組蛋白去乙?；?、7在腎癌組織中的表達及臨床意義探討

組蛋白去乙?；?、7在腎癌組織中的表達及臨床意義探討

劉婷婷1，左文東2，宋立友3， 晉學飛4

(1.吉林省軍隊離退休干部療養(yǎng)中心，吉林 長春130000；2.吉林省前衛(wèi)醫(yī)院；

3.吉林省腫瘤醫(yī)院；4.吉林大學中日聯(lián)醫(yī)院)

腎癌是泌尿外科常見的惡性腫瘤之一，又叫腎細胞癌或腎腺癌，是一種起源于腎小管上皮細胞的腎實質(zhì)性腫瘤。目前，對于腎癌的發(fā)病機制，國內(nèi)外仍無統(tǒng)一意見，但都認同腎癌的發(fā)生是多因素共同參與形成的[1]。組蛋白去乙?；?HDAC)是一種蛋白酶，在人體內(nèi)主要控制染色體的結(jié)構(gòu)修飾和調(diào)節(jié)并控制基因的表達。在細胞核中，組蛋白的乙?；腿ヒ阴；乃俾蚀笾孪嗤?，處于動態(tài)平衡，其速率就是由組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶(HAT)和組蛋白去乙?；?HDAC)共同調(diào)控的。HDAC-1在細胞周期中，主要起到控制細胞周期和轉(zhuǎn)錄因子的分化與增殖；HDAC-7近年來在多種腫瘤中都發(fā)現(xiàn)了其有過表達的情況，王君等人認為HDAC-7可以作為診斷腎癌的腫瘤標記物之一，并且可以檢測其預(yù)后情況[2]。本次研究著重探討HDAC-1和HDAC-7在腎癌組織中的表達情況及其臨床意義，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1材料與方法

1.1　一般資料

隨機選取2013年1月至7月期間，我院泌尿外科收治的、經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為腎癌的患者67例。其中男性44例，女性23例，年齡范圍48-72歲，平均年齡(57.3±9.6)歲。透明細胞癌51例，顆粒細胞癌9例，混合細胞癌5例，未分化細胞癌2例。根據(jù)臨床TNM分期，Ⅰ期12例，Ⅱ期15例，Ⅲ期29例，Ⅳ期11例。根據(jù)病理分級標準：Ⅰ級為分化良好，Ⅱ級為中等分化，Ⅲ級為分化不良，其中Ⅰ級24例，Ⅱ級28例，Ⅲ級15例。

1.2　研究方法

術(shù)中尋找目標瘤體，沿瘤體邊緣選取無壞死的腫瘤組織，取2-4 mm作為病例標本[3]，在癌旁取正常組織2-4 mm作為正常標本，用液氮保存，送檢。如不能及時送檢，將標本保存在-80℃的冰柜內(nèi)。

標本用10%的甲醛固定，脫水、包埋，做厚度為3 μm的切片3-5張。采用免疫組織化學法(S-P法)對標本切片進行染色，切片脫蠟、水化后，用3%的過氧化氫溶液對過氧化物酶進行阻斷，持續(xù)15 min。HDAC-1選取鼠抗人HDAC-1單抗，HDAC-7選取兔抗人HDAC-7單抗，陰性對照選用濃度為1%的PBS緩沖液作為一抗，利用蘇木精復(fù)染后，用DAB試劑盒顯色后用顯微鏡觀察標本切片。所有試劑盒均購自上海研晶生物科技有限公司，所有操作均按照相應(yīng)說明書嚴格進行操作。

