鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性診斷分析

鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性診斷分析

張華1，賈寧2

(1.首都醫(yī)科大學(xué)大興醫(yī)院 檢驗(yàn)科,北京102600;2.中國人民解放軍總醫(yī)院 感染管理與疾病控制科,北京100853)

不動(dòng)桿菌是一種不發(fā)酵糖類、無法運(yùn)動(dòng)、其氧化酶為陰性的革蘭陰性桿菌[1]。檢測發(fā)現(xiàn)其在自然界以及醫(yī)療環(huán)境中分布廣泛，最常見的為鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinctobactcr Baumanii)，僅次于銅綠假單孢菌，其陽性檢出率位于非發(fā)酵菌中的第二位[2]。由于鮑曼不動(dòng)桿菌能夠存活于大多數(shù)生態(tài)環(huán)境中，且易獲得多重耐藥，由其引起的院內(nèi)感染呈逐年不斷上升的趨勢[3]。當(dāng)免疫功能低下的病人獲得鮑曼不動(dòng)桿菌侵襲時(shí)，可造成肺炎、傷口及尿路感染、腹膜炎等嚴(yán)重甚至是致命性的感染[4]。本研究現(xiàn)回顧性分析我院檢驗(yàn)科2012年3月-2014年6月分離的653株鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性診斷結(jié)果，為我院預(yù)防鮑曼不動(dòng)桿菌所致感染提供數(shù)據(jù)參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料和方法

1.1　菌株來源

抽選我院2012年3月-2014年6月送至檢驗(yàn)室的各臨床標(biāo)本，分離653株鮑曼不動(dòng)桿菌。標(biāo)本主要為痰液、分泌物、胸腹水、全血、咽拭子、膿液及尿液等。

1.2　儀器和試劑

采用法國VITEK2 COMPACT全自動(dòng)細(xì)菌分析儀,采用M—H細(xì)菌分離培養(yǎng)基。藥敏紙片主要有阿米卡星、頭孢他啶、環(huán)丙沙星、多黏菌素E、氨芐西林—舒巴坦、頭孢吡肟、慶大霉素、亞胺及美羅培南、哌拉及替卡西林、替卡西林—克拉維酸、妥布霉素、復(fù)力新諾明、哌拉西林—他唑巴坦等。

1.3　細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)

1.3.1將標(biāo)本接種于已經(jīng)配置好的基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，放置在溫度為35℃的普通孵箱和8%CO2孵箱中進(jìn)行18-24 h的孵育，然后取出細(xì)菌鑒定。

1.3.2采用0.9%的生理鹽水將純菌落制成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳乙?，采用法國VITEK2 COMPACT全自動(dòng)細(xì)菌分析儀鑒定菌種，再與革蘭染色、菌落形態(tài)以及氧化酶等結(jié)果結(jié)合進(jìn)行綜合考慮，鑒定為鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinctobactcr Baumanii)，銅綠假單胞菌ATCC27853和大腸埃希菌ATCC25922為質(zhì)控菌株。

1.3.4采用無菌棉拭子蘸取上述已配置好的菌懸液，在試管壁上進(jìn)行數(shù)次擠壓，以便能夠擠去多余菌液，然后將其涂布于整個(gè)M-H培養(yǎng)基的平板上，重復(fù)兩次，注意每次涂布時(shí)將平板旋轉(zhuǎn)60度，使平板能涂布均勻，最后涂布平板四周邊緣。將涂有菌液的平板置于室溫下進(jìn)行3-5 min的干燥，等水分吸干后，然后夾取藥敏紙片貼于平板表面，注意嚴(yán)格無菌操作，然后用鑷尖輕壓藥敏紙片使其充分平貼于瓊脂表面上，每張藥敏紙片所使用的鑷子在操作完成后要進(jìn)行常規(guī)消毒滅菌，以防發(fā)生污染。每張藥敏紙片的間距需≧24 mm，中心和平板邊緣的距離應(yīng)>15 mm，直徑為90 mm的平板所貼藥敏紙片不超過6張。反轉(zhuǎn)已經(jīng)貼好紙片的平板，然后放于35℃的普通孵箱進(jìn)行18-24 h的孵育，最后量取每一個(gè)紙片的抑菌圈直徑。藥敏結(jié)果參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)[5，6]的規(guī)定進(jìn)行判斷，耐藥為(R)。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

根據(jù)CLSI(2009年)版指南文件判讀藥敏試驗(yàn)結(jié)果，采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以n%表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1　653株鮑曼不動(dòng)桿菌的標(biāo)本來源

從鮑曼不動(dòng)桿菌的標(biāo)本來源看，痰液及咽試子比例較高，詳見表1。

表1　鮑曼不動(dòng)桿菌的標(biāo)本來源[n(%)]

2.2　鮑曼不動(dòng)桿菌的感染科室分布

從鮑曼不動(dòng)桿菌的感染科室分布來看，以ICU和呼吸內(nèi)科的檢出較多，其他科室檢出率各不同，詳見表2。

表2　鮑曼不動(dòng)桿菌的感染科室分布[n(%)]

2.3　鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性分析

鮑曼不動(dòng)桿菌對多數(shù)抗菌藥物呈現(xiàn)耐藥趨勢，對多黏菌素E較為敏感，詳見表3。

表3　鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性分析[n(%)]

