃酮顯著提高雛雞免疫器官胸腺和腔上囊的相對質量。

細胞免疫主要是指T 淋巴細胞及淋巴因子介導的免疫應答，其主要效應細胞是T 細胞、自然殺傷性細胞（即NK 細胞）及K 細胞。從7～35 d，試驗組外周血中CD3+、CD4+T 淋巴細胞亞群百分率和CD4+/CD8+的比值高于對照組，差異不顯著；CD8+T 淋巴細胞亞群百分率除在14d 高于對照組外，在7、21、28、35 d 比對照組有所下降，但差異不顯著。從7～35 d，試驗組脾臟CD3+、CD4+T淋巴細胞亞群百分率和CD4+/CD8+的比值高于對照組，差異不顯著；CD8+T 淋巴細胞亞群百分率除在7、14、21 d 高于對照組外，在28 d、35 d 比對照組有所下降，但差異不顯著。本試驗表明，大豆異黃酮調節動物的細胞免疫性能是可行的。但ISO 對免疫是有益的還是有害的可能與動物種類、性別、劑量、年齡以及所要觀察的對象有關。

表2 蛋雞血清、氣管液、腸液、膽汁中IgG和IgM相對含量的測定 （OD at 450 nm）（n=5）

國內外文獻證明，大豆異黃酮有增強哺乳類動物和家禽免疫的作用，但對于禽特異性免疫的影響還缺乏系統的研究。禽局部黏膜是病原入侵的主要門戶，局部黏膜的免疫狀態影響著禽抵抗病原的能力，本試驗對服用大豆異黃酮的蛋雞的局部體液-氣管液、膽汁和腸液的IgM、IgG含量進行動態檢測，為大豆異黃酮的臨床應用及進一步闡明其免疫作用機理提供理論依據。試驗結果表明，與對照組相比，從7～35 日齡，試驗組蛋雞氣管液、膽汁、腸液的IgG、IgM 含量都有提高。氣管液中IgG 含量在28 日齡差異顯著（P＜0.05），IgM 含量在7、14、28、35 日齡差異顯著（P＜0.05）；腸液中IgG含量在14、28 日齡差異顯著（P＜0.05），IgM 含量在7 日齡差異顯著（P＜0.05）。表明在黏膜免疫系統中，試驗組體液免疫功能略有所提高。

[1] 王國杰，韓正康，陳杰，等.大豆黃酮對肉雞生長的影響及其作用機制的研究[J].廣東畜牧獸醫科技，1994，19（3）：17-18.

[2] 郭曉紅，趙恒壽.大豆黃酮對肉仔雞生長相關激素水平與免疫機能的影響[J].動物營養學報，2005，17（2）：63-64．

[3] Cassidy A.Potential risks and benefits of phytoestrogen-rich diets[J].Vitamin and Nutrition Research，2003，73：120-126.

[4] 黃金明，劉兆彬，張利軍.大豆黃酮對急性應激條件下公雞睪丸發育、精液品質和血清甲狀腺素水平的影響[J].中國畜牧雜志，2006，42（5）：23-25．

[5] Erdman J W，Badger T M，Lampe J W，et al.Not all soy products are created equal：caution needed in interpretation of research results[J].Journal of Nutrition，2004，134（5）：1229S-1233S.

[6] Stutz M W，Johnson S L，Judith F R.Effects of diet，bacitracin，and body weight restrictions on the intestine of broiler chicks[J].Poultry science，1983，62（8）：1626-1632.

[7] 高峰，周光宏，韓正康.大豆黃酮對雛公雞生產性能和機體免疫的影響[J].中國家禽，2000，22（10）：8-9.