陽性表達判定方法：細胞染色標準：在細胞漿內(nèi)出現(xiàn)淺黃色、棕黃色或黃褐色顆粒為染色細胞。在400倍光學顯微鏡下，每張切片隨機選取4個視野，每個視野對1000個細胞進行染色計數(shù)，觀察每個標本的所有切片，計算平均染色細胞數(shù)，作為該例標本的染色數(shù)量。陰性(-)：染色細胞數(shù)量<25%；弱陽性(+)：染色細胞數(shù)量在25%-75%；強陽性(++)：染色細胞數(shù)量>75%。所有標本標本均由兩位病理專家獨立審閱并給出結(jié)果，當兩位專家意見不一致時，請第三位專家獨立給予判定。陽性率=(表達陽性標本數(shù)+表達強陽性標本數(shù))/該組總標本數(shù)×100%。

1.3　統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0軟件對所有實驗所得數(shù)據(jù)進行處理，對計數(shù)資料用卡方檢驗，對計量資料用t檢驗，組間比較采用秩和檢驗，取α=0.05作為檢驗水準。

2結(jié)果

2.1　HDAC-1和HDAC-7在腎癌組織和癌旁正常組織中的表達情況

絕大部分腎癌組織中觀察到了HDAC-1和HDAC-7的表達情況。HDAC-1染色顆粒主要出現(xiàn)在細胞漿內(nèi)，HDAC-7染色顆粒主要出現(xiàn)在腎小管上皮細胞細胞核中，還有部分出現(xiàn)在腎小球上皮細胞細胞核中。HDAC-1在腎癌組織中的陽性表達率為80.60%，其中弱陽性21例，強陽性33例，而正常組織中只有7例表達弱陽性，其余均為陰性表達，HDAC-1在腎癌組織中的陽性表達率顯著高于正常組織(P<0.05)。HDAC-7在腎癌組織中陽性表達率為61.19%，其中弱陽性29例，強陽性12例，在正常組織中僅有8例表達弱陽性，其余均表達陰性，HDAC-7在腎癌組織中的陽性表達率顯著高于正常組織(P<0.05)。

2.2　不同臨床分期HDAC-1和HDAC-7的表達情況

13例陰性表達的HDAC-1主要集中在臨床分期為Ⅰ期和Ⅱ期的標本中，分別有7例和6例，而Ⅲ期和Ⅳ期標本中HDAC-1全部為陽性表達，隨著臨床分期的提高，HDAC-1的陽性表達率也隨之升高，組間比較具有顯著差異(P<0.05)。Ⅰ期和Ⅱ期的標本中，HDAC-7多為陽性表達，在Ⅲ期和Ⅳ期標本中，HDAC-7多為陰性表達，隨著臨床分期的提升，HDAC-7的陽性表達率也隨之下降，組間具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，見表1。

表1　不同臨床分期HDAC-1和HDAC-7的表達情況(n)

注：與Ⅰ期比較，*P<0.05；與Ⅱ期比較，#P<0.05

2.3　不同病理分級HDAC-1和HDAC-7的表達情況

病理分級為Ⅰ級的標本中，僅有約1/2的標本HDAC-1表達陽性，而病理分級為Ⅱ級和Ⅲ級的標本中，絕大部分標本HDAC-1呈陽性表達，隨著病理分級的提高，HDAC-1的陽性表達率也隨之提高，組間具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。病理分級為Ⅰ級的標本中，絕大多數(shù)標本HDAC-7呈陽性表達，隨著病理分級的提高，HDAC-1的陽性表達率隨之降低，組間具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，見表2。

