4－氨基安替比林分光光度法測(cè)定苯酚滴耳液中苯酚含量

潘 杰，戴學(xué)文，李 晗，房志仲

（1.天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院藥劑科，天津300100；2.天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300070）

論著

4－氨基安替比林分光光度法測(cè)定苯酚滴耳液中苯酚含量

潘 杰1，戴學(xué)文2，李 晗2，房志仲2

（1.天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院藥劑科，天津300100；2.天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300070）

目的：探討一種更為簡(jiǎn)便、快速的測(cè)定苯酚滴耳液中苯酚含量的方法。方法：苯酚與4－氨基安替比林在鐵氰化鉀的作用下，溶液顯橙紅色，在520 nm處呈最大吸收，可直接用分光光度法測(cè)定苯酚的含量。結(jié)果：在520 nm測(cè)定波長(zhǎng)下，苯酚濃度在1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0和4.5μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程：Y=0.1408X－4.4762×10－3（r＝0．999 9，n＝3），測(cè)定方法的平均回收率為99.72%，平均日內(nèi)差和日間差RSD分別為0.44%和0.63%；3批樣品的含量較為均勻，平均含量為0.196 g/ mL，平均RSD為0.63%。結(jié)論：該方法較為簡(jiǎn)便，靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

苯酚；滴耳液；4－氨基安替比林；分光光度法；含量測(cè)定

苯酚滴耳液有消炎、止痛作用，臨床主要用于中耳炎及外耳道炎的治療。苯酚滴耳液作為醫(yī)院制劑收載于《中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范》[1]，該規(guī)范和《中國(guó)藥典》2010年版（二部）[2]均采用溴量滴定法測(cè)定其含量，溴量滴定法操作較繁瑣，且溴有揮發(fā)性及一定的毒性，給分析測(cè)定帶來(lái)不便，不適宜醫(yī)院制劑快速分析的需要。另?yè)?jù)文獻(xiàn)報(bào)道，也可采用紫外分光光度法[3-5]及高效液相色譜法[6]測(cè)定苯酚的含量。苯酚于pH10.0±0.7介質(zhì)中，在鐵氰化鉀存在下，與4-氨基安替比林反應(yīng)，生成橙紅色的吲哚酚氨基安替比林染料[7]，其水溶液在520 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，本文采用4－氨基安替比林分光光度法測(cè)定苯酚滴耳液中苯酚含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(U3310，日本島津公司)；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（T6-新世紀(jì)，北京普析通用儀器有限公司）；電子分析天平（BP210S，北京賽多利斯天平有限公司）。

1.1.2 試藥 苯酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100509200401）；苯酚（江門(mén)市恒健藥業(yè)有限公司，批號(hào)：081001）；甘油（北京燕京藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)：20090111）；苯酚滴耳液（由天津醫(yī)科大學(xué)藥劑學(xué)教研室制備，批號(hào)：20130916；20130918；20130925）；4－氨基安替比林、鐵氰化鉀、氯化銨和氨水為市售分析純，重蒸水自制。

1.2 方法

1.2.1 試劑配制

1.2.1.1 苯酚標(biāo)準(zhǔn)液的配制：稱取 1.00 g苯酚（C6H5OH）溶于重蒸水，定量移入1 000mL量瓶中并定容，得到苯酚儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液1.0mL，置100mL量瓶中，用重蒸水定容，得到10μg/mL苯酚標(biāo)準(zhǔn)液。

1.2.1.2 緩沖溶液的配制：稱取20 g氯化銨(NH4Cl)溶于100mL氨水中，密塞，置冰箱中保存。

1.2.1.3 4-氨基安替比林溶液的配制：稱取2 g 4-氨基安替比林（C11H13N3O）溶于水中，稀釋至100mL置冰箱中保存。

1.2.1.4 鐵氰化鉀溶液的配制：稱取8 g鐵氰化鉀（K3[F e（CN）6])溶于重蒸水稀釋至100mL。

1.2.2 樣品溶液的配制 取苯酚滴耳液至5mL量瓶中定容，將其定量轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，以重蒸水定容；再精密量取該稀釋液1.0mL至100mL量瓶中以重蒸水定容，得到待測(cè)樣品溶液；平行配制空白對(duì)照溶液（去除苯酚）。

1.2.3 苯酚滴耳液及空白對(duì)照溶液吸收?qǐng)D譜的測(cè)定 分別精密量取“1.2.2項(xiàng)下”待測(cè)樣品溶液5.0 mL置50mL量瓶中，加入2.0mL緩沖溶液，混勻，再依次加入4－氨基安替比林溶液1.0mL，鐵氰化鉀溶液1.0mL，重蒸水定容。精密量取空白溶液5mL，加入2.0mL緩沖溶液，混勻，再依次加入4－氨基安替比林溶液1.0mL，鐵氰化鉀溶液1.0mL，重蒸水定容，作空白對(duì)照。分別在520 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸收度。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密量取“1.2.1.1項(xiàng)下”苯酚標(biāo)液5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5、20.0mL置50mL量瓶中，分別加入2.0mL緩沖溶液，混勻，以下操作同“1.2.3項(xiàng)下”。在520 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸收度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)做線性回歸，計(jì)算回歸方程。

1.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 隨機(jī)抽取苯酚滴耳液樣品（批號(hào)：20130918），操作同“1.2.3項(xiàng)下”，測(cè)定吸光度值，室溫下放置，分別在0、1、2、4、6 h測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD。

1.2.6 精密度試驗(yàn) 照“1.2.3項(xiàng)下”操作，分別對(duì)3批樣品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算RSD。

1.2.7 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的苯酚滴耳液樣品（批號(hào)：20130918），精密加入不同量的苯酚標(biāo)準(zhǔn)液，照“1.2.2項(xiàng)下”和“1.2.3項(xiàng)下”操作方法制得待測(cè)液，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。

