家族性皮質肌陣攣震顫性癲癇一家系8q23.3-24.1 連鎖分析

劉彩霞 ，孫 維，孫 凱，李 佳，胡國華，史寶和，居乃新，陳秋惠

家族性皮質肌陣攣震顫性癲癇(Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy，FCMTE)又稱良性成人家族性肌陣攣性癲癇(Benigh adult familial myoclonic epilepsy，BAFME)，是一種常染色體顯性遺傳疾病。早些年，日本家系和意大利家系研究將FCTME 致病基因分別粗略的定位8q23.3-24.1、2q11.1-q12.2，國外遺傳分析顯示相關致病基因與上述兩個基因位點不連鎖。我們對該家系的基因位點分析從篩查8q23.3-24.1 開始著手。

1 資料與方法

1.1 一般資料

我們已報道的臨床擬診為家族性皮質肌陣攣震顫性癲癇一家系患者［1］。臨床特點符合以下診斷標準［2］:(1)連續3 代發病，均成年起病，男女均受累，呈常染色體顯性遺傳;(2)表現為肢體遠端震顫、癲癇發作，部分患者于光刺激、驚嚇、情緒刺激時誘發全面強直發作;(3)服β 受體阻滯劑無效，口服苯巴比妥等抗癲癇藥物有效，為非進展病程。(4)體感覺誘發電位支持震顫來源于皮質。

1.2 研究方法與試劑

1.2.1 樣品采集與DNA 提取 在獲得患者(7例)和對照者(患者的直系親屬及配偶13 例，其中1例為可疑病例)知情同意后取外周血5 ml，用家系編號，詳細標記血樣。利用血液基因組DNA 提取試劑盒(天根)提取各樣本基因組DNA 。

1.2.2 選擇與設計微衛星引物 我們根據已報道的8q23.3-24.1 染色體位點，在NCBImapview圖譜中找到這些區域中合適遺傳距離的STR(見表1)。

1.2.3 PCR 反應、產物處理、毛細管電泳及結果收集 對選擇的STR 位點分別合成普通引物及5'標記FAM 的熒光引物，然后進行熒光引物標記的PCR 反應。在ABI PRISM 3730 DNA Analyzer 上用PE 公司的POP-4 分離膠，60 ℃、15KV 下，電泳30 min，選用ABI PRISM GeneMapper Software(Ver3.5)收集實驗數據，進行分子量內標校正和擴增片段大小分析，并讀取全部微衛星標記物等位基因片段的大小。

1.2.4 基因型分析及連鎖分析 利用Gene-MapperV3.5 進行基因分型，確定家系中各個樣本在每個STR 標記處的分型情況。在Linkage5.1 軟件中設定疾病基因頻率、疾病外顯率及擬表型頻率，θ=0～0.5 進行連鎖分析，記錄LOD 值。

2 結果

我們在8q23.3-q24.1 染色體區段選取的5 個STR 位點，在θ=0.0 時這5 個STR 位點與致病基因的兩點LOD 值均＜-2(見表2)。

表1 已報道致病位點所選擇的STR 信息及引物序列

表2 8q23.3-q24.1 染色體區段STR 位點與該家系致病基因兩點連鎖分析

3 討論

家族性皮質肌陣攣震顫性癲癇(FCMTE)又稱良性成人家族性肌陣攣性癲癇(BAFME)、家族性成人肌陣攣癲癇(familial adult myoclonic epilepsy，FAME)等，是一種少見的遺傳性癲癇綜合征，為常染色體顯性遺傳疾病。近年來，隨著遺傳學研究工作的不斷深入，該病逐漸被人們重視起來。迄今，世界已報道了100 多個該病家系，中國、日本、荷蘭、意大利、土耳其等國家均有報道，其中主要分布于日本和意大利兩國，日本發現的家系已經超過60 例。目前，我國也陸續報道了多個該病的家系，我們對研究的這個FCMTE 家系的臨床特點也做了相應報道［1］。

早些年，日本家系和意大利家系研究將致病基因分別粗略的定位于8q23.3-24.1，2p11.1-q12.2［2，3］，近年來在法國、泰國和中國又陸續發現了5p15.31-p15、3q26.32-3q28 和10p15 等多個基因位點［4～6］。參考已報道的文獻，我們在8q23.3-q24.1染色體區段選取了5 個STR 位點，如果選擇的5 個STR 標記與致病基因的兩點連鎖參數LOD 值＜-2，否定該家系的致病基因在此區段;LOD 值＞1，那么本家系致病基因在此區段;如果LOD 值＞3 就能夠肯定該家系的致病基因在此區段。結果在θ=0.0時，我們分析的5 個STR 位點與致病基因的兩點LOD 值均＜-2。根據此數據我們推斷此家系的致病基因位點不在8q23.3-q24.1。但還存在以下可能:(1)我們研究的該家系致病基因不在8q23.3-q24.1。(2)STR 具有人種和地域性，NCBI 數據庫的STR Marks 是以歐洲人群為模板的，而雜合度受遺傳背景的影響比較大，對我國人群針對性不夠強，以致造成STR 位點的等位基因變化范圍、重復單元、雜合度等數據與數據庫報道有一定出入。另外，也可能我們的家系樣本量不足夠大，或是我們選擇的STR 位點在本家系的雜合率相對較低或由于STR 標記在染色體區段密度相對小。在以后的研究工作中我們將繼續增加本病的其他家系或在相應的區域增加樣本量，以累加LOD 值;也可嘗試使用不同的連鎖分析方法對分型結果進行分析，綜合各種計算結果判斷。總之，盡管本報道的實驗結果為陰性，但為FCMTE 的遺傳學研究提供了一份良好的研究資料。

［1］劉彩霞，陳秋惠，居乃新，等.家族性皮質肌陣攣震顫性癲癇一家系［J］.中華醫學遺傳學雜志，2014，31(6):807-808.

［2］Van Rootselaar AF，Van Schaik IN，Van den Maagdenberg AM，et al.Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy:a single syndromic classification for a group of pedigrees bearing common features［J］.Mov Disord，2005，20(6):665-673.

［3］Striano P，Chifari R，Strino S，et al.A new benign adult familial myoclonic epilepsy(BAFME)pedigree suggesting linkage to chromosome 2p11.1-q12.2［J］.Epilepsia，2004，45:190-192.

［4］Licchetta L，Pippucci T，Bisulli F，et al.A novel pedigree with familial cortical myoclonic tremor and epilepsy (FCMTE):clinical characterization，refinement of the FCMTE2 locus，and confirmation of a founder haplotype［J］.Epilepsia，2013，54(7):1298-1306.

［5］Depienne C，Magnin E，Bouteiller D，et al.Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy:the third locus (FCMTE3)maps to 5p［J］.Neurology，2010，74(24):2000-2003.

［6］Yeetong P，Ausavarat S，Bhidayasiri R.et al.A newly identified locus for benign adult familial myoclonic epilepsy on chromosome 3q26.32-3q28［J］.Eur J Hum Genet，2013，21(2):225-228.