注：與Ⅰ級比較，*P<0.05；與Ⅱ級比較，#P<0.05

3討論

組蛋白去乙?；?HDAC)是一種類蛋白酶，其主要功能是在細胞染色體修飾過程中和基因表達時發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，同時對組蛋白的去乙?；^程起到調(diào)控作用，使之與組蛋白的乙酰化速率接近，從而達到一個動態(tài)平衡[4，5]。根據(jù)與酵母菌的同源性，HDAC可以分為三型，HDAC-1屬于Ⅰ型，HDAC-7屬于Ⅱ型。近年來，HDAC-1在多種腫瘤中(如結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌等)被發(fā)現(xiàn)有高表達的情況，Yu J等人在研究中發(fā)現(xiàn)，HDAC-1有促進腫瘤細胞增殖的能力，并且與腫瘤細胞對周圍組織的浸潤和向遠處轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[6]。作為第一個在哺乳類動物細胞中發(fā)現(xiàn)的HDAC，HDAC-1被認為具有調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的動能。魏曙光等人在研究中發(fā)現(xiàn)，HDAC-1幾乎參與了整個細胞周期，并且，HDAC-1可以通過對線粒體轉(zhuǎn)位的控制，來促進癌基因的活化和表達[7]。而Takashi等人在對腫瘤細胞中HDAC-1進行干涉的實驗中發(fā)現(xiàn)，缺少HDAC-1的腫瘤細胞，有絲分裂過程會被抑制，取而代之的是Caspase-3的激活，這種改變可以直接導(dǎo)致腫瘤細胞進入凋亡程序，故提出了HDAC-1抑制劑來治療腫瘤的新觀點[8]。HDAC-7在體內(nèi)的作用是與肌細胞結(jié)合因子-2(MEF-2)結(jié)合，對MMP-10(基質(zhì)金屬蛋白酶-10)的表達起到抑制作用，MMP-10可以講解細胞外基質(zhì)，這種作用在血管內(nèi)皮細胞尤為明顯[9]。HDAC-7通過上述作用將內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞緊密的連接。Glaser在研究中發(fā)現(xiàn)，若HDAC-7的表達發(fā)生障礙，則內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞之間的粘附作用會大大降低[10]。本次研究著重探討HDAC-1和HDAC-7在腎癌組織中的表達情況，為腎癌的治療提供新思路。

從本次研究的結(jié)果中可以看出，腎癌組織中HDAC-1和HDAC-7的陽性表達率均顯著高于正常組織(P<0.05)，正常組織中未發(fā)現(xiàn)HDAC-1和HDAC-7有強陽性表達，僅有7例和8例的陽性表達。而在對不同臨床分期和病理分級的腫瘤標本的檢查中發(fā)現(xiàn)，隨著臨床分級和病理分期的提高，HDAC-1的陽性表達率逐漸升高，而HDAC-7的陽性表達率逐漸下降。可以認為HDAC-1在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起到了一定作用，正是由于HDAC-1的高表達，才使得抑癌基因被抑制，而原癌基因被激活，隨著腫瘤的生長，HDAC-1的表達越來越強烈，可能是腫瘤產(chǎn)生了某種刺激HDAC-1表達的因子，兩者互成因果。本次研究只對HDAC-1的表達做了定性研究，至于其定量檢測可不可以作為腎癌診斷和評估預(yù)后的標志，還有待進一步研究。本次研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，隨著臨床分期和病理分級的提高，HDAC-7的陽性表達率隨之降低。這說明HDAC-7的陽性表達率與腫瘤的自然病程和惡性程度均相關(guān)。腫瘤細胞生長十分迅速，而當其向遠處發(fā)生轉(zhuǎn)移時，需要有血管的支持，而HDAC-7的陽性表達率逐漸降低，可能腫瘤血管向外發(fā)生轉(zhuǎn)移時的一種特殊變化，也可以認為有其它的促癌因素抑制了HDAC-7的表達。

綜上，HDAC-1和HDAC-7在腎癌組織中的表達陽性率顯著高于正常腎組織；臨床分期和病理分級越高，HDAC-1表達陽性率越高，HDAC-7表達陽性率越低。HDAC-1和HDAC-7可能是促進腎癌形成的一種因子。

參考文獻：

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[8]Takashi Yoshioka,Shingo Yogosawa,Takeshi Yamada,et al.Combination of a novel HDAC inhibitor OBP-801/YM753 and a PI3K inhibitor LY294002 synergistically induces apoptosis in human endometrial carcinoma cells due to increase of Bim with accumulation of ROS[J].Gynecologic Oncology,2013,13:468.

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收稿日期：(2013-12-14)

文章編號：1007-4287(2015)01-0115-03