3討論

鮑曼不動(dòng)桿菌可引起患者全身多部位多系統(tǒng)感染。本研究檢測結(jié)果顯示，在分離出的653株鮑曼不動(dòng)桿菌中，標(biāo)本來源以痰液及咽拭子構(gòu)成比最高(78.4%)，提示該菌主要引起呼吸道感染，臨床應(yīng)加強(qiáng)環(huán)境消毒、呼吸系統(tǒng)感染的控制。本研究表2還顯示，分離的653株鮑曼不動(dòng)桿菌中，感染科室中，以ICU(55.6%)和呼吸內(nèi)科(21.9%)為主，符合相關(guān)報(bào)道。原因可能與這些科室的病人大多數(shù)病情危重、免疫功能低下、侵襲性操作較多，再加上長時(shí)間的住院時(shí)間，各種抗菌藥物的應(yīng)用時(shí)間較長，大大增加了感染機(jī)會(huì)等有關(guān)。因此臨床應(yīng)規(guī)范及加強(qiáng)對這些病區(qū)的管理，實(shí)施有效的消毒隔離以控制本菌感染。

廣譜抗菌藥物在臨床中的廣泛使用易引起鮑曼不動(dòng)桿菌產(chǎn)生耐藥性。本研究回顧性調(diào)查顯示，分離的653株鮑曼不動(dòng)桿菌中，耐藥率排前的為環(huán)丙沙星(91.67%)、哌拉西林(90.76%)、復(fù)力新諾明(90.62%)、慶大霉素(90.12%)。隨著耐藥性不斷增高，亞胺及美羅培南(70.65%、71.65%)等碳青霉烯類的耐藥性亦顯著提升，其耐藥機(jī)制可能與OXA酶、金屬酶等產(chǎn)碳青霉烯酶有關(guān)，外膜孔蛋白降低及青霉素結(jié)合蛋白發(fā)生變化也是該菌耐亞胺及美羅培南等抗菌藥物的重要機(jī)制。磺胺類復(fù)方新諾明(90.62%)，氨基糖苷類慶大霉素(90.12%)，頭孢他啶(88.56%)、哌拉西林(90.76%)、頭孢吡肟(80.45%)、替卡西林(89.54%)等β-內(nèi)酰胺類以及喹諾酮類環(huán)丙沙星(91.67%)的耐藥率超過80%。對β-內(nèi)酰胺的耐藥機(jī)制主要是因β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生，此外外膜蛋白含量降低及青霉素結(jié)合蛋白發(fā)生改變而致通透性下降亦是其重要因素[7]。對氨基糖苷類耐藥可能是因質(zhì)?；蛘呤寝D(zhuǎn)座子編碼的鈍化酶導(dǎo)致抗菌素失去活性等機(jī)制有關(guān)。對喹諾酮類耐藥是因細(xì)胞外膜蛋白F減少或者是因病原菌DNA螺旋酶A或B亞單位發(fā)生突變而產(chǎn)生的，也可能與該菌的藥物主動(dòng)外排增高病理機(jī)制等存在相關(guān)性[8]。對磺胺類耐藥主要是由于細(xì)菌改變患者二氫蝶酸合成酶，抗菌藥物作用被減弱，藥物破壞失活，而使鮑曼不動(dòng)桿菌對磺胺藥物不敏感，導(dǎo)致磺胺類藥物的耐藥性[9，10]?？傊?，該菌己成為多重耐藥菌株，本研究顯示敏感性最高的為多黏菌素E(97.98%)。但由于多黏菌素E的腎臟及神經(jīng)系統(tǒng)毒性較大，不推薦臨床廣泛使用。

綜上所述，鮑曼不動(dòng)桿菌存在不同程度的抗菌藥物高度及多重耐藥性，檢驗(yàn)科在日常工作中應(yīng)加強(qiáng)對其的臨床耐藥性監(jiān)測，避免臨床泛耐藥菌株的傳播流行，指導(dǎo)臨床合理選用抗菌藥。

參考文獻(xiàn)：

[1]李海蘭,張亞莉,王茵茵,等.4起耐藥鮑曼小動(dòng)桿菌醫(yī)院感染聚集性病例調(diào)查[J]．中國感染控制雜志，2011,10(5):341．

[2]任波,周麗娟,劉廣彬,等.鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性研究[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2013,17(10):1886.

[3]鄧麗華,施德仕,楊榮勝,等.鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性及β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因的研究[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2013,17(7):1180.

[4]黃曉潔,劉進(jìn).院內(nèi)鮑曼不動(dòng)桿菌性腦膜炎40例臨床分析[J].中華傳染病雜志,2012,30(7):425.

[5]凌保東.鮑曼不動(dòng)桿菌抗生素多重耐藥性:耐藥機(jī)制與感染治療對策[J].中國抗生素雜志,2010,35(4):241.

[6]王瑋瑋.多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011,32(21):2487.

[7]Nageeb W,Kamel M,Zakaria S,et al.Phenotypic characterization of Acinetobacter baumannii isolates from intensive care units at a tertiary-care hospital in Egypt[J]．East Mediterr Health J,2014,20(3):203.

[8]Enfield KB,Huq NN,Gosseling MF,et al.Control of Simultaneous Outbreaks of Carbapenemase-Producing Enterobacteriaceae and Extensively Drug-Resistant Acinetobacter baumannii Infection in an Intensive Care Unit Using Interventions Promoted in the Centers for Disease Control and Prevention 2012 Carbapenemase-Resistant Enterobacteriaceae Toolkit[J]．Infect Control Hosp Epidemiol,2014,35(7):810.

[9]張正銀,竇蓉,徐偉紅.2006-2009年鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥趨勢分析[J]．臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010,9(8):638．

[10]周月清,陸開來,糜祖煌,等.鮑曼不動(dòng)桿菌TEM基因及氨基糖苷類修飾酶基因初步研究[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(2):200.

收稿日期：(2014-08-10)

作者簡介：張華(1973-)，女，北京人，北京市首都醫(yī)科大學(xué)大興醫(yī)院檢驗(yàn)科主管檢驗(yàn)師，研究方向：微生物。

文章編號(hào)：1007-4287(2015)01-0020-03

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金(30972523)