1.2.8 含量測(cè)定 照“1.2.2項(xiàng)下”分別配制3批待測(cè)樣品溶液，以下操作同“1.2.3項(xiàng)下”，遂行空白對(duì)照。在520 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度A值，代入回歸方程計(jì)算各樣品中苯酚的含量。

2 結(jié)果

2.1 最大吸收波長(zhǎng)確定 在300～700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)分別進(jìn)行光譜掃描。苯酚滴耳液樣品在520.8 nm處有最大吸收，而空白對(duì)照溶液在該波長(zhǎng)下吸光度＜0.01，故選520 nm為測(cè)定波長(zhǎng)，見(jiàn)圖1。

圖1 樣品與空白對(duì)照液的掃描圖Fig 1 Scanning chromatogramsof the sampleand blank

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值如表1所示，回歸方程：Y=0.140 8X－4.476 2×10-3，r= 0．999 9（n＝3）。

表1 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值Tab 1 Absorbancevaluesof different standard concentrations

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 吸光度在6 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD= 0.44%。

2.4 精密度試驗(yàn) 每批配制3份樣品進(jìn)行測(cè)定，平均日內(nèi)差和日間差RSD分別為0.44%和0.63%。

2.5 回收率試驗(yàn) 按照80%、100%和120%3種添加量，精密量取苯酚標(biāo)液1.6、2.0和2.4mL（相當(dāng)于含苯酚 16μg、20μg和24μg），平均回收率為99.72%，RSD為0.33%，見(jiàn)表2。

表2 樣品回收率測(cè)定結(jié)果Tab 2 Recovery testsof samples

2.6 含量測(cè)定 3批樣品的含量較為均勻，分別為0.197 5 g/mL、0.199 9 g/mL和0.190 6 g/mL，平均RSD為0.63%，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果Tab 3 Content determ ination of samples

3 討論

配制樣品溶液時(shí)，苯酚滴耳液為甘油劑，藥液黏稠度較大，無(wú)法用移液管量取，且苯酚濃度較大，以5mL量瓶定量量取后轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中再稀釋，可以消除取樣時(shí)造成的誤差。

文獻(xiàn)報(bào)道曾在270 nm處測(cè)定苯酚的含量[5]，但本試驗(yàn)中苯酚滴耳液中的甘油在270 nm處也有吸收，而甘油+4-氨基安替比林+鐵氰化鉀反應(yīng)后，在520 nm處甘油的吸光度＜0.01，以甘油做空白對(duì)照，可以消除干擾。

與溴量法測(cè)定含量結(jié)果比較（3個(gè)批號(hào)的測(cè)定結(jié)果分別為0.196 5、0.198 9和0.191 0 g/mL），經(jīng)t檢驗(yàn)（均P＞0.05），兩種測(cè)定方法一致，無(wú)差異，該方法可以作為醫(yī)院制劑室對(duì)該制劑的快速檢驗(yàn)方法。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局.《中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范》[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1995：155-155

[2]藥典委員會(huì).《中國(guó)藥典》2010年版（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010：325-326

[3] 盧今,程鋼,屈建,等.爐甘石洗劑的質(zhì)量控制[J].中國(guó)藥師, 2013,16(7)：1012

[4]朱紅旗,薛子坤.紫外分光光度法測(cè)定苯酚甘油滴耳液中苯酚的含量[J].齊魯藥事,2006,25(6)：344

[5]朱鐵梁,楊波,郝素云.紫外分光光度法測(cè)定苯酚滴耳液的含量[J].武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,19(8)：605

[6]陳曉峰,沈花.高效液相色譜法測(cè)定消炎止癢醑中苯酚的含量[J].抗感染藥學(xué),2011,8(4)：268

[7]國(guó)家環(huán)境保護(hù)局.水質(zhì)揮發(fā)酚的測(cè)定-蒸餾后4-氨基安替比林分光度法[S].《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》,GB 7409-87,1987：130-138

（2014-05-09收稿）

Determ ination of phenol in phenolear dropsby 4-am ino-antipyrine spectrophotometry

PAN Jie1,DAIXue-wen2,LIHan2,FANGZhi-zhong2
（1．Department of Ph armacy,Tianjin Center Hospital of Obstetrics and Gynecology,Tianjin 300100,China;2.Department of Pharmacy, College of Pharmacy,Tianjin MedicalUniversity,Tianjin Key Laboratory on Technologies Enabling DevelopmentofClinical Therapeutics and Diagnostic s（Theranostics），Tianjin 300070,Chin a）

Objective:To develop a simple,effectivemethod forcontentdetermination ofphenol in phenoleardrops.Methods:Under the effectof potassium ferricyanide,the solution containing phenol and 4-aminoantipyrene showed orange red and themaximum absorption wavelength was 520 nm.The contents was directly determined by spectrophotometric method.Results:With themaximum absorption wavelength being 520 nm,the linear range ofphenolwas1.0～4.5μg/mL (r＝0.999 9,n=3),and the regression equationwas Y=0.1408X－4.4762×10-3.Theaverage recovery ratewas99.72%,and RSD ofintra-day and inter-day precisionwere0.44%and 0.63%,respectively.No significantdifferencewas found in the contentsof thesamplesdetermined byestablishedmethod,with theaverage contentbeing0.196 g/mL and RSD 0.63%.Conclusion:Theestablishedmethod issimple,efficientand accurate.

phenol;ear drops;4-amino-antipyrine;spectrophotometry;contentdetermination

R927.2

A

1006－8147（2015）01-0087-03

潘杰（1969-），男，主管藥師，研究方向：臨床藥學(xué)；通信作者，房志仲，E-mail:fangzhizhong@tijmu.edu.cn。